用液相等电聚焦电泳纯化藻蓝蛋白亚基

以纯藻蓝蛋白(C-phycocyan in,C-PC)为材料,采用Rotofor系统进行液相等电聚焦(L iqu id-phase iso-eletric focusing,LP-IEF)电泳纯化C-PC的α,β亚基,探讨蛋白质亚基纯化的制备电泳(Preparative eletro-phoresis)技术.结果显示,样品经2次等电聚焦电泳后,C-PC的α,β亚基分别浓集在pH=4.9和pH=4.1附近,平板超薄等电聚焦(Slab u ltra th in IEF)和SDS-PAGE电泳鉴定表明分别为高纯度的C-PCα,β亚基.提示LP-IEF是分离纯化等电点差异蛋白质活性亚基的简便有效的方法.

液相等电聚焦电泳纯化燕窝蛋白质

以市售燕窝为材料,采用MicroRotofor系统进行液相等电聚焦电泳(liquid-phase isoelectric focusing,LIEF)纯化燕窝蛋白质,等电聚焦电泳后对收集到10个小室的样品进行SDS凝胶电泳分析。结果显示,燕窝蛋白质提取液中的一些胶状物聚集在聚焦槽酸端第1～4样品室,第9、10样品室杂质也较多,合并第5～8样品室的样品,即得纯化后的燕窝蛋白用于后续双向电泳分析。液相等电聚焦电泳预分离纯化技术结合双向电泳技术,对4个燕窝蛋白质进行较好的分离,在2-DE胶上检测到约30～60个蛋白质点。由此可见,液相等电聚焦电泳预分离技术是燕窝蛋白质进行2-DE分离前的重要纯化手段。

液相等电聚焦结合乙酰化标记在比较蛋白质组学中的应用

建立了液相等电聚焦,一维电泳分离以及肽段乙酰化同位素标记的新技术,此技术在1∶5-5∶1范围内具有较好的动态范围（误差小于20%）。本方法不仅可以提高比较蛋白质组分离的通量,并有助于低丰度差异蛋白中的检出;并成功应用于正常肝脏与癌变肝脏组织的低丰度、偏碱性蛋白的差异比较蛋白质组分析,鉴定出16种差异蛋白,结果令人满意。

非液相等电聚焦蛋白质分离技术获取人热休克蛋白-多肽复合物

目的:利用非液相等电聚焦蛋白质分离技术(FS-IEF)从肝细胞癌(HCC)患者的癌组织的裂解液内提纯热休克蛋白多肽复合物(HSP-PCs)。制备热休克蛋白(HSP)肿瘤疫苗。方法:制备HCC细胞蛋白,经等电聚焦蛋白质分离获得目的蛋白,SDS-PAGE电泳和Western-Blot鉴定为热休克蛋白多肽复合物。利用紫外吸收法测定其浓度。结果:利用FS-IEF从HCC肿瘤细胞裂解液中成功分离提纯出HSP-PCs,分离的富含分子伴侣的细胞裂解物(CRCL)经鉴定为CRT、HSgpP96、HSP90和HSP70。这些分子伴侣蛋白沿pH梯度集中分布于4～7号收集管中,pH跨度为4.4～5.2。1g肝癌组织经液相等电聚焦分离后可产生1000μg的热休克蛋白疫苗。结论:通过非液相等电聚焦蛋白质分离技术可获得纯化的所需量的HSP-PCs。

液相等电聚焦结合双向凝胶电泳分离碱性蛋白

在蛋白组学研究中,经典的双向凝胶电泳法(2-DE)对碱性蛋白及低丰度蛋白的分离存在技术障碍,但预分离技术的应用可弥补其缺陷.液相等电聚焦可有效地分离富集复杂蛋白样品.碱性胶条用于2-DE可极大地提高蛋白上样量和凝胶分辨率.将上述两种技术相结合用于碱性蛋白质和低丰度蛋白质的分离鉴定,可使碱端区域双向凝胶图谱质量显著提高,蛋白点更清晰且点数增多,质谱鉴定确信度提高,碱性蛋白和低丰度蛋白质谱鉴定成功率提高,对于蛋白组学研究具有一定的意义.

液相等电聚焦技术结合液相色谱-质谱联用技术分析鼠肝全蛋白

利用液相等电聚焦预分离技术结合液相色谱-质谱(LTQ-Orbitrap)联用技术,研究了C57小鼠肝脏的蛋白质表达谱.质谱分析结果采用Max Quant1.4.1.2软件搜索数据库,共鉴定出3474个蛋白(2个以上唯一肽段).用DAVID在线工具、GO分类工具和IPA软件对鉴定蛋白进行生物信息学分析,单独发现832个新蛋白.研究结果表明,通过基于等电点和亲疏水性的两维分离,提高了质谱鉴定蛋白数,可以鉴定出更多低丰度蛋白.

燕窝蛋白质样品制备方法的比较及其双向电泳分析

燕窝水提及丙酮沉淀蛋白质经液相等电聚焦电泳纯化后,再经双向电泳分离获得了质量较佳的2-DE图谱,由此可见液相等电聚焦电泳是对燕窝蛋白质进行纯化的有效手段。对纯化后的2个白燕窝和1个血燕窝水提及丙酮沉淀蛋白质进行了双向电泳分析,结果显示两种方法制备蛋白质获得的2-DE图谱非常相似。燕窝水提蛋白质经丙酮沉淀制备样品时间较透析、冻干所需的时间短,这对于成分复杂蛋白质提取率较低的血燕窝则更为适用。