用液相等电聚焦电泳纯化藻蓝蛋白亚基

以纯藻蓝蛋白(C-phycocyan in,C-PC)为材料,采用Rotofor系统进行液相等电聚焦(L iqu id-phase iso-eletric focusing,LP-IEF)电泳纯化C-PC的α,β亚基,探讨蛋白质亚基纯化的制备电泳(Preparative eletro-phoresis)技术.结果显示,样品经2次等电聚焦电泳后,C-PC的α,β亚基分别浓集在pH=4.9和pH=4.1附近,平板超薄等电聚焦(Slab u ltra th in IEF)和SDS-PAGE电泳鉴定表明分别为高纯度的C-PCα,β亚基.提示LP-IEF是分离纯化等电点差异蛋白质活性亚基的简便有效的方法.

液相等电聚焦电泳纯化燕窝蛋白质

以市售燕窝为材料,采用MicroRotofor系统进行液相等电聚焦电泳(liquid-phase isoelectric focusing,LIEF)纯化燕窝蛋白质,等电聚焦电泳后对收集到10个小室的样品进行SDS凝胶电泳分析。结果显示,燕窝蛋白质提取液中的一些胶状物聚集在聚焦槽酸端第1～4样品室,第9、10样品室杂质也较多,合并第5～8样品室的样品,即得纯化后的燕窝蛋白用于后续双向电泳分析。液相等电聚焦电泳预分离纯化技术结合双向电泳技术,对4个燕窝蛋白质进行较好的分离,在2-DE胶上检测到约30～60个蛋白质点。由此可见,液相等电聚焦电泳预分离技术是燕窝蛋白质进行2-DE分离前的重要纯化手段。

燕窝蛋白质样品制备方法的比较及其双向电泳分析

燕窝水提及丙酮沉淀蛋白质经液相等电聚焦电泳纯化后,再经双向电泳分离获得了质量较佳的2-DE图谱,由此可见液相等电聚焦电泳是对燕窝蛋白质进行纯化的有效手段。对纯化后的2个白燕窝和1个血燕窝水提及丙酮沉淀蛋白质进行了双向电泳分析,结果显示两种方法制备蛋白质获得的2-DE图谱非常相似。燕窝水提蛋白质经丙酮沉淀制备样品时间较透析、冻干所需的时间短,这对于成分复杂蛋白质提取率较低的血燕窝则更为适用。