液相色谱—质谱/质谱联用技术在临床诊断和疾病筛查中的应用

寻找并研究体内生物标志物并将其应用于疾病的诊断筛查、病程分级、疾病早期预测以及疾病的治疗具有非常重要的意义。由于生物标志物往往都存在于复杂生物基质（血浆、尿液、唾液、泪液、呼出液、胆汁等）内，且非常微量，

超快速液相色谱—质谱/质谱联用法测定氯丙嗪制剂中氯丙嗪含量

目的建立简单超快速液相色谱一质谱／质谱联用法测定氯丙嗪制剂中氯丙嗪的含量。方法样品以乙醇提取、微孔滤膜滤过、离心后，通过电喷雾离子化（ESI），采用多反应检测方式进行正离子检测，用于定量分析的检测离子为质荷比319．0→85．8。采用Shim—pack XR．ODS（3．0mm×75mm，2．0μn）柱分离，以乙腈-水-甲酸（90：10：0．02，V／V／V）为流动相，流速为O．40mL／min，在3min内完成氯丙嗪定量分析。结果线性范围为1-256ng／mL，最低检测限为1ng／mL；日内、日间测定的相对标准偏差分别小于1．34％、1．89％。结论本方法重复性好，灵敏度高，分析速度快，操作简单，可作为氯丙嗪制剂中氯丙嗪质量控制方法。

液液萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定尿液中乌头碱和新乌头碱

建立液液萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定尿液中乌头碱和新乌头碱的含量。向尿液样品中加入一定量的萃取溶剂,涡旋,离心,取上层有机相,重复萃取两次,合并萃取液,氮吹至干,再复溶于乙腈中。以乙腈和含0.1%甲酸的2 mmol/L甲酸铵溶液作为流动相,梯度洗脱,采用Acquity BEH C_(18)色谱柱分离,电喷雾离子源正离子方式扫描,多反应监测模式监测,以保留时间和特征离子定性,外标法定量。乌头碱和新乌头碱的质量浓度在1.0~100.0μg/L范围内与其色谱峰面积呈良好的线性关系,相关系数均不小于0.998,方法检出限为0.01μg/L。样品加标平均回收率为99.2%~105.4%,测定结果的相对标准偏差为1.7%~4.1%(n=5)。该方法灵敏度高,准确可靠,适用于食物中毒患者尿液中乌头碱和新乌头碱的检测。

超高效液相色谱-串联质谱测定胆石症患者血清胆汁酸谱的意义及价值

目的:探究超高效液相色谱-串联质谱测定胆石症患者血清胆汁酸谱的意义及价值。方法:选取2023年7月至12月收治的83例胆石症患者资料进行回顾性分析,并按1∶1比例选取同期体检健康者83例为对照组。比较两组受试者血清初级胆汁酸谱、次级胆汁酸谱差异,分析胆石症影响因素及胆汁酸谱诊断胆石症的价值效能。结果:研究组受试者牛磺胆酸(TCA)、甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)、甘氨胆酸(GCA)、甘氨熊脱氧胆酸(GUDCA)、牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)、牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。二元Logistic回归分析显示,TCA、GCDCA、GCA、TUDCA、TCDCA均是胆石症发生的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,TCA、GCDCA、GCA、TUDCA、TCDCA诊断胆石症的AUC分别为0.760、0.755、0.914、0.855、0.880,联合数据诊断胆石症的的AUC分别为0.921,敏感度为91.6%,特异度为97.6%。结论:胆石症患者血清胆汁酸谱存在异常,超高效液相色谱-串联质谱测定的血清胆汁酸谱可作为评估胆石症的有效方式之一,为临床早期预防提供参考。

基于超高效液相色谱-质谱法脂质组学分析油莎草3个生长时期及组织脂类物质组成

为了深入探究油莎草不同生长时间不同组织的脂质组成、脂质动态变化,本研究基于超高效液相色谱-质谱法非靶向脂质组学对油莎草3个不同生长时期(70、93、120 d)地上茎、块茎、根中的脂类代谢物进行相对定量分析。结果显示,从油莎草上述组织中共鉴定出16 904种脂类代谢物,筛选出720个脂类差异代谢物,其中油莎草块茎差异脂类物质含量显著高于地上茎和根,油莎草在生长过程中积累的脂质主要为甘油脂且大部分以甘油三酯的形式存在,油莎草3种组织的脂肪酸(fatty acid,FA)中不饱和脂肪酸的相对含量较高,均超过57.3%,块茎中不饱和脂肪酸FA(18:1)和FA(18:2)的含量较高。本研究从脂质代谢层面分析了油莎草不同生长时期不同组织的脂质差异代谢物、脂质组成及变化,可为其在食品加工和产品开发等领域的应用提供基础数据和科学依据。

基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱鉴定清心滋肾方入血化学成分

本研究基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF MS)法鉴定了清心滋肾方(QZP)的入血成分。将雌性SD大鼠连续灌胃48.5 g/kg QZP 3天后,收集血浆样品,利用固相萃取法去除蛋白,采用Agilent ZORBAX SB C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,1.8μm)分离,以0.1%甲酸水溶液和甲醇-乙腈溶液(1:1,V/V)为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾离子源正、负离子模式下采集数据。根据精确质荷比、二级质谱信息、对照品信息及相关文献鉴定QZP入血成分,并对化合物来源进行归属,总结了环烯醚萜苷和双苄基异喹啉类生物碱化合物的特征碎片和裂解规律。结果表明,大鼠血浆中共有40种来自QZP的入血原型成分,包括27种生物碱、9种环烯醚萜苷、2种黄酮碳苷、1种酚酸和1种脂肪酸。本方法可对QZP入血成分进行快速全面的分析鉴定,为阐明其药效物质基础提供依据。

高效液相色谱-串联质谱法分析游离RNA修饰核苷的研究进展

核糖核苷酸(RNA)的转录后修饰在基因表达调控中发挥重要作用,而RNA在降解与再合成过程中产生大量游离核苷,包含未修饰的基础核苷和多种类型的修饰核苷。修饰核苷无法被进一步分解,在胞内积累,或在转运蛋白作用下运输到胞外环境,直到被机体代谢,并在过程中发挥信号分子的作用。对生物样本中各级代谢物中修饰核苷的准确鉴定与定量能够为RNA降解和游离修饰核苷排泄调控提供重要信息,协助研究其生物学功能和发现潜在的临床应用。例如,小分子修饰核苷在应激反应和疾病状态下作为信号分子调控机体的应答;病理状态下体液和组织中发生特异性变化的修饰核苷可作为生物标志物,为疾病的诊断和治疗提供信息。高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术作为一种高灵敏度、高选择性、快速高效的分析工具,已在游离修饰核苷分析中展现出重要的应用价值。但HPLC-MS/MS准确分析游离修饰核苷仍面临一些挑战,如生物样品成分的复杂性,多种类目标物的化学性质差异,多种目标物的含量呈数量级的差异,以及众多的修饰核苷中同分异构体的干扰等。这些因素使得开发同时定量多种核苷的HPLC-MS/MS方法难度增加。本综述介绍了内源性游离RNA修饰核苷的来源及检测方法,概述了HPLC-MS/MS技术在内源性核苷分析中的样品前处理、色谱分离、质谱检测模式和定量方法开发等方面的研究进展,并综述了游离RNA修饰核苷的生物学功能、调控机制研究和作为疾病潜在分子标志物等的应用。

超声辅助萃取-凝胶渗透色谱净化结合超高效液相色谱-高分辨质谱检测食用鱼肉中12种卤代有机污染物

卤代有机污染物(HOPs)因具有持久性、生物积累性、毒性等而广受关注。本研究应用超声辅助萃取和凝胶渗透色谱净化结合超高效液相色谱-高分辨质谱,建立了同时检测常见食用鱼肉中12种HOPs的方法。根据HOPs特性和鱼肉样品特点选择高效、可靠的前处理方法,优化了萃取净化方法和色谱-质谱参数。鱼肉通过甲醇-乙腈(1∶1,v/v)混合溶剂提取,低温高速离心,上清液经氮吹浓缩后转溶于乙酸乙酯-环己烷(1∶1,v/v)混合溶剂,过滤后由凝胶渗透色谱净化,洗脱液经氮吹浓缩后复溶,进样分析。液相色谱流动相为含2 mmol/L乙酸铵的水溶液和乙腈,通过梯度洗脱,离子源为电喷雾电离源,负离子模式,质谱数据采集方式为全扫描和数据依赖采集,同位素内标法定量。结果显示,12种HOPs均具有良好的线性关系,定量限为0.5 ng/g。以混合鱼肉为基质,在4、40和400 ng/g加标水平下,12种HOPs的加标回收率为67.6%~133.8%,RSD为0.5%~15.6%。应用本方法对27份实际鱼肉样品进行检测,发现鱼肉中均含有HOPs,含量为未检出~4.52 ng/g。该方法灵敏度好,准确度高,可作为鱼肉中HOPs的高通量筛查和定量检测方法。

超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法同时测定植物油中4种维生素E异构体

为提高植物油中4种维生素E异构体(α-、β-、γ-、δ-生育酚)的检测效率,建立一种超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定植物油中4种维生素E异构体含量的方法。分别对质谱条件、色谱条件及样品前处理条件进行了优化,并对检测方法进行了考察。结果表明:0.5 g样品经10 mL甲醇提取,35 mg C_(18)粉末净化后,采用Kintex F5色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.7μm)分离,以0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸-甲醇溶液为流动相梯度洗脱,流速0.4 mL/min,电喷雾离子源在正离子模式下进行多反应监测扫描,采用外标法对4种维生素E异构体进行定量;在该条件下,4种维生素E异构体在1~100 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数(R~2)均在0.998以上,检出限均为6 ng/g,定量限均为20 ng/g,加标回收率范围为92.0%~108.0%,相对标准偏差为0.7%~7.1%,与国标方法测定结果相对误差在-4.3%~5.1%。该方法准确、灵敏、重现性好,可应用于实际样品的分析。

固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中39种植物源性毒素

为有效评估蜂蜜中可能残留多种植物源性毒素的食品安全风险,建立和验证固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱测定蜂蜜中39种植物源性毒素的检测方法。试样经0.1%甲酸水提取,HLB小柱净化,多反应监测模式检测,基质匹配外标法定量。本方法中39种植物源性毒素在各自浓度范围内线性关系良好,平均回收率介于78.7%~112.8%,相对标准偏差介于1.6%~15.2%(n=6)。该方法具有操作简单、检测通量大、灵敏度高等特点,能够满足蜂蜜中该类毒素监测的应用需求。在实际36批次样品的检测过程中,部分样品分别检出了不同含量的吡咯里西啶生物碱和闹羊花毒素III,证明蜂蜜中确具有残留该类植物毒素的风险。

基于固相萃取-高效液相色谱-串联质谱测定孕妇尿液中8种邻苯二甲酸酯代谢物及新生儿出生结局评价

邻苯二甲酸酯(PAEs)是一种环境内分泌干扰物,广泛存在于日常生活中,并可通过多种途径进入机体。孕妇作为一类特殊人群,若暴露于PAEs,将会对子代的生长发育造成不良影响。研究建立了固相萃取-高效液相色谱-串联质谱(SPE-HPLC-MS/MS)同时检测孕妇尿液中8种PAEs代谢物(mPAEs)的分析方法。尿液样品经β-葡萄糖苷酶酶解后,采用Bond Elut Plexa固相萃取柱净化,样品经洗脱、浓缩、复溶后,进行HPLC-MS/MS分析。采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(100 mm×3 mm,3.5μm)进行分离,以0.1%乙酸水溶液和0.1%乙酸乙腈作为流动相进行梯度洗脱,在多反应监测(MRM)模式下检测,内标法定量。结果表明,8种mPAEs在0.1~200 ng/mL范围内线性关系良好,检出限为0.015~0.048 ng/mL,定量限为0.050~0.160 ng/mL。在低、中、高3个加标水平(1、10、50 ng/mL)下,8种mPAEs的加标回收率为80.2%~99.7%。采用此方法对鄂州市妇幼保健院497名孕妇尿液中的8种mPAEs水平进行检测,结果表明,497名孕妇广泛暴露于PAEs,其中邻苯二甲酸单丁酯(MBP)的含量最高,中位数水平为104.46 ng/mL;邻苯二甲酸单苄酯(MBzP)的含量最低,中位数水平为0.22 ng/mL。同时,研究还对新生儿的出生结局进行了评估,线性回归模型表明,孕妇尿液中的邻苯二甲酸单乙酯(MEP)每增加一个自然对数(ln)水平,孕周减少0.11周(95%置信区间(CI):-0.18~-0.03);孕妇尿液中的邻苯二甲酸(2-乙基-5-氧己基)酯(MEOHP)和邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(MECPP)每增加一个ln水平,新生儿出生体重分别降低39.28 g(95%CI:-76.48~-2.09)和39.62 g(95%CI:-73.73~-5.52)。该方法操作简便,检出限低,具有较高的准确度和精密度,通过此方法测定了孕妇尿液中的8种mPAEs,并结合新生儿的出生结局发现,孕期PAEs暴露会影响新生儿的生长发育。

多壁碳纳米管改进QuEChERS净化结合高效液相色谱串联质谱法快速测定水产品中四唑虫酰胺残留

该文建立了一种多壁碳纳米管(multi-walled carbon nanotube,MWCNTs)改进QuEChERS净化结合高效液相色谱串联质谱法快速测定水产品四唑虫酰胺残留的分析方法。样品经乙腈提取,无水硫酸钠4 g,无水硫酸镁4 g分离水相和有机相,MWCNTs改进QuEChERS(每毫升提取液加入3 mg MWCNTs,60 mg C18,50 mg PSA)净化包净化,在Agilent Venusil MP C18(100 mm×2.1 mm,3μm)上分离,以甲醇和水为流动相,电喷雾离子化,负离子扫描,多反应监测模式检测,基质匹配外标法定量。结果显示,四唑虫酰胺在不同水产品基质下0.1~20μg/L线性范围内相关系数(R^(2))均大于0.999。方法定量限(S/N≥10)为0.80μg/kg。以草鱼、带鱼、小龙虾、基围虾、大闸蟹、梭子蟹、花甲为基质,四唑虫酰胺在2.0、4.0、20μg/kg 3个水平加标回收率为82%~97%,批内相对标准偏差(relative standard deviation,RSD,n=6)为0.66%~4.02%,批间RSD(n=6)为0.88%~2.95%。本方法便捷高效,可满足水产品中四唑虫酰胺残留的检测工作要求。

高效液相色谱、顶空固相微萃取气相色谱-质谱法结合电子鼻分析重庆烤鱼调料的风味特性

为探究重庆烤鱼调料的特征风味,采用高效液相色谱、电子鼻以及顶空固相微萃取气相色谱-质谱对不同厂家重庆烤鱼调料麻度、辣度、氯化物含量及挥发性风味物质进行分析。结果表明,不同厂家重庆烤鱼调料的山椒素、辣椒素类物质及氯化物含量分别为0.077~1.16 mg/g、0.032~0.565 mg/g和5.855~11.950 g/100 g,麻度、辣度和氯化物差异显著(P<0.05);电子鼻能够对不同厂家重庆烤鱼调料进行区分,无机硫化物、芳香成分和有机硫化物的气味强度明显高于其他类别。8个样品中共检测出94种挥发性风味物质,包括:醇类17种、烃类35种、醛类12种、酮类5种、酯类8种及其他类17种。通过气味活度值法确定了重庆烤鱼调料中21种关键风味物质,主要为芳樟醇、α-蒎烯、4-异丙基苯甲醛、4-烯丙基苯甲醚和茴香脑等成分,共同形成了重庆烤鱼调料以辛香为主,带有药草香、茴香、清香的风味特征。

液相色谱及液相色谱-质谱联用技术在表面活性剂分析中的应用进展

综述了液相色谱(LC)和液相色谱-质谱(LC-MS)联用技术在表面活性剂分析中的应用。比较了不同色谱模式和检测器分析表面活性剂的原理及优缺点,介绍了LC-MS技术在表面活性剂的结构鉴定、商业产品分析、质量控制、环境检测、残留检测和代谢组学研究中的进展,总结了LC-MS技术存在的一些局限性和挑战。最后,对LC和LCMS技术的发展趋势进行了展望,预计高分辨质谱(HRMS)技术、二维液相色谱(2D-LC)技术的进一步普及,以及新型色谱填料和固定相的开发,有望显著推动表面活性剂分析技术的发展。

液相色谱-质谱联用法测定东港草莓中农药残留量

本文主要介绍了东港市当地作物草莓的生长周期、种植面积、产量、药物使用及经济价值,草莓品种及对东港地区经济的影响。使用液相色谱-质谱联用法对草莓中农药残留量进行测定,依据国家标准进行前处理工作,实验完成后对图谱与测定结果进行分析。这对监测本地农产品的农药残留情况和农产品的安全状况具有非常重要的意义。

固相萃取结合液相色谱串联质谱法测定生咖啡中草甘膦和氨甲基膦酸残留

为了给咖啡种植过程中草甘膦农药使用提供指导,需建立一种分析生咖啡中草甘膦和氨甲基膦酸残留的检测方法。生咖啡粉末样品室温下经水超声提取,二氯甲烷萃取部分脂溶性组分,上清液用PCX固相萃取小柱净化,净化液与氯甲酸-9-芴基甲酯发生衍生化反应,液相色谱–串联质谱仪在正离子模式下扫描分析草甘膦和氨甲基膦酸衍生产物,内标法定量。采用固相萃取结合液相色谱串联质谱法检测生咖啡中草甘膦和氨甲基膦酸残留,结果表明,草甘膦和氨甲基膦酸在2~100 ng/mL呈良好线性关系,在0.05、0.10、0.20 mg/kg的加标水平下,平均回收率为81.8%~97.5%,相对标准偏差均小于9.1%,草甘膦和氨甲基膦酸的定量限均为0.04 mg/kg。采用此方法参加FAPAS(19377)能力验证,Z值为-0.4,结果满意。综上,该方法具有良好的线性关系,准确度和精密度均满足定量分析的要求,适用于生咖啡中草甘膦和氨甲基膦酸残留的定量分析。

基于固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定畜禽肉中3种青霉素类的残留量

为测定畜禽肉中苄青霉素、邻氯青霉素和氨苄青霉素3种青霉素的残留量,该文建立固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱(solid phase extraction-ultra-high performance liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry,SPE-UPLC-MS/MS)法同时测定畜禽肉中3种青霉素残留量的分析方法。对影响固相萃取柱效率的洗脱剂的种类、洗脱剂用量以及上样速率进行优化;同时对样品的提取和净化条件进行考察。在3 mL/min的上样速率下,用6 mL乙腈洗脱可达到最佳的萃取效果。以0.1%甲酸水溶液-乙腈作为流动相进行梯度洗脱,在UPLC C18色谱柱上分离,电喷雾正离子模式下,以动态多反应监测采集数据,外标法定量。3种目标分析物的线性回归方程相关系数均大于0.999,检出限为0.05~0.10μg/kg(信噪比S/N=3),定量限为0.1~0.4μg/kg(S/N=10),加标回收率为82.7%~96.8%,相对标准偏差为1.92%~4.61%。SPE-UPLC-MS/MS方法具有精密度高、重复性好、分离度高、分析时间短等优点,可适用于畜禽肉中青霉素定性定量测定。

超高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定按摩凝胶中8种化学物质

建立了超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(UPLC-MS/MS)快速筛查和准确定量按摩凝胶中对乙酰氨基酚、氨基比林、泼尼松、氢化可的松、酮洛芬、萘普生、双氯芬酸钠7种非法添加抗炎镇痛药和合成辣椒素。样品经甲醇超声提取,以5 mmol/L乙酸铵的水溶液-甲醇作为流动相,使用Agilent ZOBAX Eclipse Plus C18(3.0 mm×50 mm,1.8μm)色谱柱进行梯度分离,采用电喷雾离子源(正负离子模式),以多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量。结果表明,在0.0050~0.40 mg/L的浓度范围内,各目标化合物的性关系良好(r>0.999),检出限为0.0003~0.001 mg/L,定量限为0.001~0.004 mg/L,在低、中、高3个加标水平下的平均回收率在90.9%~116.7%,相对标准偏差在0.8%~4.1%(n=5)。该方法样品前处理操作简单、快速,方法灵敏度高、准确度和精密度好,适用于按摩凝胶中7种非法添加抗炎镇痛药和合成辣椒素的快速筛查和定量。

利用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱多肽识别技术鉴别蜈蚣

基于特征肽段建立蜈蚣及其混伪品种的专属性鉴别方法。采用胰蛋白酶对正品蜈蚣(少棘巨蜈蚣)及伪品蜈蚣(多棘巨蜈蚣)进行酶解处理,利用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱和Mass Profiler Professional化学计量学统计分析功能,筛选出3个专属性特征肽段,建立超高效液相色谱-三重串联四级杆质谱法进一步验证少棘巨蜈蚣和多棘巨蜈蚣特征肽段的专属性。确定了少棘巨蜈蚣的特征肽段m/z 615.2,多棘巨蜈蚣的特征肽段m/z 477.3和m/z 845.9。该方法专属性强,重复性好,操作简便,可用于蜈蚣及其混伪品种的鉴别,为蜈蚣药材质量评价及研究提供思路。

固相萃取/高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定地表水中12种酚类内分泌干扰物

建立固相萃取/高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定地表水中12种酚类内分泌干扰物。在酸性条件下,样品经固相萃取富集、净化、洗脱、氮吹浓缩后,用高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定,以双酚A-d16、3,6,3-壬基酚-13C6和4-n-壬基酚-d8为内标分段定量。12种酚类内分泌干扰物的质量浓度在1.0~100μg/L范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数均不小于0.995。当进样体积为10μL时,12种酚类内分泌干扰物的检出限为2~5 ng/L,测定下限为8~20 ng/L。样品加标平均回收率为93%~126%,测定结果的相对标准偏差为0.9%~3.8%(n=6)。该方法简单、灵敏,适用于地表水环境中3种双酚类化合物和9种烷基酚类化合物的测定。