联合液相色谱-质谱分析和网络药理学探讨益肾清利方治疗特发性膜性肾病的作用机制

目的联合液相色谱-质谱(Liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)分析和网络药理学探讨益肾清利方治疗特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)的潜在靶点。方法通过BATMAN-TCM数据库和LC-MS定性分析确定益肾清利方药物活性成分,通过网络药理学的方法预测益肾清利方治疗特发性膜性肾病的生物过程及机制通路,并对筛选出的核心靶点进行分子对接及体外实验验证。结果益肾清利方共筛选出15个活性成分,其作用靶点与特发性膜性肾病疾病靶点取交集后得到72个核心基因。GO富集分析结果显示包含凋亡信号通路的调控、白细胞迁移、肽基酪氨酸磷酸化等的参与;KEGG通路富集分析结果显示益肾清利方治疗特发性膜性肾病涉及TNF、PI3K/AKT、MAPK等细胞凋亡相关信号通路。体外实验表明,益肾清利方可通过调控PI3K/AKT通路减少足细胞凋亡。结论益肾清利方通过多靶点、多通路治疗特发性膜性肾病,对C5b-9诱导的足细胞亚溶破模型有抗凋亡作用,其作用机制可能与TNF、PI3K/AKT、MAPK信号通路有关。

环孢素A和他克莫司的高效液相色谱-串联质谱检测及其室内质控评价

目的建立环孢素A和他克莫司治疗药物监测的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)质控方法,应用Westgard多规则理论对质控样品进行评估。方法利用HPLC-MS/MS建立人全血中环孢素A和他克莫司的血药浓度检测方法。对治疗药物监测过程中低、中、高3个浓度水平的质控样品进行统计分析,绘制Levery-Jennings和Z分数质控图,应用Westgard多规则理论进行室内质控评估。结果环孢素A和他克莫司的线性范围分别为10.40~1040.00和0.50~49.50 ng·mL^(-1),定量下限分别为10.40和0.50 ng·mL^(-1),提取回收率分别为108.61%~113.24%和101.99%~109.37%,内标归一化的基质因子分别为106.68%~111.27%和95.70%~97.81%,日内和日间的准确度及精密度均小于15.0%,其他参数也均符合生物样本定量分析要求。Levery-Jennings和Z分数质控图显示,2022年第三季度26组质控样品的检测结果提出警告4次(违反12s规则),未出现失控现象。结论建立的环孢素A和他克莫司治疗药物监测室内质控体系能够有效保障血药浓度检测的准确性。

液相色谱-串联质谱法检测淡水养殖环境中地西泮及其代谢物

建立了养殖水、植物、沉积物和鲫鱼中地西泮及其代谢物(去甲西泮、奥沙西泮和替马西泮)的液相色谱-串联质谱检测方法。养殖水经0.45µm玻璃纤维膜过滤,用氨水调至pH 8.0后通过反相固相萃取柱(HLB)净化;植物和沉积物经盐析提取后,通过QuEChERS方法净化上样;鲫鱼样品经盐析提取后,通过固相萃取柱(Prime HLB)净化上样。采用Luna C_(18)柱(100 mm×2.1 mm,1.6µm)进行分离,多反应监测(MRM)模式进行测定,外标法定量。结果表明:地西泮及其3种代谢物在0.1~10µg/L质量浓度范围内呈良好的线性关系(r^(2)>0.999)。4种目标物在养殖水体中的检出限为1.0~1.2 ng/L,定量下限为5.0~6.0 ng/L;在植物、沉积物和鲫鱼中的检出限为0.03~0.10µg/kg,定量下限为0.10~0.25µg/kg。在低、中、高3个加标水平下,地西泮及其代谢物的回收率为83.4%~106%,相对标准偏差(RSD,n=6)为1.2%~9.4%。该方法成功应用于养殖水、沉积物、植物和鲫鱼样品中地西泮及其代谢物的检测,能为地西泮污染追查提供检测方法支撑。

液相色谱-质谱法测定土壤中的溴敌隆

本研究建立了乙醇超声提取后直接上机测定土壤中溴敌隆的液相色谱-串联质谱法。基于多反应监测离子对信息以及保留时间完成目标物的定性分析,根据定量离子对的峰面积采用外标法进行定量分析。结果表明,溴敌隆在0.5~100 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数大于0.99;方法的检出限为0.795 ng/g,定量限为2.55 ng/g;平均回收率为88.4%~93.9%,相对标准偏差为3.1%~6.7%。本方法灵敏度高、准确性好、样品用量少且操作简单,适用于土壤中溴敌隆的定性定量分析,可为评估环境土壤中的溴敌隆残留提供技术支持。

液相色谱-串联质谱法检测维生素A、25羟维生素D_(3)和维生素E方法的建立

目的:基于临床实验室建立一种高特异性液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)技术方法,以快速准确检测不同年龄人群的血清维生素A、25羟维生素D_(3)[25(OH)D_(3)]和维生素E水平。方法:采用液-液萃取前处理,建立LC-MS/MS法检测血清中维生素A、25(OH)D_(3)和维生素E的方法,并通过基质效应、线性、精密度测定、加样回收率等对此方法进行评价。收集健康体检人群标本542例,分析不同年龄组即青少年(1~18岁组)、中年(19~59岁组)和(老年≥60岁组)血清维生素A、25(OH)D_(3)和维生素E水平,并依据卫生行业标准(WS/T553-2017和WS/T677-2020)判断不同年龄段维生素A、25(OH)D_(3)和维生素E营养状况。结果:采用LC-MS/MS技术同时检测血清维生素A、25(OH)D_(3)和维生素E的总检测时间为6.5 min,未见明显干扰因素。标准曲线相关系数r^(2)>0.99。维生素A、25(OH)D_(3)和维生素E批内不精密度均<6.0%,批间不精密度<7.5%。加标回收率均在100.5%~112.9%。不同年龄组中1~18岁组未见到维生素A缺乏;7~18岁组维生素A不足占8.96%;25(OH)D_(3)缺乏和不足分别占10.12%和38.10%;维生素E不足占5.06%;19~59岁组维生素A和E较少见到缺乏,25(OH)D_(3)缺乏和不足分别占20.90%和46.33%;≥60岁组维生素A、25(OH)D_(3)和维生素E缺乏和不足总和分别占16.36%、87.3%和12.72%。结论:建立的LC-MS/MS技术方法能够快速准确地检测血清维生素A、25(OH)D_(3)和维生素E水平。在1~18岁和≥60岁人群中存在一定程度的维生素A、25(OH)D_(3)和维生素E的缺乏,各年龄段均显示25(OH)D_(3)缺乏和不足。

基于液相色谱-质谱分析冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证代谢组学研究

目的基于血清代谢组学研究分析冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证的差异代谢物和相关代谢通路。方法招募60例冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证患者和60例同期健康志愿者,采用超高效液相色谱-质谱联用测定两组受试者的血清代谢组学,通过原始谱图和原始数据进行多元统计分析鉴定差异代谢物,进行KEGG代谢通路富集分析。结果冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊组总计60例患者参与研究,对照组总计60例健康志愿者参与研究,两组受试者的一般资料、生化指标均无统计学差异(P>0.05);共鉴定得到18个差异代谢物,其中苯乙醛、正磷酸盐、鸟嘌呤核苷、磷酸二乙酯、2-脱氧-D-葡萄糖酸盐、鸟嘌呤、5-(2-羟乙基)-4-甲基噻唑表达下调,牛黄胆酸、2-丙基戊二酸、8-氨基-7-氧代壬酸、L-酪氨酸、S-磺基-L-半胱氨酸、环己甲酸、紫质胆素原、(R)-3-羟基-2-丁酮、辛酰基葡糖苷酸、褪黑素、A-茄碱表达上调;涉及苯丙氨酸代谢、硫胺素代谢以及嘌呤代谢等代谢通路。结论差异代谢物在一定程度上从微观层面揭示了冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证的代谢本质以及为冠心病稳定型心绞痛脾虚痰浊证患者临床早期预警提供线索。

固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定污水中8 种新烟碱类农药

新烟碱类农药作为一类新型农药,由于其对非靶标生物造成生态风险而引起广泛关注。为了实现污水中痕量新烟碱类农药的快速、准确定量,本研究建立了同时检测污水中8种新烟碱类农药(呋虫胺、E-烯啶虫胺、噻虫嗪、噻虫胺、吡虫啉、氯噻啉、啶虫脒和噻虫啉)的固相萃取-液相色谱-串联质谱法。确定选择色谱流动相类型和质谱参数后,采用单因素法确定固相萃取(SPE)的条件:萃取柱类型为HLB(500 mg/6 mL),上样体积为500 mL,上样速度为10 mL/min,样品pH为6~8。通过优化色谱梯度洗脱程序、样品的稀释倍数并采用同位素内标定量法降低污水样品的基质效应,确定污水稀释5倍进行前处理,采用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(100 mm×21 mm,18μm),以含01%甲酸的2 mmol/L乙酸铵水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱,在正离子多反应监测模式下分析10 min,用吡虫啉-d4作为同位素内标进行定量。通过响应曲面法进一步优化SPE的淋洗液及洗脱液类型和用量,确定用10%甲醇水溶液淋洗,7 mL甲醇-乙腈(1∶1,v/v)混合溶液洗脱。8种新烟碱类化合物在相应范围内线性关系良好(线性相关系数(r)均大于09990),方法检出限(MDL)为02~12 ng/L,方法定量限(MQL)为08~48 ng/L,在低、中、高3个加标水平下的加标回收率为826%~942%,RSD为39%~94%。该方法成功用于4个城镇污水处理厂进水水样的分析,8种新烟碱类农药的检出含量为ND~256 ng/L。与类似方法相比,该方法检出限低,准确度高,适用于污水中8种新烟碱类农药的痕量检测。

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肾中安普霉素的残留量

建立了猪肾中安普霉素残留量的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定方法。猪肾样品以磷酸二氢钾溶液提取,经HLB固相萃取柱净化后,采用CAPCELL PAK MGⅡC_(18)(2.0 mm×150 mm,5μm)色谱柱分离,以0.1%甲酸水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾离子源正离子模式扫描,多反应监测(MRM)模式进行检测,基质匹配同位素内标法定量。安普霉素在20~200μg/L质量浓度范围内线性良好,相关系数(r^(2))为0.9993,方法定量下限为10.0μg/kg。在10、20、100μg/kg加标水平下的平均回收率为85.5%~94.6%,相对标准偏差(RSD)不大于5.9%。该方法基于HLB固相萃取柱净化,基质匹配同位素内标法定量,具有操作简单、定性准确、灵敏度高的特点,适用于猪肾中安普霉素残留量的测定。

不同牛血清替代人血清作为空白基质在HPLC-MS/MS法测定他克莫司药物浓度中的可行性分析

目的以他克莫司为模型药,考察不同牛血清替代人血清作为空白基质在HPLC-MS/MS药物浓度测定中的可行性研究。方法在相同的处理方法下,以人血清和不同牛血清作为空白基质制备标准曲线,对比101份他克莫司血清样品在不同标准曲线下的浓度是否存在差异。结果三种牛血清(小牛血清、新生牛血清、胎牛血清)与人血清的相对偏差均大于TEa(12.5%),均不能替代人血清作为空白基质。结论以他克莫司为模型药时,在HPLC-MS/MS法测定药物浓度中,三种牛血清均不能替代人血清作为空白基质。

亲脂性匹配色谱分离-超高效液相色谱-串联质谱法测定果蔬中21种三唑类杀菌剂

为了提高农药残留的色谱分离效率和降低基质效应,本研究提出亲脂性匹配色谱分离,选取三唑类杀菌剂为研究对象,建立了果蔬中21种三唑类杀菌剂的超高效液相色谱-串联质谱(Ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测方法。样品经乙腈提取,盐析分相,分散固相萃取净化,选用与三唑类杀菌剂具有相近亲脂性的色谱柱进行分离,探究不同亲脂性烷基键合相对基质效应、回收率以及三唑杀菌剂和基质组分色谱分离的影响。结果表明,亲脂性匹配色谱分离能够提高色谱分离效率,改善三唑杀菌剂和基质组分的色谱分离,21种三唑杀菌剂的基质效应为-8.3%~4.7%,在5~250μg/L浓度范围内线性关系良好,决定系数R2≥0.999,平均回收率为91.4%~108.1%,定量限为0.5~3.5μg/kg。该检测方法能够有效降低基质效应,使用溶剂校准曲线进行定量即可获得满意的回收率,显著提高了检测效率,具有简便、准确、灵敏度高等特点,适用于果蔬中三唑杀菌剂的检测。所述亲脂性匹配色谱分离,为农药残留的液相色谱-串联质谱法分析中液相色谱柱的选择和基质效应的降低提供了方法参考。

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定蔬菜中4种异噻唑啉酮类化合物的含量

提出了超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)快速测定蔬菜中5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMIT)、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MIT)、1,2-苯并异噻唑啉-3-酮(BIT)、2-正辛基-4-异噻唑啉-3-酮(OIT)等4种异噻唑啉酮类化合物含量的方法。取10.0 g已匀浆的蔬菜样品,用10 mL乙腈超声提取30 min,离心,残渣重复提取一次,合并提取液,加入5 g氯化钠,振荡、静置后,于40℃氮吹至近干,用2 mL 10%(体积分数,下同)甲醇溶液溶解残渣。所得溶液过已活化的HLB固相萃取小柱,用5 mL 10%甲醇溶液淋洗,6 mL甲醇洗脱。洗脱液于40℃氮吹至近干后,用甲醇定容至1 mL,过0.22μm有机滤膜,滤液在ACQIUTY UPLC BEH SHIELD RP18色谱柱上分离,以不同体积比的甲醇-水混合液为流动相进行梯度洗脱,质谱分析采用多反应监测采集模式,电喷雾正离子扫描模式,基质匹配法绘制工作曲线。结果表明,4种异噻唑啉酮类化合物的质量浓度在一定范围内与对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)分别为0.5,0.5,0.5,0.025μg·kg^(-1)。在不同蔬菜基质中进行3个浓度水平的加标回收试验,回收率为68.8%~81.3%,测定值的相对标准偏差(n=6)均小于9.0%。方法用于20种蔬菜样品分析,仅一组韭菜样品中检出BIT,检出量为2.3μg·kg^(-1)。

超高效液相色谱-串联质谱法测定白术中34种禁限用农药残留

目的建立白术34种禁限用农药残留的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法,对21批市售白术进行检测,初步调查市售白术农药残留情况。方法样品用纯乙腈提取,提取液经Waters-HLB 3cc(60 mg)固相萃取柱净化后,采用Waters-C_(18)色谱柱分离,流动相为0.1%甲酸水(含10 mmol/L甲酸铵)-乙腈,梯度洗脱,根据保留时间在多反应监测正离子模式下,以外标法定量分析。结果各成分在各自质量浓度范围内线性关系良好,r均大于0.9980。检测限为0.8~4.0μg/kg,定量限为2.0~10.0μg/kg。平均回收率为74.1%~97.4%,RSD为0.6%~6.4%(n=9)。21批白术样品中共有13批样品检出7种农药残留。结论本方法操作简单、定量准确,具有较高的回收率和良好的重复性,适用于白术中禁限用农药多残留检测。

通过式固相萃取柱/超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产养殖沉积物中磺胺类、喹诺酮类、四环素类22种抗生素兽药残留

目的:建立了同时测定水产养殖沉积物中22种抗生素的通过式固相萃取柱/超高效液相色谱-串联质谱法。方法:样品用8 mL EDTA-Mcllvaine-乙腈=4∶4超声提取,提取液过HLB通过式固相柱净化,UPLC-MS/MS检测,基质工作曲线和同位素内标法同时定量。结果:在2.00~100μg/L范围内,22种抗生素的线性关系良好,相关系数均大于0.998。在10μg/kg、50μg/kg、100μg/kg这3个添加水平下,重复测定6次,回收率在60.3%~109.7%,相对标准偏差为1.2%~13.2%,符合GB/T 27404—2008对回收率和精密度的要求。结论:该方法高效快捷,准确可靠,适用于沉积物中抗生素类药物的快速测定。

甘草化学成分的高效液相色谱-串联质谱分析

采用高效液相色谱 质谱联用方法分析了甘草 (Glycyrrhizauralensis)中的化学成分。通过高效液相色谱可将三萜、黄酮及香豆素等 5 0余种化学成分较好的分离。根据紫外光谱可大致判断其化合物类型 ,由电喷雾质谱得到各成分的分子量 ,再由串联质谱获得进一步的结构信息 ,进而推测出其中 2 2个主要成分的可能结构。它们分别是 :葡糖基甘草甙、异光果甘草甙、夏拂托甙、甘草素 4′ 芹糖甙 ,甘草甙 ,6′ 乙酰甘草甙 ,异佛来心甙 ,异甘草素葡萄糖芹菜甙 ,甘草糖甙A ,甘草糖甙B ,甘草素 ,3 O [β D 葡萄糖醛酸甲酯 (1→ 2 ) β D 葡萄糖醛酸 ] 2 4 羟基 甘草内酯 ,甘草皂甙E2 ,异甘草素 ,甘草醇 ,甘草酸 ,甘草香豆素 ,甘草双氢异黄酮 ,甘草异黄酮甲 ,乌拉尔甘草皂甙乙 ,新甘草酚和甘草皂甙B2 。

基于超高效液相色谱-串联质谱技术对两株甘草内生菌次生代谢产物化学成分的差异分析

参照甘草原植物对甘草中两株内生菌JTYB34和JTZB55的化学成分进行综合分析比较,对甘草内生菌次生代谢产物主要化学成分进行差异分析。采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术,根据高分辨质谱提供的精确相对分子质量和碎片离子信息,结合UPLC-MS/MS检测平台和自建数据库对甘草及甘草内生菌的化学成分进行定性和定量分析。进一步结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等多元统计分析方法筛选甘草内生菌JTYB34、内生菌JTZB55、甘草三者之间的差异成分。结果显示,超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术共鉴定出1199个成分,且甘草内生菌JTYB34、内生菌JTZB55、甘草这三者之间化学成分存在显著差异。以甘草为参照物,大部分黄酮类、酚酸类、脂质类及有机酸类等化合物在JTYB34及JTZB55中含量呈现下降趋势,且化合物种类亦随之减少。聚类分析将甘草聚为Ⅰ类,JTYB34聚为Ⅱ类,其余聚为Ⅲ类;结合PCA、OPLS-DA分析结果,筛选出异甘草素、甘草酸胺、甘草黄酮A、甘草苷、4-羟基甘草查耳酮A等29个具有显著性差异的化合物。甘草内生菌JTYB34、甘草内生菌JTZB55及甘草这三组样品之间两两比较,在化学成分的含量和种类上均存在显著差异,这一发现可为甘草内生菌的药理活性研究提供一定的数据参考。

液相色谱-质谱分析中的基质效应

介绍了液相色谱-质谱(LC-MS)分析中基质效应的产生机制、来源、评定方法和消除措施。基质效应由共流出的分析物和基质的竞争以及影响接口的离子化效率所致,主要来源于生物样品中的内源性组分和样品处理后引入的杂质。不同批次的生物样品,其基质效应存在差异,可通过柱后注射法和提取后添加法2种方法评定基质效应。实例介绍了基质效应、提取回收率和整个方法过程效率的具体计算方法。基质效应可能影响LC-MS方法的灵敏度、准确度和精密度,通过样品前处理、氘代内标的使用、色谱分离、质谱分析等过程的优化可有效消除基质效应。

土壤中莠去津及其降解产物的提取及高效液相色谱-质谱分析

建立了高效液相色谱 质谱联用(HPLC MS)选择离子检测(SIM)分析环境土样中的痕量莠去津及其降解产物脱乙基莠去津(deethylatrazine,DEA)、脱异丙基莠去津(deisopropylatrazine,DIA)、羟基化莠去津(HA)的方法。土样用双蒸水超声提取,然后用WatersOasisMCX固相萃取小柱富集纯化土样提取液,测得莠去津及其降解物在不同加标浓度(4 5～120ng/g)下的回收率为:莠去津40 4%～82 0%,DEA60 6%～86 5%,DIA69 2%～86 1%,HA30 1%～80 3%。应用源内离子碰撞诱导解离技术能够观察母体和其特征碎片离子的情况,判断被分析物是否存在,增加了实验结果的可靠性。对某农药厂附近农田的表层土中的莠去津和其降解产物进行定性分析,验证了环境土样中痕量降解产物的存在。

南五味子种子中木酯素类成分的高效液相色谱-电喷雾电离-质谱分析

目的:用高效液相色谱-电喷雾电离-质谱分析(HPLC-ESI-MS)法对南五味子种子中木酯素类成分进行了分析。方法:利用 HPLC-ESI-MS 对南五味子种子进行了初步分析研究。液相色谱条件为:色谱柱a:C_8柱(4.6mm×25mm,5μm),色谱柱 b:苯基柱(4.6mm×25mm,5μm);流动相:甲醇-水(60∶40);流速:0.4mL·min^(-1);质谱为Finnigan LCQ^(DECA)型液相色谱-电喷雾质谱联用系统。结果:得到了样品的总离子流图及相应色谱峰的 ESI-MS 质谱图,对其进行了解析,鉴别出五味子甲素、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子酯丙、五味子酯丁。结论:本方法快捷、简单、准确。

铅形态的高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱分析

用50 mm的反相高效液相色谱短柱在V甲醇/VH2O＝55/45,其中水相为0.1 mol/L乙酸0.1 mol/L乙酸铵的缓冲溶液(pH=4.70),流速0.6 mL/min条件下,约10 min内实现了无机铅离子(Pb2+)、氯化三甲基铅(TML)、氯化三乙基铅(TEL)和氯化三苯基铅(TPhL)的高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)联用分析.4种铅形态在去离子水和自来水中的加标回收率分别为93.8%～115.6%和89.3%～137.8%;峰强度和保留时间的RSD分别为7.4%～14.3%和0.5%～1.3%;仪器检出限及方法检出限分别为0.27～3.07 μg/L和1.20～2.33 μg/L.

银杏叶中银杏萜内酯的高效液相色谱-电喷雾电离-质谱分析

目的:用高效液相色谱-电喷雾电离-质谱(HPLC-ESI-MS)法对银杏叶中银杏萜内酯进行分析。方法:利用LC-ESI-MS法对银杏叶样品进行了初步研究。液相色谱条件为色谱柱:Inertsil ODS 3,流动相:甲醇-水(36:64),流速1mL·min^(-);质谱为ZMD Micromass电喷雾质谱仪。结果:得到了样品总离子流和选择离子流图,及相应色谱峰的ESI-MS质谱图,对其进行了解析,鉴别出白果内酯及银杏内酯A、B、C、J。结论:本方法快捷、简单和准确。