食源性沙门氏菌携带质粒介导的喹诺酮类耐药基因的液相芯片检测技术研究

目的:建立应用新型液相芯片技术检测食源性沙门氏菌携带的质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因中4种基因:qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB的方法。方法:针对食源性沙门氏菌携带的qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB四种PMQR基因,设计对应引物和微球,采用液相芯片技术对7株标准菌株进行特异性实验;对4株各含1种PMQR基因的食源性沙门氏菌进行重复性和灵敏度实验;然后检测来自食源性风险监测的71株耐喹诺酮类沙门氏菌,和普通PCR进行对比实验。结果:成功建立了液相芯片技术检测食源性沙门氏菌携带的qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB四种PMQR基因的方法,携带qnrS基因的耐药株检出限为5 CFU/mL、携带aac(6')-Ib-cr基因的耐药株检出限为25 CFU/mL、携带oqxA和oqxB基因的耐药株检出限为10 CFU/mL。所有阳性判定结果荧光中位值(MFI)均≥5倍阴性对照组。重复性实验变异系数(CV)均小于5%,特异性实验结果特异性100%,阴性菌株无阳性信号反应。qnrS检出率29.6%(21/71)、aac(6')-Ib-cr 35.2%(25/71)、oqxA 28.2%(20/71)、oqxB 23.9%(17/71),方法比对的结果符合率为100%。结论:实验建立的液相芯片技术检测食源性沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB的方法具有灵敏度高、特异性好、稳定性强、结果准确的特点,可以为食源性沙门氏菌PMQR基因的检测以及耐药性的监控提供技术支撑。

液相芯片技术在动物遗传育种中的应用

液相芯片技术是近年来发展起来的一种先进的高通量分子检测技术,集一体化流式细胞术、荧光微球和激光技术等技术优势,具有快速、简便、敏感、准确和成本低等优点。相比其他检测技术,液相芯片可以同时检测多个生物分子指标,如蛋白质、核酸和代谢产物等。在动物遗传育种中,这些分子指标可以用于疾病基因定位、群体繁殖力评价、亲缘关系研究、遗传多样性分析等重要领域。该文介绍了液相芯片的原理、优缺点及其在动物遗传育种中的应用,以期为辅助开发动物遗传育种检测新技术提供参考。

液相芯片技术在诊断江苏省首例人禽流感病例中的应用

[目的]对2007年12月江苏省发生的一例不明原因肺炎病例进行液相芯片检测,探讨该技术在不明原因肺炎诊断中的作用。[方法]采集病例的呼吸道标本,利用液相芯片方法对呼吸道重要致病体进行核酸检测。[结果]呼吸道标本甲型流感病毒,H5及N1亚型禽流感病毒特异性核酸均为阳性。[结论]应用液相芯片技术,可快速确定该不明原因肺炎病例为高致病性禽流感(H5N1)感染,为及时防控和治疗提供依据。

液相芯片技术检测癫痫大鼠海马组织RANTES、MCP-1、IP-10的表达研究

目的：观察趋化因子RANTES、MCP-1、IP-10在癫痫大鼠海马组织中的表达情况,探讨百会穴治疗癫痫的作用机制。方法：将30只200~250 g的雄性SD大鼠随机分为正常空白组、正常百会组、模型空白组、模型百会组。建立氯化锂-匹鲁卡品癫痫大鼠模型,针刺其百会穴。运用液相芯片技术检测癫痫大鼠海马组织中RANTES、MCP-1、IP-10的蛋白表达情况。结果：四组大鼠RANTES、MCP-1、IP-10的表达情况均为：模型空白组的蛋白表达量明显高于正常空白组（P〈0.05）;模型百会组高于正常百会组（P〈0.05）;模型百会组低于模型空白组（P〉0.05）;正常空白组和正常百会组相比（P〉0.05）。结论：大鼠海马组织趋化因子RANTES、MCP-1、IP-10参与了癫痫疾病的发生和发展过程;针刺百会穴未能通过降低RANTES、MCP-1、IP-10的蛋白含量来达到治疗癫痫的目的。

液相芯片技术在核酸检测中的应用研究进展

随着人类基因组计划（HGP）的完成和数量巨大的遗传信息的获得．人们的兴趣转向了解个体之间基因的差异性以及这种差异如何影响不同个体对疾病的敏感性及对药物的反应性。在公共卫生领域，也需要对引起突发公共卫生事件如不明原因的传染病的病原进行快速筛查，这都需要对DNA样品进行快速、可靠、经济和高通量的检测。美国纳斯达克上市的Luminex公司研发的液相芯片技术（又称微球依赖的悬浮点阵技术．

液相芯片技术同时检测六种猪繁殖障碍病毒的方法研究

在GenBank中收集猪细小病毒（PPV）结构蛋白VP2基因、猪圆环病毒2型（PCV2）的ORF2序列、猪伪狂犬病毒（PRV）的gB基因、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的NSP2基因、猪瘟病毒（CSFV）的E2基因和乙型脑炎病毒（JEV）的M基因，利用Primer 5.0等分子生物学软件对收集的序列分析比较，筛选出上述基因的特异保守序列并设计引物和探针，将设计好的探针与相应的微球偶联，优化条件，建立检测方法。结果表明：建立的检测PPV、PCV2、PRV、PRRSV、CSFV、JEV 6种病毒核酸的多重液相芯片技术具有较好的特异性、敏感性和稳定性，对PPV、PCV2、PRV、PRRSV、CSFV、JEV 6种病毒核酸的最低检出量分别为8.50×102 copies/μL、2.87×102 copies/μL、2.07×102 copies/μL、2.61×102 copies/μL、2.34×102 copies/μL、2.05×102 copies/μL，与相应病毒PCR/RT-PCR检测方法相比，敏感性提高了100-1000倍；对临床388份样品同步进行荧光PCR与液相芯片检测，结果99.87%相符。本方法为液相芯片技术在动物多病毒快速高通量检测、鉴别诊断等应用方面奠定了基础。

液相芯片技术检测宫颈HPV感染及基因型分布

目的探讨液相芯片(Luminex)技术检测宫颈人乳头瘤病毒(HPV)基因型的应用价值。方法用液相芯片技术对1 450例妇女进行宫颈脱落细胞HPV DNA基因分型检测,并对HPV感染率、亚型分布进行统计分析。结果 1 450例妇女中共检出404例HPV DNA阳性,总检出率为27.9%;共检出25种亚型(HPV 73型未检出),其中高危亚型感染占83.4%(337/404),低危亚型感染占10.6%(43/404),高危亚型、低危亚型混合感染占5.9%(24/404);HPV 16、58、52型是最常见的高危亚型,感染率分别为5.7%(83/1 450)、4.7%(68/1 450)、4.6%(66/1 450),HPV 61和6型是最常见的低危亚型,感染率分别为1.6%(23/1 450)和1.2%(17/1 450);≤24岁组妇女宫颈HPV感染率(46.0%)及HPV多重亚型感染率(47.8%)均为最高,各年龄组间HPV感染率差异显著(P均<0.01)。结论液相芯片技术可用于检测宫颈HPV感染及基因型分布。

液相基因芯片技术在崇明地区人乳头瘤病毒检测和分型中的应用

目的探究液相基因芯片技术在崇明地区人乳头瘤病毒（HPV）检测和分型中的应用。方法选取2011年5月至2013年4月该院妇科门诊就诊者宫颈脱落细胞500例,使用液相基因芯片技术对其进行HPV基因型检测。并对80例患者进行病理诊断,根据组织病理学将80例患者分为炎性反应组、细胞学正常组、宫颈癌组、宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ组、CINⅡ组、CINⅠ～Ⅱ组、CINⅢ组。将病理诊断结果和HPV DNA亚型分布结果结合分析,对崇明地区宫颈病变程度和HPV感染基因型的关系进行分析。结果 500例标本中共180例HPV阳性患者,HPV总感染率为36%,共检出22种基因型,按照感染率从高到低依次为HPV-16、HPV-52、HPV-58、HPV-18、HPV-11、HPV-6、HPV-31。其中高危型感染为85.96%,低危型感染为14.04%。500例标本中共180例HPV阳性患者,其中44例（24.44%）患者年龄为21～25岁的女性,11例（6.15%）患者年龄为51～67岁的女性,随着年龄的增大HPV阳性例数减少。随着宫颈病变级别的升高HPV感染率逐渐升高,两两比较结果显示,炎性反应组与正常组、CINⅢ组与CINⅡ组、宫颈癌组与CINⅡ组、宫颈癌组与CINⅢ组之间差异无统计学意义（P〉0.05）;其余11对两两对比差异具有统计学意义（P〈0.05）。随着宫颈病变级别的升高HPV多重感染率逐渐升高,但是仅炎性反应组与CINⅢ、CINⅡ组间差异有统计学意义（P〈0.05）。将组织病理学作为确诊标准,液相芯片HPV DNA检测CINⅢ、CINⅡ的特异度为76.63%,灵敏度为88.57%,阴性预测值为92.16%,阳性预测值为68.89%。结论崇明地区常见的HPV感染基因型为HPV-16、HPV-52、HPV-58、HPV-18、HPV-11、HPV-6、HPV-31。HPV阳性多发于年轻女性,且HPV多重感染和感染率均随着宫颈病变的程度加重而加重。因而液相芯片HPV DNA检查对大规模筛查和宫颈病变的临床诊断有十分重要的价值。

液相芯片技术在医学检验诊断中的应用

液相芯片技术可以从少量样本中快速得到大量的辅助诊断信息,正逐步从科学研究实验室进入临床实验室,在多种肿瘤标志物联合检测、自身抗体筛查、人类白细胞抗原分型及感染性病原体基因检测等方面具有重要的临床应用价值。现就液相芯片技术在医学检验中的应用做一综述。

液相芯片技术在中枢神经系统疾病诊断中的应用

生物芯片的出现是近年来高新技术领域中极具时代特征的重大进展,它是物理学、微电子学与分子生物学综合交叉形成的新技术,目前已经成为人们高效、准确、大规模地获取相关信息的重要手段之一。生物芯片主要包括基因芯片和蛋白芯片两大类,按寻址方式和最终检测载体又可分为固相芯片（Flatmicroarrays）和液相芯片（Liquid chip或Microsphere arrays）。

液相芯片技术在检测肺癌患者血清VEGF中的应用

目的探讨用液相芯片技术检测肺癌患者及健康人血清中血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平。方法用LuminexFLEXMAP3D仪和Human Cytokine/Chemokine试剂盒检测血清VEGF的表达水平,并确立其最适条件,对120例肺癌患者和348例健康人血清VEGF水平进行检测,分析两组对象血清VEGF水平的差异。结果确立了液态芯片技术检测血清VEGF的最适条件。肺癌患者血清VEGF均值为(295±205)pg/mL,明显高于健康人的(160±154)pg/mL,差异具有统计学意义(t=9.119,P<0.01)。结论确定的液态芯片技术检测血清VEGF的最适条件,且肺癌患者血清VEGF表达水平显著高于健康人。

液相芯片技术检测超排卵患者卵泡液中细胞因子水平

目的利用液相芯片技术检测控制性超促排卵患者卵泡液中8种细胞因子水平,比较不同妊娠结局患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中一般情况及卵泡液中各细胞因子水平的差异,以寻找潜在的与获得临床妊娠有关的细胞因子。方法采用液相芯片技术检测81例不孕症患者单一卵泡卵泡液中白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-5、IL-10、瘦素(Leptin)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-β、血管内皮生长因子(VEGF)水平,比较不同妊娠结局患者行IVF-ET周期中一般情况及卵泡液中各种细胞因子水平的差异。结果未临床妊娠者及临床妊娠者间在基础黄体生成素(LH)、注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)日孕酮(P)的差异有统计学意义,提示较未临床妊娠者,临床妊娠者基础LH及hCG日P较低,余各临床资料及卵泡液中细胞因子水平(IL-5、Leptin、MIP-1β、VEGF)的差异无统计学意义。结论研究结果初步提示卵泡液中IL-5、Leptin、MIP-1β、VEGF水平与IVF-ET临床妊娠的结局无关。

液相芯片技术在东莞市腹泻病原体检测中的应用

目的了解引起腹泻的病原体种类及其季节、年龄分布特征。方法收集2019~2021年251例腹泻患者的粪便标本,使用液相芯片技术检测腹泻病原体。结果沙门菌(13.94%、35/251)、轮状病毒A型(13.15%、33/251)、诺如病毒GⅡ型(8.37%、21/251)检出最多。合并感染33例(13.15%、33/251)。夏秋季腹泻病原体以沙门菌为主(8.76%、22/251),冬春季腹泻病原体以轮状病毒A型为主(12.35%、31/251)。婴幼儿(<18岁)轮状病毒A型常见(13.15%、33/251),病原体种类检出率较成人高。结论腹泻病原体种类随季节、年龄分布有差异;利用液相芯片技术可快速筛查腹泻病原体,提供合并感染证据,为临床治疗和疾病防控提供数据支持。

液相芯片分析技术检测乳腺浸润性导管癌患者血清中VEGF和MMP-9的临床意义

目的利用液相芯片分析技术检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在乳腺浸润性导管癌(infiltrative ductal carcinoma,IDC)、良性乳腺纤维瘤患者和正常人血清中的表达,探讨其临床诊断价值。方法采用液相芯片分析技术对301例乳腺浸润性导管癌、83例乳腺良性纤维瘤患者及40例正常人血清中VEGF、MMP-9表达水平进行检测,并分析118例IDC患者手术治疗前后VEGF和MMP-9浓度变化。结果血清中VEGF和MMP-9的表达水平:乳腺浸润性导管癌患者分别为(152.76±150.28)pg/ml和(945.09±749.43)ng/ml;乳腺纤维瘤患者为(29.86±16.10)pg/ml和(563.59±183.29)ng/ml;正常人表达量为(52.45±51.39)pg/ml和(267.33±215.60)ng/ml;IDC患者显著高于乳腺纤维瘤患者和正常人(均P<0.05)。乳腺癌患者血清中VEGF、MMP-9表达水平与年龄无关(P>0.05);而与临床分期、原发灶大小及淋巴结转移相关(均P<0.01)。118例IDC患者术后复查血清VEGF、MMP-9表达量分别(135.26±131.20)pg/ml和(680.36±551.77)ng/ml,与术前相比,表达水平明显下降(均P<0.05)。结论利用液相芯片分析技术定量分析血清中VEGF和MMP-9可成为乳腺癌临床诊断和预后评估的有效指标。

液相芯片技术同时检测莱克多巴胺、盐酸克伦特罗和沙丁胺醇

建立了一种同时检测兽药莱克多巴胺（RAC）、克伦特罗（CL）、沙丁胺醇（SAL）的多残留的新方法。采用液相悬浮芯片技术,基于间接竞争法的原理,将3种兽药抗原分别偶联到不同的荧光微球上作为探针,以藻红蛋白（PE）荧光标记二抗为信号,通过优化实验条件,分别建立3种兽药的标准曲线。基于特异性识别实验,建立3种兽药同时检测的标准曲线。结果表明,同时检测的3条曲线均呈现良好的线性相关,线性相关系数（R2）均大于0.99,RAC,CL和SAL的检测范围分别为1~500μg/L,0.1~500μg/L,1~100μg/L,检出限分别为0.68,0.095和0.88μg/L。与其它结构类似物的交叉反应率均低于1.5%,实际样品中的加标回收率令人满意。

液相芯片技术检测耐多药结核分枝杆菌的方法分析

目的分析液相芯片技术检测耐多药结核分枝杆菌的临床价值。方法以t G315、rpo B526和rpo B531的耐药突变基因位点模拟性质粒为实验材料,使用液相芯片技术,开展耐多药结核分歧杆菌检测。结果此法能够检测出最低的质粒浓度为1 ng/m L,灵敏度较高。5次检测可判断出kat G315、rpo B526以及rpo B531位点基因型,结合相关结果,计算SD值和荧光值。阴性对照的MFI为(37±9.95),质粒样本变异系数为6.73%~13.75%,证实此法稳定性强。结论该项技术在检测结核分支杆菌的灵敏性、重复性较好,可靠性高,能够精准的检测出各个基因位点突变情况,值得说明的是,液相芯片技术经济性强,操作简单,快速,值得进一步在临床中推广使用。

液相芯片技术在食品安全领域的研究进展

液相芯片技术(liquid chip technology)又称为灵活的多组分析(flexible multi-analyte profiling,x MAP)技术,是利用偶联特异性探针的荧光编码微球捕获待测核酸或蛋白后,逐一、快速地通过流式细胞仪双色激光探测区,进行定性或定量检测。我国将液相芯片技术应用在食品安全领域仍处于起步阶段,主要集中在食源性致病菌、转基因食品和农兽药残留等食品安全检测方面。液相芯片技术同时检测多种待测分子,具有高通量、快速、准确、所需样品量少、检测范围宽、可自由组合检测项目等优点。本文检索了国内外的文献,简要概述液相芯片技术的发展历史和基本原理,并介绍该技术及其商品化试剂盒在食品安全和其他领域上的研究应用,最后对液相芯片技术的发展前景做出展望。

液相芯片技术联合等位基因特异性引物延伸反应检测结核分枝杆菌耐多药突变

目的建立一种耐多药结核分枝杆菌检测方法。方法设计并构建含有kat G315、rpo B526、rpo B531耐药基因突变位点的质粒;通过PCR扩增及纯化、等位基因特异性引物延伸反应（ASPE）、荧光微球杂交反应及液相芯片系统Luminex 200检测;并对该方法反应条件进行探索及方法学评价。结果 ASPE反应中Tsp DNA聚合酶最适浓度为0.025 U/μL,杂交荧光微球浓度为每μL 100个,链霉亲和素藻红蛋白浓度及杂交时间分别为2μg/m L和20 min;所建立方法的检测灵敏度最低可达1ng/m L;当质粒浓度为1.5×105ng/m L时,批间和批内变异系数（CV）分别为6.48%～12.15%和0.35%～6.92%;当质粒浓度为2 ng/m L时,批间和批内变异系数（CV）分别为5.73%～10.77%和0.97%～8.91%;特异性引物探针与其他突变位点均无交叉反应。结论液相芯片技术联合等位基因特异性引物延伸反应检测耐多药结核分枝杆菌灵敏且具有成本低、高通量等特点,极具临床应用潜力。

粪便蛋白Luminex液相芯片检测系统构建及其对结直肠肿瘤早期诊断的价值

目的基于Luminex液相芯片检测系统构建粪便人源性蛋白诊断体系,并评估其对结直肠肿瘤的早期诊断价值。方法收集2021年1月~2023年1月蚌埠医学院第一附属医院收治的结直肠癌(CRC)患者70例为CRC组、结直肠腺瘤(CRA)患者42例为CRA组,以及同期健康对照(HC)受试者38例为HC组。收集各组受试者粪便,使用Tris-Hcl缓冲液提取粪便总蛋白,通过Luminex液相芯片检测技术分析3组受试者粪便中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、人源性视黄醇结合蛋白4(RBP4)、甲壳素酶-3样蛋白1(CHI3L1)和补体成分3a(C3a)的水平差异;收集受试者外周血,分离血清检测癌胚抗原(CEA)和糖类抗原19-9(CA19-9)的水平;使用受试者工作曲线(ROC)分析MMP-9、RBP4、CHI3L1和C3a联合以及CEA和CA19-9联合对CRC、CRA、CRC和CRA的诊断效能,并比较两种组合诊断效能的差异。结果CRC组患者粪便中MMP-9、RBP4、CHI3L1和C3a水平均显著高于HC组(P<0.05),CRC组粪便中MMP-9和CHI3L1水平显著高于CRA组(P<0.05),但是RBP4和C3a在CRC和CRA组间并无显著性差异(P>0.05);另外,CRC患者外周血中CEA和CA19-9水平均显著高于HC组和CRA组(P<0.05),但是CRA组和HC组之间无显著性差异(P>0.05)。ROC曲线分析显示,MMP-9、RBP4、CHI3L1和C3a联合诊断CRC的灵敏度为91.4%,特异度为100.0%,联合诊断CRA的灵敏度为81.0%,特异度为89.5%,联合诊断CRC和CRA的灵敏度为83.9%,特异度为97.4%。Z检验比较分析显示,粪便蛋白MMP-9、RBP4、CHI3L1和C3a联合诊断CRC,CRA以及CRA和CRC的效能显著优于外周血肿瘤标志物CEA和CA19-9(P<0.05)。结论Luminex液相芯片检测粪便人源性蛋白RBP4、MMP-9、CHI3L1、C3a对结直肠肿瘤早期诊断具有价值且优于外周血肿瘤标志物CEA和CA19-9,具有较高的临床应用推广意义。

液相芯片技术检测儿童急性呼吸道感染病原体的研究

目的探讨液相芯片技术快速检测呼吸道病原体的可行性,为重大传染病原体核酸快速应急检测平台的建立提供实验依据。方法采用xTAG~?Respiratory Viral Panel Fast v2试剂盒对74例咽拭子临床标本进行检测,结果与实时荧光定量PCR(RT-PCR)进行比较。结果 74例咽拭子临床标本经液相芯片技术与RT-PCR检测,阳性率分别为77.0%和68.9%,差异有统计学意义(P<0.05);其中呼吸道合胞病毒、鼻病毒、肠道病毒、甲型H1N1流感病毒、腺病毒及人博卡病毒检出率差异均有统计学意义(P<0.05)。结论液相芯片技术可以较准确地鉴定呼吸道病原体和检测混合感染的临床标本,具有快速、高通量等优势,可应用于呼吸道病原体的快速应急检测。