高效液相荧光色谱法同时测定六神曲中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A

目的建立一种用免疫亲和柱净化-柱后光化学衍生-高效液相色谱同时检测六神曲中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的方法。方法样品采用60%乙腈超声提取,免疫亲和柱净化,采用XBridge^(®)Phenyl苯基色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈和0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,光化学衍生仪衍生,通过切换荧光波长检测。结果黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A标准曲线的线性范围分别为0.006~0.108、0.500~2.500和0.202~1.009 ng,6种毒素的线性关系在0.9994以上,检出限分别为1.2、100.0和40.3 ng/ml,平均加标回收率为73.2%~92.3%,相对偏差为2.1%~5.4%。结论该方法具有专属性强、操作方便等特点,能够有效用于六神曲中3种毒素的同时检测和安全质量控制。

高效液相荧光色谱法检测婴幼儿配方食品中7种母乳低聚糖

目的建立高效液相荧光色谱法(high performance liquid chromatography with fluorescence detector,HPLC-FLD)检测婴幼儿配方食品配方奶粉中7种母乳低聚糖(human milk oligosaccharides,HMOs)的分析方法。方法婴幼儿配方食品复溶后,首先通过酶解处理(β-半乳糖苷酶和淀粉葡萄糖苷酶)去除婴幼儿配方食品基质中存在的HMOs干扰物,例如麦芽糖糊精和低聚半乳糖,酶解后向样品溶液中添加内标物质,后使用衍生化方法使得目标HMOs和内标物质均标记荧光基团(2-氨基苯甲酰胺),即可运用HPLC-FLD对其进行检测。该方法使用HMOs外标法进行目标物的定量分析,且标准物质信号均亦通过内标物矫正。结果婴幼儿配方食品中7种HMOs可通过酶解、衍生及HPLC-FLD检测,使用外标法进行定量分析。通过内标物质可矫正信号,减少实验偏差。7种HMOs[2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose,2’-FL)、3-岩藻糖基乳糖(3-fucosyllactose,3-FL)、双岩藻糖基乳糖(difucosyllactoses,DFL)、乳糖-N-四糖(lacto-N-tetraose,LNT)、乳糖-N-新四糖(lacto-N-neotetraose,LNnT)、3’-唾液酸乳糖(3’-sialyllactose,3’-SL)和6’-唾液酸乳糖(6’-sialyllactose,6’-SL)]可检测范围分别为20.0~1247.9、18.3~1146.2、7.6~455.1、16.4~821.9、16.3~814.2、7.2~431.6、8.0~477.2 mg/100 g powder,平均回收率为91%~110%,相对标准偏差低于3%。结论该方法可实现0~36月龄婴幼儿配方食品中7种HMOs的定量检测,结果准确可靠。

高效液相荧光色谱法测定黄连上清片中盐酸小檗碱含量

目的采用高效液相荧光色谱法建立测定黄连上清片中盐酸小檗碱的方法。方法色谱柱Waters C_(18)(4.6mm×250mm,5μm),乙腈-0.033mol·L^(-1)磷酸二氢钾(50∶50),荧光检测器激发波长为355nm,发射波长为533nm。结果盐酸小檗碱浓度在2.418~241.8μg·m L^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系,r为0.9996;盐酸小檗碱加样回收率的平均值为99.5%,RSD=2.4%。结论本方法简便、准确可靠,可以用于测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量。

高效液相荧光色谱法测定人血浆中坎地沙坦的质量浓度

目的建立测定人血浆中坎地沙坦的高效液相荧光色谱法。方法血浆样品经20%高氯酸沉淀,色谱柱为BaiAn-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温为30℃,以甲醇-0.02 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH=4.9,70∶30)为流动相,流速为1 mL/min,荧光检测激发波长(λex)为265 nm,发射波长(λem)为395 nm。结果血浆内源性杂质不干扰测定,坎地沙坦的质量浓度线性范围为2～300μg/L,定量下限为2μg/L,日内、日间精密度的RSD均小于8%。样品3次冻融、提取后,4℃下12 h内稳定性良好。结论该法灵敏、快速、准确,操作简便,可用于坎地沙坦的临床药代动力学研究。

高效液相荧光色谱法测定人血浆中坎地沙坦的浓度

目的建立测定人血浆中坎地沙坦的高效液相荧光色谱(HPLC-FLU)法。方法用正乙醚提取血浆样品,以甲醇-0.02mmol/L磷酸盐缓冲液(pH=3.0,68∶32,V/V)为流动相,流速为1mL/min,色谱柱为BaiAn-C18柱(150mm×4.6mm,5μm),柱温为30℃,荧光检测激发波长(λex)265nm,发射波长(λem)395nm。结果血浆内源性杂质不干扰待测物的测定,坎地沙坦质量浓度与峰面积的线性范围为2～300μg/L,定量下限为2μg/L,日内、日间精密度RSD均小于8%。样品3次冻融及提取后,4℃下12h内稳定性良好。结论HPLC-FLU法灵敏、快速、准确、简便、线性范围宽,可用于坎地沙坦的临床药代动力学研究。

高效液相荧光色谱法测定坤宝丸中赭曲霉毒素A

目的 建立高效液相荧光色谱法测定坤宝丸中赭曲霉毒素A含量。方法 样品采用70%甲醇高速振荡提取,免疫亲和柱层析净化。分析采用Inertsil ODS3色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相2%磷酸-乙腈(57∶43);体积流量1 mL/min;柱温30℃;荧光检测激发波长333 nm,发射波长477 nm。结果 赭曲霉毒素A在11.28~1 128 pg范围内线性关系良好(R^(2)=1.000 0),加样回收率83.4%~103.6%,RSD 2.8%~6.6%。结论 该方法专属性强,灵敏简便,可用于坤宝丸安全性控制。

柱前荧光衍生-高效液相色谱法测定尿中雌二醇

建立了对硝基苯甲酰氯柱前荧光衍生 高效液相色谱法测定尿中 1 7α 和 1 7β 雌二醇的方法。尿样经盐酸水解、固相萃取柱浓缩、净化分离后 ,在无水条件下与对硝基苯甲酰氯反应生成荧光产物 ,再用高效液相色谱 荧光检测器测定。流动相为乙腈 水 (5 5∶45 )。线性范围为 7.0× 1 0 - 3～ 1 0mg L ,检出限均为 7.0× 1 0 - 3mg L,相对标准差分别为 0 .93 %～ 1 .5 %和 0 .88%～ 1 .3 %。平均回收率分别为 83 .5 %和 88.2 %。

反相高效液相-荧光色谱法测定美托洛尔及其代谢物α-羟基美托洛尔血浆尿液药物浓度

目的建立人血浆及尿液中美托洛尔及α-羟基美托洛尔的高效液相-荧光色谱法。方法以比索洛尔为内标,采用Agilent ZORBA×SB-C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相:乙腈-0.05mol/LpH3.5磷酸二氢钾三乙胺水溶液(0.3%三乙胺)(90∶10);流速1ml/min;荧光检测器:激发波长(Ex):216nm,发射波长(Em):312nm。结果血浆中美托洛尔在10～400ng/ml范围内(r=0.999),α-羟基美托洛尔在5～360ng/ml范围内(r=0.9991)线性良好。其绝对回收率分别为89%～98%和77%～94%,相对回收率分别为94%～106%和95%～99%。精密度:日内RSD分别<5.8%和9.3%,日间RSD分别<8.0%和9.0%;尿液中美托洛尔在10.0～4000ng/ml范围内(r=0.999),α-羟基美托洛尔在5～2400ng/ml范围内(r=0.9991)线性良好。其绝对回收率分别为90%～95%和79%～92%,相对回收率分别为96%～101%和93%～103%。精密度,日内RSD分别<8.9%和6.6%,日间RSD分别<8.3%和7.7%;均符合药代动力学研究要求。结论用该法研究中国健康成年志愿者口服美托洛尔的体内药物代谢,及研究中国人群CYP2D6基因多态性与美托洛尔代谢的关系灵敏、可靠、实用。

荧光高效液相色谱法测定水果中阿维菌素残留量

建立了水果中阿维菌素残留量的荧光高效液相色谱分析方法。样品以乙腈提取后以C18固相萃取柱净化,以三氟乙酸酐和N-甲基咪唑衍生化后,经C18柱分离,HPLC–FD(Ex:365nm;Em:470nm)测定。以梨为样品进行了方法的验证,在5、20、50ng/g3个不同水平上进行了加标回收实验,回收率在92.45%～96.16%之间,RSD在10%以下;在5～100ng/mL的浓度范围内绘制标准曲线,线性关系良好。

高效液相色谱-荧光法测定SLE患者血清色氨酸及其代谢产物

目的建立一种同时测定血清色氨酸（tryptopban，Trp）、犬尿氨酸（kynurenine，Kyn）和犬尿喹啉酸（kynurenic acid，Kyna）的高效液相色谱-荧光检测法（HPLC—FD），并用此法检测SLE患者血清中Trp及其代谢产物Kyn、Kyna的含量。方法血清标本经0．624mol／L的高氯酸溶液去除蛋白质后取上清液20μl直接进样分析测定。色谱柱为Hypersil C18柱，流动相为0．20mol／L醋酸锌、8．3mmoL／L醋酸和2．5％的乙腈；流速为1．5ml／min；荧光检测激发波长和发射波长在0～11min分别为365nm和480nm，11～15．5min变换为344nm和404nm，15．5～20min为254nm和404nm。采用建立的方法测定体检健康者和SLE患者血清Trp、Kyn和Kyna的含量。结果Trp的线性范围为0．610～196μmol／L，最低检出浓度为0．005μmol／L，平均回收率为103．71％；Kyn线性范围为0．049～98μmol／L，最低检出浓度为0．025μmol/L，平均回收率为97．45％：Kyna线性范围为1．050-1047nmol/L，最低检出浓度为0．050nmol/L，平均回收率为100．60％。日内、日间测定值的变异系数均小于5％。苯丙氨酸、酪氨酸、5-羟色胺对测定均无干扰。与正常对照组比较，SLE患者的Trp含量显著减少，Kyn和Kyna的含量及Kvn／Trp的比值显著增高。结论建立的HPLC—FD法能同时测定血清中Trp、Kyn和Kyna的含量，简便、快速、灵敏、特异。

高效液相色谱-荧光检测法测定萘哌地尔血药浓度及其在健康人体的药代动力学研究

目的建立测定人血清中萘哌地尔(抗高血药)的高效液相色谱-荧光检测法,研究萘哌地尔片剂在健康人体的药代动力学。方法10名健康男性志愿者单次口服萘哌地尔片剂50mg,用高效液相色谱-荧光检测法测定血清中萘哌地尔浓度,用3P87计算其主要药代动力学参数。结果在0.5～100ng·mL-1内线性良好,日内差≤7.83%,日间差≤9.08%,回收率为98.04%～99.22%;Cmax为(97.65±16.91)ng·mL-1;tmax为(0.53±0.13)h;t1/2Ke为(3.42±0.80)h;AUC0-16为(123.64±31.98)ng·h·mL-1。结论本方法灵敏、准确,可用于人体药代动力学研究。

液相色谱-荧光检测器测定保健食品中大豆异黄酮方法研究

目的建立了高效液相色谱法-荧光检测器测定食品中De含量的方法,探讨样品测定的影响因素。方法样品用甲醇+水(80+20,v/v)超声提取30 m in,离心定容后过0.45μm滤膜,经200×4.6mm 5μm的C18柱分离,以甲醇+水作流动相,梯度洗脱,荧光检测器进行测定,检测器激发波长Ex=366 nm、发射波长Em=417 nm。结果方法线性范围为0.5μg/m l-30μg/m l,回归曲线为Y=13924X-8625,r=0.9995。样品的加标回收率为90.2%-108.4%,RSD在0.93%-5.2%之间。结论该方法前处理简单,干扰少,准确快速,可作为测定保健食品中大豆异黄酮含量的方法。

高效液相色谱荧光法测定血液透析器中双酚A溶出量

建立一种高效液相色谱荧光法测定血液透析器中双酚A溶出量。采用密度为0.9373~0.9378 g/mL的乙醇水混合液作为浸提溶剂,模拟临床使用条件,在(37±1)℃的恒温水浴中循环浸提6 h。选择乙腈–水为流动相进行梯度洗脱。荧光检测器激发波长和发射波长分别选择227 nm和313 nm。双酚A的质量浓度在0.005~0.75μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数为0.9999。方法检出限为0.0013μg/mL。样品加标回收率为92.67%~97.87%,测定结果的相对标准偏差(RSD)为1.10%~2.66%(n=3),符合中国药典规定。所建立的方法制样简单,适用于血液透析器中的双酚A含量测定。

反相高效液相色谱-荧光检测法测定大鼠血浆中延胡索乙素的浓度

目的：建立大鼠血浆中延胡索乙素浓度的高效液相色谱-荧光检测法。方法：色谱柱为Phenomenex C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相为乙腈-0．1％磷酸（用三乙胺调至pH6．15）（60：40）；柱温：30℃；流速：1．0mL·min^-1；荧光检测器：激发波长：231nm，发射波长：324nm：进样量：60μL.结果：标准曲线的线性范围为5～1000ng·mL^-1（r=0．9989，n=8），低、中、高3种浓度的绝对回收率分别为（90．1±2．4）％、（94．1±2．7）％、（93．6±3．0）％；方法回收率分别为（93．4±1．2）％、（96．1±2．7）％、（95．8±1．5）％；日内精密度RSD≤2．3％，日间精密度RSD≤4．0％。本方法的检测限0．5ng·mL^-1。结论：本方法快速、简便、灵敏、准确.

HPLC-荧光检测测定人全血中丙泊酚浓度

目的 建立反相高效液相色谱 (HPLC) 荧光检测测定人全血中丙泊酚浓度的方法。方法 用环己烷提取全血中的丙泊酚 ,以百里酚为内标定量 ,用HPLC 荧光检测器测定丙泊酚含量。结果 本法测定的线性范围为 5～ 30 0 0ng/ml,该方法回收率高 ,重现性好。结论 本方法灵敏 ,选择性强 ,快速、准确地测出全血中微量丙泊酚的含量 。

超高效液相-荧光色谱法测定食品中的甘素

建立了超高效液相-荧光色谱法(UPLC-FLR)测定食品中甘素的分析方法。样品采用5.0 mM醋酸/醋酸铵(pH6.0)缓冲溶液超声提取,Waters Oasis HLB固相萃取柱进行净化。采用Waters ACQUITY UPLCRBEH C18(100 mm×2.1 mm,i.d,1.7 um)色谱柱,以乙腈、5.0 mM醋酸/醋酸铵(pH 6.0)缓冲溶液为流动相梯度洗脱,在7.9 ng/mL^1000 ng/mL线性范围内,线性相关系数r2为0.999 9,检出限(LOD)为0.341 5 ug/kg,最低定量限(LOQ)为2.49 ug/kg。空白样品中添加三个浓度水平(1.25 ug/g,2.50 ug/g和3.75 ug/g),平均回收率为77.33%~100.06%,相对标准偏差在1.146%~1.940%之间,此方法运行时间仅5 min,且灵敏,快速准确,完全能满足食品中甘素的快速,高灵敏度的要求。

4,9-脱水河豚毒素国家标准样品的研制

研制4,9-脱水河豚毒素国家标准样品。以河豚鱼卵巢为原料,提取制备4,9-脱水河豚毒素,采用红外光谱(IR)、高分辨质谱和核磁共振谱(NMR)进行结构确证。样品分装成140瓶后,采用柱后衍生–高效液相荧光法进行均匀性、稳定性检验和定值分析。从样品中随机抽取15瓶进行均匀性检验,经F检验表明在95%的置信区间范围内样品均匀性良好;稳定性考察按照40℃加速试验稳定性(6个月)进行,结果表明在考察期间内样品稳定性良好;标准样品经国内8家具有分析资质的实验室进行协同定值,并评定了定值结果的不确定度,4,9-脱水河豚毒素标准样品定值结果为97.77%,相对扩展不确定度为0.4%(k=1.96)。该标准样品达到国家标准样品的技术要求,可用于有关脱水河豚毒素的方法校正和质量控制。

盐酸伊托必利片剂在健康人体的药动学研究

目的建立盐酸伊托必利人体内血药浓度的测定方法,并对口服盐酸伊托必利片剂后人体内的药动学过程进行研究。方法10名健康男性志愿者单剂量po100mg盐酸伊托必利片剂,分别于服药前及服药后0.25,0.5,1,1.5,2,3,4,6,8,10,12及24h采集血样。用高效液相荧光色谱法(HPLC-FLD)测定血清中盐酸伊托必利的质量浓度(ρ),并采用3P97药动学程序对试验数据进行处理,求算有关药动学参数。结果单剂量口服盐酸伊托必利片剂后,其药-时曲线经拟合符合口服二室模型,ρmax为(617.59±222.91)μg·L-1,tmax为(0.75±0.35)h,t1/2β为(5.51±1.33)h,V/F为(107.8±50.2)L,CLs为(42.2±8.4)L·h-1,AUC0-∞为(2721.98±539.28)μg·h·mL-1。10名健康志愿者均未出现不良反应。结论试验建立的盐酸伊托必利人体内血药浓度测定方法简便、可靠;依托必利单剂量口服给药后在中国健康人体耐受良好,人体内的药动学行为与国外文献报道基本一致。

健康人单次口服不同剂量依地普仑片的药动学

目的:研究中国健康志愿者单次口服不同剂量依地普仑草酸盐片的体内药动学特点。方法:32例受试者单次空腹口服依地普仑草酸盐片,剂量分别为10(n=10),20(n=12),30 mg(n=10)。用HPLC荧光检测法测定血浆中的依地普仑浓度,用DAS统计软件进行数据处理,计算药动学参数。结果:草酸依地普仑片药动学特点符合二房室模型,为线性药动学特点,单次口服依地普仑10,20和30 mg的主要药动学参数是:C_(max)分别为(20.91±4.94),(40.28±10.13)和(57.66±10.51)μg·L^(-1);T_(max)分别为(3.80±1.23),(4.18±0.98)和(4.00±1.49)h;t_(1/2)分别为(34.08±26.58),(36.02±23.68)和(36.95±11.58)h;AUC_(0～t)分别为(846.8±466.7),(1437.5±535.5)和(2277.5±506.5)μg·h·L^(-1),AUC_(0～∞)分别为(975.7±622.4),(1587.1±731.2)和(2496.6±707.4)μg·h·L^(-1)。药动学参数的个体间差异较大,CV%最大值为77.99%。女性受试者和男性受试者的血浆清除率(CL/F)及单位剂量的AUC_(0～t)和AUC_(0～∞)值相似。结论:中国健康受试者单次口服不同剂量草酸依地普仑的药动学参数具有线性药动学特点。

草酸依地普仑片多次给药药动学研究

目的:探讨健康国人多次口服草酸依地普仑片体内药动学特点。方法:9名健康受试者,每日空腹口服草酸依地普仑片10mg,连续8d,采用高效液相色谱荧光检测法测定血浆中依地普仑浓度,并计算药动学参数。结果:多次口服10mg依地普仑片后药-时曲线符合二室模型,其Cmax,tmax,t1/2,AUC0-132,AUC0-∞,AUCSS,波动度DF,累积系数R分别为(38.0±6.4)μg·L-1,(3.1±1.2)h,(36.8±6.4)h,(1580.0±778.8)μg·h·L-1,(1772.0±804.0)μg·h·L-1,(598.5±124.4)μg·h·L-1,(79.2±27.5)%,(1.51±0.07)。结论:草酸依地普仑多次给药后在健康中国人体内耐受良好,人体内的药动学行为与国外文献报道基本一致。