液相蛋白芯片技术及其在中医药研究中的应用

以荧光微球为载体基质且有别于固相蛋白芯片的液相蛋白芯片技术,是美国纳斯达克上市公司Luminex于本世纪初研制出的后基因组时代的技术平台,通常用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析及蛋白质一蛋白质相互作用等研究,可广泛应用于生物医学包括中医药研究的各个领域。液相蛋白芯片具有灵活性好、灵敏度高、操作简单、通量大等特点,可进行细胞因子、激酶、肽类等的检测,并可用于中药复方和单体的药理学研究及有效方药和成分的筛选。

液相蛋白芯片检测三种肿瘤标志物反应模式的建立及方法学评价

目的建立用液相蛋白芯片检测人血清三种肿瘤标志物的反应模式，并对其进行方法学评价。方法将癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和总前列腺特异性抗原（tPSA）的包被抗体分别交联于不同荧光编码的微球上，并自行制备生物素标记抗体和抗原标准品，建立双抗体夹心反应模式，评价液相蛋白芯片的检测范围、最低检测限、精密度等指标；将检测结果与化学发光免疫分析（CLIA）、时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）进行相关性分析。结果CEA、AFP、tPSA的线性范围分别为0．063～200、0．052—66．6、0．008～10ng／ml；最低检测限分别为31．3、13．0、5．2pg／ml；批内变异系数（cv）为6．2％～9．1％，批间CV为7．5％-13．5％；检测100（109）份临床血清标本的灵敏度为96．2％～98．2％，特异度为97．7％～98．2％，准确度为97％-98％；液相蛋白芯片与CLIA及TRFIA结果均呈明显正相关，P均〈0．001。结论液相蛋白芯片检测多种肿瘤标志物具有线性范围广、灵敏度高、重复性好、操作简便、标本用量少等优点，具有临床应用潜力。

建立检测禽流感病毒抗体的液相蛋白芯片方法

本实验通过液相蛋白芯片技术(Flexible Multi Analyte Profiling,xMAP)建立了一种禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)抗体检测方法。主要包括蛋白抗原性分析、xMAP检测方法的优化、特异性分析、灵敏性分析和临床样本检测等内容,研究结果表明所选用的流感病毒核蛋白(Nucleoprotein,NP蛋白)抗原性良好,通过对蛋白包被浓度的优化初步建立了检测禽流感病毒抗体的xMAP方法。经过验证该方法特异性良好,与其他禽病原抗体无交叉反应。xMAP灵敏度高于ELISA方法。批内及批间变异系数均在10%以内,稳定性好。检测临床样品与ELISA试剂盒检测的符合率为100%。综上,本研究成功建立了一种检测AIV抗体的xMAP方法。

基于液相蛋白芯片的多指标同时检测方法诊断营养状况异常的性能评价

目的:对基于液相蛋白芯片的多指标同时检测方法在诊断营养状况异常时的联合诊断性能进行评价。方法:使用免疫比浊法对25份人血清的血清铁蛋白(SF)进行检测,分别使用液相蛋白芯片和酶联免疫法对血清中SF、转铁蛋白受体(sTfR)、C反应蛋白(CRP)和前白蛋白(PA)4项指标进行检测;采用配对比较t检验或Wilcoxon匹配符号秩和检验对不同检测方法结果的一致性进行比较;采用配对卡方检验对不同检测方法诊断能力进行比较;计算不同检测方法的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、约登指数及Kappa值等真实性与可靠性指标,并对液相蛋白芯片法联合诊断营养指标异常的真实性与可靠性进行评价。结果:液相蛋白芯片法与其他方法之间在诊断铁缺乏、CRP异常及PA重度缺乏时具有等效的诊断能力。铁缺乏的判断中,液相蛋白芯片法与免疫比浊法的诊断真实性与可靠性相同,灵敏度均为40.00%、特异度均为85.00%、阳性似然比均为2.67,阴性似然比均为0.71、约登指数均为0.25、Kappa值均为0.45;CRP异常的判断中,液相蛋白芯片法的特异度和阴性似然比分别为100.00%和0.50,优于酶联免疫法的96.00%和0.00;对PA重度缺乏判断时,液相蛋白芯片法的特异度为100.00%,阴性似然比为0.14,约登指数为0.86,Kappa值为0.70,分别优于酶联免疫法的50.00%,0.00,0.50和0.62。结论:在评价营养状况时,液相蛋白芯片法的联合诊断性能基本与免疫比浊法、酶联免疫法分别检测所获得结果的联合诊断性能等效,其具有更进一步开展应用的可能。

液相蛋白芯片法检测胱抑素C的条件优化与方法学评价

目的优化液相蛋白芯片检测胱抑素C(cystatin C,CysC)的条件并对其进行方法学评价。方法采用液相蛋白芯片检测技术的双抗夹心法对CysC进行检测。在确定捕获抗体与检测抗体的最佳浓度组合的基础上,通过确定生物检测限与检测下限、绘制S型曲线和判断线性范围、建立标准曲线与回归方程对检测条件进行优化。对检测方法的正确度、精密度、可报告范围、分析特异性进行方法学评价。结果液相蛋白芯片法检测CysC时捕获抗体与检测抗体的最佳浓度组合为26.6μg/mL与1∶800;检测下限和生物检测限分别为0.037和0.237 ng/mL;回归方程为y=-3.315x^(2)+283.04x+160.89,R^(2)=0.9921;该方法检测CysC的相对偏移为5.81%;稀释回收率为70.35%~84.91%(n=3);加标回收率为79.94%~122.41%(n=3);方法学比对实验的相关系数r=0.616,P<0.05,两种方法检测结果间的差异无统计学意义(t=0.948,P=0.358);批内精密度为3.54%~4.03%(n=10);中间精密度为12.07%~15.05%(D=5,n=3);可报告范围为0.26~3784.04 ng/mL;分析特异性试验结果显示,高、低浓度血红蛋白(160.00、71.11 g/L)对检测结果存在不同程度的干扰。结论本研究完成了利用液相蛋白芯片检测CysC的条件优化与方法学评价。

牛地方流行性白血病液相蛋白芯片检测方法的建立

应用xMAP液相芯片技术原理,以原核表达的重组牛白血病病毒gp51蛋白为抗原,建立了检测牛白血病病毒抗体的LiquiChip液相蛋白芯片检测方法,并进行了特异性、敏感性、重复性与稳定性试验。结果表明,该方法对牛白血病病毒阳性血清检测阳性,对其他常见牛病毒阳性血清检测阴性,表明特异性好;液相蛋白芯片方法对牛白血病病毒抗体的检测敏感性可达119.7ng/μL,对多份牛白血病病毒阳性血清的检测结果显示该方法的检测敏感性与商品化ELISA试剂盒无显著差异;对3份牛白血病病毒阳性血清进行4次重复检测,批内、批间的变异系数均低于10%。所制备的偶联微球芯片保存3个月,其检测结果无显著差异。采用该方法对169份临床牛血清样品进行检测,检出阳性率达57.4%,该检测结果与瑞典进口ELISA试剂盒检测结果的符合率为94.67%。本方法为牛地方流行性白血病的进出境检疫、疫病监测和流行学调查研究提供了一种特异、敏感的新型快速检测技术。

液相与固相蛋白芯片检测多肿瘤标记物的应用比较

[目的]比较液相与固相蛋白芯片检测多肿瘤标记物的临床应用效果,并探讨液相蛋白芯片应用于临床检验的可行性。[方法]分别用液相与固相蛋白芯片方法检测45例临床送检样本的AFP、CA125、CA242及CEA,对两种方法的操作步骤、有效检测范围、参考临界值及检测结果进行比较。[结果]与固相蛋白芯片相比,液相蛋白芯片检测多肿瘤标记物的操作至少节省1h,标本用量节省80μl,线性范围至少增大1倍;两种方法检测AFP、CA125、CA242及CEA的参考临界值相同,阴阳性判断结果的符合率分别为97.78%(44/45)、86.67%(39/45)、88.89%(40/45)、86.67%(39/45)。统计学分析表明两种方法检测的阴阳性结果无明显差异。[结论]液相蛋白芯片检测多肿瘤标志物具有操作简便、标本用量少、线性范围广、准确度高的优点,可推广应用于临床检验。

5种重要虫媒病毒液相蛋白芯片多重检测方法的建立及应用

目的建立森林脑炎、乙型脑炎、登革热、基孔肯雅和刚果-克里米亚出血热5种虫媒病毒的液相蛋白芯片检测方法,为虫媒病毒的筛查检测提供一种新方法。方法将病毒抗原包被微球,采用间接法原理,利用病毒抗体和阳性血清建立并优化5种虫媒病毒液相蛋白芯片检测方法。对临床样本进行检测,评价液相蛋白芯片方法的敏感性、准确性。结果以病毒抗体和阳性血清建立的5种虫媒病毒液相蛋白芯片检测方法,病毒抗体及生物素标记二抗的孵育时间均为1 h,生物素标记羊抗兔/鼠/人Ig G的最佳稀释度为1∶100,能对5种虫媒病毒进行准确检测。该方法具有高通量、快速、敏感、特异等特点。结论本研究所建立的5种虫媒病毒液相蛋白芯片检测方法,可用于这5种虫媒病毒的同时筛查检测,适用于国境口岸对虫媒病毒进行筛查检测,能提高检测的效率,满足口岸检疫中快速检验的要求。

Luminex液相蛋白芯片检测一氧化氮合酶抑制剂对骨关节炎患者软骨基质金属蛋白酶表达的影响

目的应用Luminex液相蛋白芯片检测一氧化氮合酶（NOS）抑制剂对骨关节炎（OA）患者软骨基质金属蛋白酶（MMPs）表达的影响，以及NOS抑制剂改善OA代谢的途径。方法研究经本院医学伦理委员会批准并获取患者的知情同意。无菌条件下，取15例重度OA需行关节置换术患者的关节软骨，置人体外培养系统。应用随机数目表法分为：①对照组：不加药物干预；②L—N^6-亚氨乙基-赖氨酸（L-NIL）组：加入NOS抑制剂L-NIL干预。培养72h后，通过检测硝酸盐和亚硝酸盐的含量来观察软骨一氧化氮（NO）的释放量和NOS的活性；应用Luminex液相蛋白芯片检测OA患者软骨中MMPs（MMP-1，MMP-2，MMP-3，MMP-9，MMP-13）表达量的变化。数据采用配对t检验作均数的显著性检验。结果对照组软骨培养72h后，在其上清液中可检测到高浓度NO[（216±47）μmol／L]和高活性的NOS[（5．7±1．3）U／ml]，L—NIL组NO释放量[（55±20）μmol／L]较对照组明显减少，NOS活性[（1．7±0．7）U/ml]显著降低（P均〈0．01）。Luminex液相蛋白芯片显示对照组OA软骨中MMPs[（MMP-1（10．8±5．4）ng／ml，MMP-2（9．2±3．3）ng／ml，MMP-3（11．6±4．2）ng／ml，MMP-9（1．27±1．07）ng／ml，MMP-13（3．6±1．3）ng／ml]的表达异常，而L—NIL组OA软骨中MMPs表达量明显被抑制[分别为（3．6±1．8）ng／ml，（2．3±1．2）ng/ml，（3．6±1．4）ng／ml，（0．65±0．21）ng／ml，（1．8±0．5）．g／ml，P均〈0．05]。结论Luminex液相蛋白芯片检测系统表明NOS抑制剂通过减少NO的过度释放和降低NOS活性，进而抑制MMPs的过度表达来改善OA软骨的代谢。

猪戊型肝炎病毒液相蛋白芯片检测方法的建立

构建了ORF2蛋白原核表达体系Rosetta-pMAL-c5X-ORF2,经IPTG诱导表达后,对重组蛋白进行SDSPAGE和Western blot分析,并采用镍柱亲和层析法进行纯化,以该蛋白为抗原建立液相蛋白芯片检测方法。结果显示:本试验成功表达了可溶性ORF2蛋白,具有良好的抗原性。液相蛋白芯片检测方法对猪常见的其他疾病阳性血清无交叉反应,其批内、批间变异系数分别为5%和6.6%。对102份临床血清样本检测结果显示,该方法与商品化ELISA试剂盒符合率为93.1%,关联性卡方检验显示2个方法具有一致性(P<0.01)。本试验为临床HEV血清抗体的检测提供了一种特异、灵敏的新型快速检测技术,为建立猪病多重检测方法提供了基础。

同时检测多种营养标记蛋白的液相蛋白芯片检测平台条件的优化

目的优化同时检测血清铁蛋白(serum ferritin,SF)、可溶性转铁蛋白受体(soluble transferrin receptor,sTfR)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、视黄醇结合蛋白4(retinol-binding protein4,RBP4)4种目标蛋白的液相蛋白芯片的检测条件。方法将4种蛋白的捕获抗体偶联到不同编码的磁珠上,加样于96孔板中,采用双抗夹心法对抗原抗体进行检测;对5例血清分别用商用稀释液、1%牛血清白蛋白(albumin from bovine serum,BSA)、磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)进行稀释后检测4种目标蛋白,并对结果进行比较;采用抗体特异性验证实验对抗体特异性结合能力进行检验;采用单独反应体系和混合反应体系信号值的配对t检验对蛋白之间有无干扰进行检验;采用倍比稀释法对目标蛋白进行稀释,找出每种蛋白检测下限和生物检测限;根据倍比稀释结果建立标准曲线和回归方程。结果针对本实验4种蛋白的检测实验,优选1%BSA和PBS代替商用稀释液作为稀释液;4种抗原与其他捕获抗体和检测抗体交叉反应率在2%以下;每种蛋白在单独反应体系与混合反应体系的信号值差异无统计学意义;混合体系中SF的检测下限为1.155 ng/mL,生物检测限为1.625 ng/mL;sTfR的检测下限为2.682 ng/mL,生物检测限为5.208 ng/mL;CRP的检测下限为0.302 ng/mL,生物检测限为0.391 ng/mL;RBP4的检测下限为1.814 ng/mL,生物检测限为3.540 ng/mL。4种蛋白的标准曲线和回归方程分别是:SF y=172.5x-39.65,R^(2)=0.9968;sTfR y=60.10x+77.38,R^(2)=0.9972;CRP y=-6.000x^(2)+210.3x+246.1,R^(2)=0.9063;RBP4 y=-0.6998x^(2)+64.31x+134.8,R^(2)=0.9748。结论该研究较好地实现了利用液相蛋白芯片技术同时检测SF、sTfR、CRP和RBP4蛋白的检测平台的条件优化。

Luminex液相芯片技术测定人早孕滋养层细胞及蜕膜细胞中基质金属蛋白酶的表达

目的研究人正常早孕滋养层细胞与蜕膜细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的表达特点,探讨子宫内膜蜕膜化进程中MMPs的变化及对胚胎着床的影响。方法收集正常妇女分泌期子宫内膜及人正常早孕绒毛和相应蜕膜标本各5例,分别进行离体培养,鉴定其纯度在98%以上后,收集培养上清液,利用Luminex(LumAvidinBeads)测定培养上清液中MMPs(MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-12、MMP-13)蛋白表达的变化,分析MMPs在不同培养条件下的表达差异及表达之间的相关性。结果①在不同培养条件下,MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9均有表达,MMP-12及MMP-13分别在ESC及DSC中无表达,且MMP-8、MMP-12、MMP-13表达均低。②与子宫内膜细胞相比,MMP-1、MMP-3、MMP-7在DSC,EVCT中表达均降低,降低有显著性差异(P<0.05),而MMP-2、MMP-8、MMP-9在DSC,EVCT中则显著升高,升高有显著性差异(P<0.05)。且在蜕膜细胞中,MMP-1、MMP-3、MMP-2、MMP-7高表达尤为显著。③与蜕膜细胞相比,MMP-1、MMP-3、MMP-7在EVCT中表达显著降低(P<0.05)。MMP-2、MMP-9、MMP-13在EVCT中升高有显著性(P<0.05)。且在滋养层细胞中,MMP-2、-9高表达尤为显著。④MMPs之间的相关性:MMP-2与MMP-9相关关系显著(P<0.05),且关系较密切(r=0.6645)。MMP-1,MMP-3,MMP-7两两间相关关系显著(P<0.05),且关系密切(r>0.7340)。其他MMP之间相关关系不显著。结论首次利用LuminexxMAP方法多通量的检测到子宫内膜间质细胞、早孕蜕膜细胞与滋养层细胞的多种MMPs的表达,它们均可分泌多种MMP,但是不同种类组织细胞的表达量不同;MMPs可能通过调控子宫内膜蜕膜化及母胎界面间MMPs的变化而影响胚胎着床,为成功妊娠创造条件。

结直肠癌血清肿瘤标记物液相芯片制备条件的优化及在CEA抗原检测中的初步应用

液相芯片技术由于其高通量,灵敏度高,信噪比高,液相条件下反应,操作简便,耗时短等优点,已被美国FDA批准成为临床的检测手段。主要介绍了结直肠癌血清肿瘤标记物液相芯片制备条件的优化及其在CEA抗原检测中的初步应用。首先将CEA抗原的捕获抗体与微球载体进行偶联,制备液相芯片,然后对影响反应的微球与抗原的反应时间,生物素化检测抗体的浓度及avidin-PE荧光染料的反应浓度等因素进行正交设计,确定出最优的反应条件;用该液相芯片反应体系检测55例临床样本,与ELISA试剂盒检测结果相比:在同样的样本浓度范围内,两者的检测结果基本一致,但液相芯片检测的浓度范围更大而且液相芯片可将多种肿瘤标记物在一个反应进行检测,节省检测的时间和人力。

一氧化氮合酶抑制剂对白细胞介素1β诱导软骨细胞增殖和基质金属蛋白酶表达的影响

目的:研究表明,白细胞介素1β对鼠肾细胞、心肌细胞和神经上皮细胞发挥抗增殖作用,但其是否可抑制人的软骨细胞增殖?这种抗增殖作用是否可被一氧化氮合酶抑制剂抑制尚不清楚。实验拟验证一氧化氮合酶抑制剂对人骨关节炎软骨细胞增殖及基质金属蛋白酶的影响。方法:选择2006-05/12在南方医科大学附属南方医院脊柱骨病科住院的膝骨关节炎患者8例。所有患者均符合1986年美国风湿病学会关于骨关节炎的临床诊断标准或临床及放射学诊断标准,排除其他疾病(创伤性、风湿性及感染性)所导致的骨关节炎。所有患者均在术前告知,并签有试验知情同意书。分离培养关节软骨细胞,将不同浓度(0,1,10,100μg/L,其中0μg/L作为对照)白细胞介素1β作用于骨关节炎软骨细胞24,48,72h,一氧化氮合酶抑制剂氨基胍作为干扰因素,与白细胞介素1β共同作用72h,收集细胞上清液,一氧化氮的表达量通过一氧化氮试剂盒检测,并作为检测一氧化氮合酶抑制剂活性的手段;四甲基偶氮唑盐法检测软骨细胞的增殖;xMAP技术检测软骨细胞基质金属蛋白酶1,基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9的表达。结果:①不同时间点1,10,100μg/L白细胞介素1β组作用后的吸光度值与对照组相比,差异显著(P<0.05,P<0.01);相同浓度白细胞介素1β在24,72h的吸光度值相比较,差异显著(P<0.01)。②白细胞介素1β和氨基胍(100μmol/L)共同作用软骨细胞72h后,各浓度组吸光度与白细胞介素1β组相比,差异显著(P<0.01)。③白细胞介素1β可促进软骨细胞一氧化氮的表达,并呈剂量依赖关系。④白细胞介素1β促进基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3的表达,与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.01),而软骨细胞基质金属蛋白酶9的表达在本实验中没有检测到。结论:白细胞介素1β可抑制软骨细胞增殖,诱导基质金属蛋白酶表达,这些影响可被氨基胍抑制,白细胞介素1β和氨基胍对软骨细胞的影响可能是通过一氧化氮途径发挥作用。

基于流式量子点微球技术的甲乙型流感病毒抗原检测方法的建立和初步应用分析

目的建立基于流式量子点微球技术的甲型流感病毒(FluA)和乙型流感病毒(FluB)抗原联检方法,为常见呼吸道病毒抗原多重检测打下基础。方法分别使用自制的不同量子点编码微球和小鼠抗FluA/FluB核蛋白(NP)单克隆抗体进行偶联,在流式细胞仪上对已知浓度的甲乙型流感病毒抗原分别和同时进行检测,对检测条件进行优化,建立甲乙型流感病毒抗原联检方法,利用此方法对临床样本进行检测,与实时荧光定量PCR法(quantitative real-time PCR,qPCR)进行比对,验证此方法的临床性能。结果建立了甲乙型流感病毒抗原联检方法,该方法的甲乙型流感病毒抗原的检出限分别为26.1 pg/ml和10.7 pg/ml,测量范围均为15.3~250000 pg/ml。对临床样本检测,与qPCR比对一致性良好,阳性符合率为57.4%,阴性符合率为100%,总符合率71.6%,并优于临床常用胶体金试剂(阳性符合率为56.49%,阴性符合率为99.75%)。结论此流式量子点微球多重检测方法可以用于甲乙型流感病毒抗原的联检,其灵敏度较高、特异度好、检测范围广,可以为呼吸道常见病毒多重检测打下良好基础,在临床上具有应用前景。

非洲猪瘟及其新型诊断检测技术研究进展

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的,以家猪和野猪多组织器官产生出血性病变的一种高死亡率的烈性传染病。不同日龄的猪均易感,急性型临床表现为高热、皮肤发和各脏器出血,病死率高达100%。目前,该病已迅速传播至全国各个省市自治区,无有效的疫苗及治疗药物,因此,非洲猪瘟的暴发,给包括我国在内的全球养猪业带来巨大影响,造成了不可估量的经济损失。本文从非洲猪瘟的病原学、病毒蛋白及其新型诊断技术等方面进行综述,以期全面了解非洲猪瘟的致病性及新型检测方法的研究进展,为非洲猪瘟的防治提供理论依据。

腹腔局部细胞因子在子宫内膜异位症和子宫腺肌病致不孕中的作用

目的:通过测定子宫内膜异位症(EMT)和子宫腺肌病在不孕症患者腹腔液中细胞因子的含量,探讨腹腔局部细胞因子在EMT和子宫腺肌病相关不孕发病中的作用。方法:选取2008年1月至2009年12月疑似EMT和子宫腺肌病合并不孕行腹腔镜手术者86例,采用Luminex液相蛋白芯片技术,检测所有研究者腹腔液干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)及白细胞介素(IL)-6、10、17的含量,并分析细胞因子含量与EMT分期的关系。结果:按手术与病理结果最终纳入病例共57例,分为4组:Ⅰ～Ⅱ期EMT 13例(EMT轻度组)、Ⅲ～Ⅳ期EMT 14例(EMT重度组)、子宫腺肌病13例(子宫腺肌病组)、EMT与子宫腺肌病并存17例(并存组)。正常盆腔26例(对照组)。除IFN-γ外,TNF-α、IL-6、IL-10、IL-17、VEGF 5种细胞因子在5组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。5种细胞因子在组间两两比较:①EMT轻度组及重度组均显著高于对照组(P<0.05),而EMT轻、重度组之间差异无统计学意义(P>0.05);②子宫腺肌病组5种因子均与对照组相似(P>0.05),TNF-α、IL-6、IL-17 3种因子低于EMT轻度组及重度组(P<0.05),VEGF低于重度组(P<0.05);③并存组细胞因子含量明显高于子宫腺肌病组和对照组(P<0.05),而与EMT轻、重度组分别比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EMT患者盆腔局部细胞因子的异常产生导致盆腔内环境的改变可能干扰正常生殖过程。子宫腺肌病不孕的原因可能有别于EMT,与盆腔局部内环境细胞因子无关。

不同治则方药对快速老化小鼠脑组织细胞因子表达的影响

目的观察不同治则方药对痴呆动物模型脑组织细胞因子表达的影响。方法7月龄快速老化亚系SAMP8小鼠分为痴呆模型组、阳性对照药脑复康组、六味地黄汤组、四君子汤组、归脾汤组、当归芍药散组等6个组;抗快速老化亚系SAMR1作为正常对照组。给药4周后,用液相蛋白芯片(Luminex)技术同时测定脑组织中的10种细胞因子(GM-CSF,IFN-γ,TNF-α,IL-1β,IL-2,L-4,IL-5,IL-6,IL-10,IL-12)含量。结果8月龄SAMP8小鼠脑组织中某些细胞因子表达发生异常改变;当归芍药散、四君子汤能分别提高模型小鼠海马中的IL-4和IFN-γ的水平(P<0.05),而六味地黄汤组则能使模型小鼠海马中的10种细胞因子指标恢复到正常水平(P<0.05,P<0.01)。结论六味地黄汤、当归芍药散、四君子汤则能在一定程度上调节SAMP8小鼠的异常免疫反应,其中六味地黄汤的作用效果较好。

银菘香合剂的体外抗病毒作用研究

目的研究中药合剂"银菘香"的抗多种病毒活性及其潜在机制。方法检测该复方在体外对甲型流感病毒FM1株(HPR8株(H1N1亚型)、副流感病毒1型(PIV-1)、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、呼吸道合胞病毒(RSV)、柯萨奇病毒B族4型(Cox B4)的抗病毒作用,并通过液相蛋白芯片技术检测"银菘香"对流感病毒诱导的A549细胞的11种炎性因子释放的影响,分析其潜在作用机制。结果研究显示"银菘香"对上述5种病毒均具有一定的抑制作用;"银菘香"可显著降低流感病毒诱导的A549细胞多种细胞因子如IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-18、TNF-α、IFN-g和GM-CSF的释放(P<0.05,P<0.01)。结论"银菘香"具抗一定病毒活性,其潜在机制可能与其抑制病毒诱导的多种炎症因子释放,减轻炎症损伤有关。