液相阻断ELISA口蹄疫抗体检测原理及技巧

口蹄疫是一种严重威胁(如猪、牛、羊等)偶蹄目动物健康的一类传染性动物疫病,给猪牛羊等养殖场/户带来巨大的经济损失。县级兽医实验室口蹄疫抗体检测是我国基层动物防疫部门防控口蹄疫的重要方法,准确检测出当地猪牛等动物的口蹄疫抗体水平,对预防和控制当地口蹄疫疫病具有重要的指导作用和参考意义。

口蹄疫液相阻断ELISA试验方法应用

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的,主要引起偶蹄动物的一种急性、烈性、危害性大的传染病,以O型和A型血清型多发。该病发病速度快,传播范围广,对畜产品质量安全和进出口贸易造成重大危害,不利于畜牧业的绿色健康发展。一、口蹄疫的诊断方法1.临床诊断。

固相竞争ELISA和液相阻断ELISA在口蹄疫抗体检测中的比较

为对比固相竞争ELISA和液相阻断ELISA在口蹄疫抗体检测中的应用,选择猪血清345份、牛血清110份、羊血清159份,共614份血清样品同时进行O型和A型抗体检测,对比两种检测方法的符合率和对不同畜种的检出率。结果:两种检测方法在O型抗体检测中的符合率为95.3%,在A型抗体检测中的符合率为96.1%,对不同畜种的检出率无明显差异。结论:在大规模检测免疫抗体时,推荐采样固相竞争ELISA检测方法。

液相阻断ELISA在口蹄疫病毒抗体水平检测中的应用

分别利用口蹄疫病毒Asia-I型和O型液相阻断ELISA方法,对健康猪、牛、羊血清,O型、Asia-I型免疫血清,以及人工感染Asia-I型FMDV的猪、羊血清和人工感染O型FMDV牛血清进行了抗体水平检测,同时利用3ABC-I-ELISA对液相阻断ELISA方法所选的部分阴性血清进行了验证试验.结果显示:利用Asia-I型和O型液相阻断ELISA方法筛选的阴性动物,在免疫和攻毒后,血清抗体水平显著升高,表明该法可完全用于口蹄疫阴性动物筛选及口蹄疫病毒抗体水平的检测.

监测口蹄疫抗体的液相阻断ELISA法的改进和体会

液相阻断ELISA(LBE)法由于具有高度的敏感性、特异性和重复性,目前被广泛应用于动物免疫抗体效果监测实践工作中,特别是为防控牛、羊亚洲I型口蹄疫(FMD)做出了积极的贡献。但该方法操作繁琐,稍有不慎就会导致实验结果发生偏差或试验失败,笔者就该方法应用于亚I型口蹄疫抗体检测中的改进和体会作一总结。

液相阻断酶联免疫和正向间接血凝试验检测猪口蹄疫抗体

为分析猪口蹄疫免疫失败原因，建立合理的免疫程序，以广西壮族自治区昭平县莲昌生猪养殖场36头仔猪为试验材料，应用ELISA和IHA检测不同日龄猪口蹄疫抗体水平。结果表明：首免前母源抗体对抗体水平影响很大，由抗体水平低的经产母猪喂养的仔猪，其抗体水平较低；断奶后母源抗体影响逐渐被疫苗免疫取代，而对不同疫苗免疫10-70日龄仔猪的抗体变化观察中，2种疫苗的抗体水平都处在稳定的状态，无较大差别。

血清学实验之液相阻断ELISA的注意事项

液相阻断ELISA用于检测家畜血清中的口蹄疫（FMD）抗体。主要应用于两个方面：一是检测FMD病毒感染,广泛用于国际贸易中;二是监测免疫抗体,评价FMD疫苗免疫效力,也就是疫苗免疫动物的抗强毒攻击能力。液相阻断ELISA试验操作虽比正向间接血凝试验（PHA）繁琐,但它的精确性、稳定性远远高于正向间接血凝试验。

口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒与其改进型试剂盒的比对试验

为了评估田东县动物疫病预防控制中心兽医实验室检验质量,了解同一检测项目不同检测试剂盒检验结果的差异情况,实验室于2020年11月25日进行了口蹄疫O型抗体检测试剂盒比对试验。目的在于检验口蹄疫O型抗体不同检测试剂盒对检验结果的影响及敏感度,以及时发现存在问题,解决问题,不断提高实验室检测能力水平。

O型口蹄疫病毒抗体高通量液相阻断CLIA检测方法的建立

为了能更高效和准确地对口蹄疫疫情进行诊断监测,建立了O型口蹄疫病毒抗体高通量液相阻断化学发光免疫定性检测方法(Liquid-phase blocking CLIA,LPB-CLIA)。通过以单一稀释倍数稀释样本进行检测,计算抑制率作为检测结果,将检测通量提高了5倍左右。应用受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic,ROC)确定试验最佳临界值为62.5%。重复性实验结果显示方法批内CV小于10%,批间CV小于15%。通过对326份田间血清样本检测结果与LPB-ELISA检测结果对比,敏感性为94.6%,特异性为95.6%,检测准确度为95.1%。建立的LPB-CLIA方法敏感性和特异性良好,缩减了时间和经济成本,为国内口蹄疫的检疫提供了新的方法。

影响口蹄疫液相阻断ELISA抗体检测试验结果的因素

液相阻断ELISA,是检测口蹄疫病毒抗体的国际标准方法,也是国际贸易指定方法之一。主要用于检测抗体,应用于2个方面的目的：（1）检测FMD病毒感染,广泛用于国际贸易中;（2）监测免疫抗体,评价FMD疫苗的免疫效力,也就是疫苗免疫动物的抗强毒攻击能力。

口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA试验的测量不确定度评估

为探索一种较为合理的兽医实验室ELISA试验的测量不确定度评估模式,应用液相阻断ELISA试验方法,对口蹄疫O型抗体进行检测,依据《测量不确定度评定与表示》(JJF1059.1—2012),分析试验的不确定来源并评定各分量的标准不确定度、合成标准不确定度和扩展不确定度。结果显示:最终cutoff临界值与样品判定浓度的OD_(450 mm)值的比值为1.390,U=0.221(k=2);测量不确定度的加入提升了测量结果的可信度,并有效降低了假阳性、假阴性出现的风险;分析不确定度各分量对测量结果的相对贡献,可以找出影响检测质量的主要因素,从而有利于实验室的质量控制和检测质量的提高。

口蹄疫病毒O型液相阻断ELISA免疫抗体检测快捷方法

应用液相阻断ELISA实验方法检测猪口蹄疫病毒O型灭活疫苗免疫的猪血清80份,80份样品抗体效价≥1∶64有78份,抗体保护率为98%。通过口蹄疫病毒O型液相阻断ELISA免疫抗体检测快捷方法,能快速、高效的提高工作效率。

口蹄疫O型液相阻断ELISA免疫抗体检测方法的应用

应用液相阻断ELISA试验方法检测上海光明荷斯坦牧业有限公司牧场牛群经口蹄疫O型灭活疫苗免疫的奶牛血清样品2412份。经检测,2412份样品中规模奶牛场牛群免疫抗体滴度≤1∶64样品42份,抗体滴度≥1∶128样品2370份,抗体保护率为98%。

口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测两种实验方法结果对比

本次实验共检测猪样品39份,通过4℃静置过夜的液相阻断ELISA实验方法的检测结果是口蹄疫O型抗体合格率是89.74%,通过37℃温育90 min的液相阻断ELISA实验方法的检测结果是口蹄疫O型抗体合格率是79.48%,合格率相差10.26%。通过4℃静置过夜的液相阻断ELISA实验方法比通过37℃温育90 min的液相阻断ELISA实验方法检测结果更为精确。

外调猪、牛和羊口蹄疫液相阻断ELISA免疫抗体检测方法的改进和应用

因具有较高的敏感性和重复性,口蹄疫液相阻断酶联免疫吸附测定(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)抗体检测方法已被广泛应用于牛、羊和猪等动物免疫抗体效果监测工作中。但是,由于甘肃省甘州区的猪、牛和羊等动物饲养量大,调出调入频繁,所以当地的检测工作量大,口蹄疫试剂盒用量也大。因此,为了节约成本,提高工作效率,我们对液相阻断ELISA免疫抗体检测方法进行了改进。

口蹄疫液相阻断酶联免疫吸附试验的注意事项

液相阻断酶联免疫吸附试验(ELISA)主要用于家畜血清口蹄疫A型、O型抗体的检测,具有高灵敏性、特异性,但操作步骤烦琐,耗时较长,操作稍有不慎会造成实验失败。本文根据临床操作经验总结了口蹄疫液相阻断ELISA实验操作中的注意事项,为实验室检测人员提供借鉴。

口蹄疫液相阻断ELISA实验中常遇问题及详细操作步骤

口蹄疫液相阻断ELISA实验是农业部规定的人们普遍认可的口蹄疫免疫抗体检测方法,多年来一直用农科院兰州兽医研究所生产的液相阻断ELISA试剂盒检测A性、O型口蹄疫免疫抗体。该实验具有特异、敏感和可重复性强等特点。但是,由于该实验步骤繁多,常因某个环节操作不当而使实验结果不成立或部分不成立而前功尽弃。本文根据近几年的实验工作,表述了试验中常遇到的问题,详细阐述了实验操作步骤及注意事项,

口蹄疫O型液相阻断ELISA免疫抗体检测方法的运用

采用液相阻断ELISA免疫学方法检测经口蹄疫O型灭活疫苗免疫的1200奶牛血清样品,检测后发现牛群免疫抗体滴度<1∶64的样品有21份,抗体滴度≥1∶128样品1178份,占98.17%。希望本次研究的内容对口蹄疫O型疫苗推广有一定促进作用。

便捷式液相阻断ELISA试剂盒检测牛O型口蹄疫抗体水平的效果试验

采用便捷式液相阻断ELISA试剂盒和传统液相阻断试剂盒,同时对117份牛血清样品进行口蹄疫O型抗体水平检测,以探讨其相关性和特点。结果表明:便捷式液相阻断ELISA试剂盒与传统液相阻断试剂盒的检测结果相比,kappa值为0.84,具有高度一致性;检测时间,便捷式液相阻断ELISA试剂盒检测为2h,传统式检测则需时5.25 h。应用便捷式液相阻断ELISA试剂盒对上海光明荷斯坦牧业有限公司下属牧场检测牛血清样品8729份,O型口蹄疫免疫抗体合格率为96.9%。

影响口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测实验结果因素的研究

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染猪、牛、羊等偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。本病的流行非常广泛，一旦感染，将会给畜禽养殖业造成极大的经济损失，甚至是灭顶之灾，后果严重。目前，有效的防制措施就是用口蹄疫疫苗对猪、牛、羊等易感动物进行免疫接种。动物经接种后所产生的免疫抗体水平的高低，直接关系到能否对动物进行保护的效果，这只能通过抗体水平的检测来判断。口蹄疫的液相阻断ELISA检测技术，是一种成熟的检测技术，是当前国际上认可的一种标准化的检测诊断技术，也是国际贸易中检测口蹄疫的主要手段。