口蹄疫液相阻断酶联免疫吸附试验的注意事项

液相阻断酶联免疫吸附试验(ELISA)主要用于家畜血清口蹄疫A型、O型抗体的检测,具有高灵敏性、特异性,但操作步骤烦琐,耗时较长,操作稍有不慎会造成实验失败。本文根据临床操作经验总结了口蹄疫液相阻断ELISA实验操作中的注意事项,为实验室检测人员提供借鉴。

阻断酶联免疫吸附试验检测赤羽病

赤羽病(Akabane disease)又称阿卡斑病,是牛、羊的一种以流产、早产、死胎、胎儿畸形、木乃伊、新生胎儿发生关节弯曲积水性无脑综合症为特征的病毒性传染病.本病的病原赤羽病病毒是布尼安病毒科(Bunyaviridae)、辛波(Simbu)病毒群的成员之一.最早在澳大利亚暴发,后在日本、美国、韩国等国也分离到该病毒.本病的流行对养牛、养羊业的发展构成巨大的威胁,因此该病是我国从澳大利亚进口奶牛必须检测的七种疫病之一.

高效液相色谱加酶联免疫吸附法检测鲜冻禽产品中的盐酸克伦特罗

[目的 ]检查鲜、冻禽产品中盐酸克伦特罗的残留情况。 [方法 ]采用高效液相色谱法 (HPL C)酶联免疫吸附法(EL ISA)比对分析。 [结果 ]6 0份样品中 6份含量高于 1.0 ng/ g,最高为 6 .2 ng/ g。 [结论 ]禽产品也受到盐酸克伦特罗残留污染的威胁 ,应加强监管力度 。

液相阻断酶联免疫和正向间接血凝试验检测猪口蹄疫抗体

为分析猪口蹄疫免疫失败原因，建立合理的免疫程序，以广西壮族自治区昭平县莲昌生猪养殖场36头仔猪为试验材料，应用ELISA和IHA检测不同日龄猪口蹄疫抗体水平。结果表明：首免前母源抗体对抗体水平影响很大，由抗体水平低的经产母猪喂养的仔猪，其抗体水平较低；断奶后母源抗体影响逐渐被疫苗免疫取代，而对不同疫苗免疫10-70日龄仔猪的抗体变化观察中，2种疫苗的抗体水平都处在稳定的状态，无较大差别。

酶联免疫吸附试验中常见问题的产生原因及解决办法

用酶标记物进行免疫学检测的方法称为酶联免疫吸附试验（ELISA）。该技术诞生于20世纪70年代初，可进行定性或定量分析，主要有间接ELISA、阻断ELISA、双抗体夹心ELISA三种方法。目前该技术在猪瘟、口蹄疫、高致病性猪蓝耳病、猪伪狂犬病、猪乙型脑炎、猪链球菌病、猪圆环病毒病、猪传染性胸膜肺炎、猪细小病毒病等动物疫病检测中得到广泛应用。

酶联免疫吸附试验在药残检测中的不足及解决方法

食品安全问题已经成为全球关注的焦点问题之一。近年来,兽药残留致使食物中毒的报道屡见报端,严重损害了人们的健康,而且造成了意想不到的经济损失和巨大的政治影响。传统的检测方法主要采用高压液相色谱（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC-MS）等分析法检测兽药残留,需要昂贵的仪器设备和专业人员,费时、费力、成本高,难以在基层推广。

正向间接血凝试验(IHA)和液相阻断酶联免疫吸附试验(LPB-ELISA)检测O型口蹄疫免疫抗体的对比

本试验采用正向间接血凝试验(IHA)和液相阻断酶联免疫吸附试验(LPB-ELISA)两种方法对经过口蹄疫O型免疫的80份猪血清、60份牛血清、50份羊血清进行了O型口蹄疫免疫抗体检测的对比试验。IHA试验猪合格80份,合格率100%;牛合格60份,合格率100%;羊合格50份,合格率100%;总体合格率100%。LPB-ELISA试验猪合格75份,合格率93.75%。牛合格60份,合格率100%;羊合格47份,合格率94%;总体合格率95.79%。试验结果表明,IHA方法检测口蹄疫O型免疫抗体合格率比LPB-ELISA方法高,两者符合率95.79%,具体哪种方法更准确,还有待进一步研究。

液相芯片法验证蛋白质免疫印迹试验检测HIV-1结果的敏感性和特异性

目的初步分析采用液相芯片法研制人类免疫缺陷病毒(HIV)-1检测试剂的可行性。方法采用液相芯片技术用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测HIV-1阳性和阴性的标本;用HIV-1的gp120、gp41、p24抗原分别包被不同编号的免疫磁珠,与生物素化二抗、亲和素化荧光染料PE组成液相芯片检测系统,对标本进行检测分析。结果 55份标本经Western Blot法确认阳性样本检测符合率为100%;76份经酶联免疫吸附试验(ELISA)初检和复检阴性的标本检测HIV-1gp120、HIV-1gp41、HIV-1p24抗原均为阴性;86份经ELISA法检测初检和复检为阳性而Western Blot法确认为阴性的样本,其HIV-1gp120、HIV-1gp41、HIV-1p24单片段检测均为阴性。液相芯片法检测HIV-1抗体的敏感度和特异度均为100%。结论采用液相芯片技术组成的HIV-1抗体检测系统,其敏感度和特异度均优于ELISA法检测。

非洲猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测方法的建立

为建立一种非洲猪瘟病毒抗体阻断ELISA检测方法,以原核表达ASFV p72重组蛋白作为包被抗原,HRP标记的p72特异性单克隆抗体作为酶标抗体,建立了非洲猪瘟病毒抗体阻断酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。结果显示,该方法中血清以1∶10稀释,酶标单抗以1∶6000稀释,临界值为50.12%。该方法特异性强,与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清无交叉反应。对强阳性血清的最低稀释度为1∶640,弱阳性血清的最低稀释度为1∶10,具有较高的敏感性;重复性好,批内和批间变异系数均小于5%。应用所建立的方法与商品化同类检测试剂盒对174份血清进行检测,ASFV抗体阳性符合率为100%,阴性符合率为96.75%,总符合率为97.28%。建立的阻断ELISA方法可用于非洲猪瘟病毒抗体检测。

不同方法对猪瘟免疫效果验证试验

根据农业部监测计划的规定，猪瘟抗体监测方法是酶联免疫吸附试验（抗体阻断ELISA、抗体间接ELISA）和抗体正向间接血凝试验，许多规模猪场场主偏信宣传，对猪瘟抗体采用正向间接血凝试验监测结果持怀疑态度．因此笔者通过正向间接血凝试验和酶联免疫吸附试验对3个规模化猪场66份血清样品进行了猪瘟免疫效果验证试验。

液相芯片法联合检测乙肝血清标志物HBsAb/HBcAb方法的建立

乙肝血清标志物（HBV—M）对于乙肝筛查、诊断、分期、疗效监测及预后判断等具有重要价值。目前，检测乙肝血清标志物主要是采用酶联免疫吸附试验（ELISA），该方法仅能单独检测，不能满足临床中多指标检测分析的要求。液相芯片法是一种新型生物芯片技术平台，其最大优势在于可同时对同一样本中多达100种不同目的分子进行分析。

犊牛口蹄疫O型灭活苗两种不同免疫程序的免疫效果比较

为了研究犊牛口蹄疫O型灭活苗不同免疫程序的免疫效果，本试验采用2种免疫方案对犊牛进行口蹄疫O型灭活苗免疫，即免疫程序A在口蹄疫O型母源抗体和免疫抗体监测值接近临界值时进行免疫，免疫途径为肌肉注射，免疫剂量按疫苗说明书要求；免疫程序B的首免和二免时间比免疫程序A提前一周进行，方法同免疫程序A。免疫后不同时间采用液相阻断酶联免疫吸附试验（LPB-ELISA）检测血清口蹄疫0型抗体水平。结果表明：A组犊牛在90日龄进行首免，免疫后14天抗体水平达到有效保护水平，免疫后28天部分犊牛抗体水平下降到临界保护水平之下；首免后1个月（120日龄）进行加强免疫，二免后的免疫抗体水平对牛群的保护一直维持到免疫后120天；二免后4个月（240日龄）进行三免，免疫保护期持续4个月。但首免前和二免前抗体效价相对较低，接近临界值。B组犊牛的免疫抗体变化规律同免疫程序A，但产生高效价抗体的时间提前，整个免疫期抗体水平均处于较高水平，可提供有效保护。说明免疫程序B的免疫效果优于免疫程序A。

口蹄疫LPB-ELISA抗体滴度和中和抗体滴度符合性研究

血清中和抗体滴度的大小反映血清对病毒感染的中和能力,其是评价疫苗免疫效果和病毒感染状况的重要指标,而液相阻断酶联免疫吸附试验(liquid phase block ELISA,LPB-ELISA)是一种通过ELISA检测抗体滴度的方法,因此研究LPB-ELISA抗体滴度和中和抗体滴度的关系对疫苗评价和理论研究有重要意义。本研究采用野外采集的90份牛血清进行了中和试验和LPB-ELISA试验,结果表明中和抗体滴度和LPB-ELISA抗体滴度具有相关性,相关系数为0.642,但是试验证明有41%中和抗体阴性样品会被LPB-ELISA检测为阳性,通过改变LPB-ELISA的阳性判断标准,采用抑制率>0.7的抗体滴度计算方法和1/8判定标准,可以使改进的LPB-ELISA的计算结果和中和试验结果更好的符合,降低假阳性率,使LPB-ELISA更适合进行口蹄疫血清学监测和普查。

禽流感病毒NS1抗体间接阻断ELISA检测方法的建立

以禽流感病毒(AIV)重组NS1蛋白作为检测抗原,兔抗NS1血清为阻断抗体,建立了检测AIVNS1抗体的间接阻断ELISA方法。经筛选确定,抗原的最佳包被浓度为0.6μg/mL,阻断抗体的最佳稀释度为1∶10000,待检血清最佳稀释度为1∶10。用该方法对42份AIV感染禽类血清样本和50份用AIV灭活疫苗免疫的禽类血清样本进行检测,结果显示,该方法的敏感性为95.2%,特异性为90.0%。交叉反应试验证明,该方法与新城疫等8种其他禽病阳性血清不发生交叉反应。临床检测结果显示,186份AIV灭活疫苗免疫禽血清样本的阴性率为89.2%,20份基因工程疫苗免疫禽血清样本的阴性率为95.0%,42份健康非免疫禽血清样本的阴性率为100%。表明,建立的间接阻断ELISA方法可用于区分AIV自然感染禽和疫苗免疫禽。

禽流感病毒M1抗体间接阻断ELISA检测方法的建立

以禽流感病毒(AIV)重组M1蛋白作为检测抗原,兔抗M1血清为阻断抗体,建立了检测AIVM1抗体的间接阻断ELISA方法。经筛选确定,抗原最佳包被浓度为0.78μg/mL,阻断抗体最佳稀释度为1∶15000,待检血清最佳稀释度为1∶10。用该ELISA方法对38份AIV阳性禽类样本和26份AIV阴性禽类样本进行检测,结果显示,该方法的敏感性为97.37%,特异性为96.15%。交叉试验证明该方法与新城疫等8种其他禽病阳性血清不发生交叉反应。用该ELISA方法对268份已知HI效价的临床样品进行检测,结果与HI的符合率达92%以上。表明,建立的间接阻断ELISA方法可用于AIV抗体的检测和禽流感的流行病学调查。

广东省猪群口蹄疫免疫抗体水平调查

采集广东省不同地区11个猪场的不同类型猪的血清样品3 108份,采用液相阻断-酶联免疫吸附法,以口蹄疫结构蛋白抗体滴度作为评估疫苗效力的指标。本试验共采集种公猪血清样品77份,结果显示平均抗体滴度为(1.859 1±0.078 1,1∶72);仔猪血清样品514份,平均抗体滴度为(1.793 3±0.027 9,1∶62);经产母猪血清样品604份,平均抗体滴度为(1.967 2±0.024 2,1∶92);后备母猪血清样品有1 913份,平均抗体滴度为(1.790 8±0.015 2,1∶61)。从统计结果来看,经产母猪的免疫状态是最好的,但总的来说,猪群的整体免疫水平不高,免疫形势不容乐观,口蹄疫的防治水平仍须提高。

口蹄疫检测能力比对试验的结果分析

对22份盲样采用R IHA、RT-PCR、LB-ELISA和3ABC-I-ELISA进行了检测。结果表明,在R IHA试验中,X079、X100、X232盲样分别为口蹄疫A型、O型和AsiaⅠ型抗原阳性;X136为猪传染性水泡病抗原阳性;X141、X165为阴性样本。在LB-ELISA中,L222、L271、L323、L431、L502盲样为O型口蹄疫抗体阳性;L283、L307、L457、L550、L557为阴性样本。在3ABC-I-ELISA中,Y067、Y123盲样为口蹄疫感染抗体阳性;Y167为阴性样本。在RT-PCR检测中,Z075盲样扩增出分子长为634bp、483bp和278bp 3条特异性的DNA片段,Z126盲样扩增出分子长为634bp和278bp 2条特异性的DNA片段,确定为口蹄疫病毒;Z087为阴性样本。

多发性骨髓瘤标志物免疫球蛋白的检测

多发性骨髓瘤是由浆细胞恶性增殖所致,并伴有浆细胞合成、分泌的大量结构单一的单克隆免疫球蛋白或其轻链而完整成熟的免疫球蛋白均明显降低的恶性肿瘤。本文综述了常见的高效液相色谱、辐射状免疫扩散试验、酶联免疫吸附法、高效毛细管电泳法4种检测技术在免疫球蛋白检测中的应用,为多发性骨髓瘤的初期诊断提供依据。

口蹄疫检测能力比对试验的结果分析

用RIHA、RT-PCR、LB-ELISA和NSP-3ABCELISA方法对22份盲样进行检测。抗原检测结果显示:在RIHA试验中,X049,X226,X291盲样分别为口蹄疫O型、A型和AsiaⅠ型抗原阳性样品;X146为猪传染性水泡病抗原阳性;X073、X094为阴性样品。在RT-PCR试验中,Z025、Z147扩增出长度约为634bp、483bp和278bp3条特异性的DNA片段,确定为口蹄疫病毒样品;Z113为阴性样品。在LB-ELISA中,L052、L149、L262、L421、L451O型口蹄疫抗体滴度均为1∶256,均为阳性样品;L182、L184、L213、L235、L317均为阴性样品。在NSP-3ABCELISA中,Y019、Y036为口蹄疫感染抗体阳性样品;Y137为阴性样品。