便捷式液相阻断ELISA试剂盒检测牛O型口蹄疫抗体水平的效果试验

采用便捷式液相阻断ELISA试剂盒和传统液相阻断试剂盒,同时对117份牛血清样品进行口蹄疫O型抗体水平检测,以探讨其相关性和特点。结果表明:便捷式液相阻断ELISA试剂盒与传统液相阻断试剂盒的检测结果相比,kappa值为0.84,具有高度一致性;检测时间,便捷式液相阻断ELISA试剂盒检测为2h,传统式检测则需时5.25 h。应用便捷式液相阻断ELISA试剂盒对上海光明荷斯坦牧业有限公司下属牧场检测牛血清样品8729份,O型口蹄疫免疫抗体合格率为96.9%。

口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒与其改进型试剂盒的比对试验

为了评估田东县动物疫病预防控制中心兽医实验室检验质量,了解同一检测项目不同检测试剂盒检验结果的差异情况,实验室于2020年11月25日进行了口蹄疫O型抗体检测试剂盒比对试验。目的在于检验口蹄疫O型抗体不同检测试剂盒对检验结果的影响及敏感度,以及时发现存在问题,解决问题,不断提高实验室检测能力水平。

氯霉素残留检测阻断ELISA试剂盒的研制及性能测定

在建立氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞株和阻断ELISA方法的基础上,研制出CAP残留快速检测试剂盒(CAP-kit),并对其性能进行了测定。结果表明,CAP-kit的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R2=0.9953,检测范围为1.0μg/L～128.0μg/L,灵敏度为0.85μg/L,半数抑制浓度(IC50)为7.54μg/L,检测限为1.0μg/L;牛奶样、猪肉样的平均添加回收率为88.3%、82.5%,平均批内和批间变异系数均<15%;CAP-kit与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应(CR%)为150%,与其它酰胺醇类和抗菌素药物无交叉反应;试剂盒在4℃可保存6个月。

新霉素阻断ELISA试剂盒的研制与应用

本研究旨在建立新霉素(Neomycin,NEO)免疫学检测试剂盒。以制备的抗NEO单克隆抗体(NEO mAb)为基础,建立阻断ELISA分析方法,组装新霉素阻断ELISA试剂盒,并对试剂盒的性能进行鉴定。结果表明,NEO试剂盒(NEO-kit)标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R2=0.990 3;检测范围为1.0～64.0μg.L-1,半数抑制浓度(IC50)为2.59μg.L-1,灵敏度为0.75μg.L-1,检测限为1.0μg.L-1。试剂盒除了和NEO阳性样品反应呈阳性外,与庆大霉素、链霉素、土霉素、沙丁胺醇、环丙沙星、二氟沙星、磺胺嘧啶及磺胺甲噁唑等其他药物均无交叉反应性。奶样、饲料样及肉样的平均添加回收率为89.50%、89.58%和87.92%;平均批内和批间变异系数均小于15%,而且批间变异系数小于批内变异系数;基质对NEO-Kit的检测结果影响比较小;NEO-Kit在4℃可保存6个月以上。试剂盒和HPLC-MS-MS对牛奶中新霉素回收率没有显著差异(P≥0.05)。试剂盒和HPLC-MS-MS对饲料样检测结果也无显著差异(P≥0.05)。本研究成功研制出敏感、特异、准确的NEO检测试剂盒。

磺胺二甲基嘧啶残留快速检测阻断ELISA试剂盒的研制及其性能测定

应用磺胺二甲基嘧啶(SM2)单克隆抗体(mAb)成功研制出SM2残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SM2-Kit)。研究结果表明,SM2-Kit的标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.9911,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.625μg/L～80μg/L,灵敏度为0.9μg/L,半数抑制浓度(IC50)为5.82μg/L,检测限为1μg/L;饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为83.4%、89.5%,平均批内和批间变异系数均低于15%;SM2-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率(CR%)为2.08%,与其它磺胺类药几乎没有反应性;基质对SM2-Kit的检测结果影响不大;试剂盒在4℃可保存6个月。

磺胺甲噁唑残留检测阻断ELISA试剂盒的研制

在建立磺胺甲噁唑单克隆抗体（SMZmAb）杂交瘤细胞株和阻断ELISA方法的基础上，研制出SMZ残留快速检测试剂盒（SMZ—Kit），并对其性能进行了测定。结果表明，SMZ—Kit的标准曲线呈典型的S型，符合4参数logit曲线拟合，相关系数R^2=0，9901，检测范围为1．0～128．0μg／L，灵敏度为0．73μg／L，半数抑制浓度（IC50）为11．5μg／L，检测限为1．0μg／L；饲料样、牛奶样的平均添加回收率为83．9％，83．3％，平均批内和批间变异系数均〈15％；SMZ—Kit与磺胺嘧啶的交叉反应（CR％）为2．88％，与其他磺胺类药物无交叉反应；试剂盒在4℃可保存6个月。

磺胺嘧啶残留阻断ELISA试剂盒的研制及鉴定

基于1株分泌抗磺胺嘧啶(sulfadiazine,SD)高亲和力的SD单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),应用ELISA试验原理研制SD残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SD-Kit),并对其特性进行测定。SD-Kit的标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.9914,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.02～12.92μg/L,灵敏度为0.08μg/L,半数抑制浓度(IC50)为0.54μg/L,检测限为0.08μg/L;鲜奶样和猪尿样的平均添加回收率分别为90.8%、95.8%,平均批内和批间变异系数均低于10%;基质对SD-Kit的检测结果影响不大;SD-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率为2.7%,与其他磺胺类药几乎没有反应性;试剂盒在4℃可保存6个月。

鸡传染性鼻炎PCR和阻断ELISA试剂盒的研制与应用

用鸡传染性鼻炎 PCR试剂盒可直接检测病料中的病原 DNA，可测出 1 pg的 DNA和 102～ 103个细菌，对可疑病料的检出率是传统的细菌分离方法的 2～ 3倍，可重复性好，特异性为 100％，在 4℃可保存 12个月，在－ 20℃可保存 15个月。阻断 ELISA试剂盒可检测副鸡嗜血杆菌型特异性抗体，其种特异性为 100％，重复性好。试剂盒在 37℃可保存 7 d以上， 4℃可保存 10个月，－ 20℃可保存 1年以上。用两个诊断试剂盒检验 155份可疑病料、 2 191份血清， PCR的阳性率为 32.3％； A型抗体阳性率为 27.4％， C型抗体阳性率为 11.5％。

磺胺间甲氧嘧啶残留阻断ELISA试剂盒的研制及其初步应用

【目的】研制磺胺间甲氧嘧啶（Sulfamonomethoxine,SMM）残留快速检测阻断ELISA试剂盒（SMM-Kit）,为有效治理磺胺间甲氧嘧啶的滥用,保障动物源性食品安全提供技术支撑。【方法】在成功研制SMM单克隆抗体（Monoclonal antibody,mAb）的基础上,应用阻断ELISA试验原理研制SMM-Kit,并对其特性进行了系统测定。【结果】SMM-Kit标准曲线呈典型的S型,相关系数R^2=0.992 8,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为1.33～389.9μg/L,灵敏度为3.57μg/L,半数抑制浓度（IC50）为17.07μg/L。牛奶样和猪尿样的平均添加回收率分别为91.5%和92.0%,平均批内和批间变异系数均低于15%;基质对SMM-Kit检测结果的影响不大;SMM-Kit与其他磺胺类药物的交叉反应性〈1.7%,表明其与其他药物几乎无交叉反应性;试剂盒在4℃可保存6个月。【结论】成功地研制出了SMM-Kit,在牛奶和猪尿液样品中的初步应用证明,该试剂盒灵敏度、准确度高,特异性强,可低温保存6个月。

2种口蹄疫O型抗体阻断ELISA检测试剂盒应用比较

为评估2种常用口蹄疫O型抗体检测试剂盒的性能差异,对2020年春季随机抽检的3家规模养殖场提供的60份猪血清分别用液相阻断ELISA试剂盒和抗体阻断(固相)ELISA试剂盒进行了检测,并比较了2种试剂盒的阳性检出率和符合率。结果表明,2种方法检测结果总符合率为91.67%,符合程度高。在基层畜牧兽医部门日常定性检测中,推荐使用抗体阻断(固相)ELISA检测试剂盒。

农业部批准猪圆环病毒2型阻断ELISA抗体检测试剂盒、注射用多潘立酮为新兽药

根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定,经审查,农业部批准南京农业大学、江苏南农高科技股份有限公司、宁波市三生药业有限公司3家单位申报的猪圆环病毒2型阻断ELISA抗体检测试剂盒、注射用多潘立酮2种产品为新兽药,核发《新兽药注册证书》,并发布产品试行规程、质量标准、说明书和标签,自发布之日起执行.

两种口蹄疫O型、A型抗体检测试剂盒检测猪口蹄疫抗体的应用研究

为研究两种口蹄疫抗体检测试剂盒的应用适用性,对50份血清分别用口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒和固相竞争ELISA检测试剂盒进行了检测,并比较了两种试剂盒的阳性检出率、特异性、稳定性及检测值与中和抗体的线性关系。结果表明,两种试剂盒在应用方面各有优劣,口蹄疫固相竞争ELISA检测试剂盒具有操作简便、耗时短、成本低的优点,更适用于基层兽医实验室进行口蹄疫抗体定性检测;口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒可测定血清中的具体抗体效价值,更适用于口蹄疫抗体定量检测。

口蹄疫液相阻断ELISA实验中常遇问题及详细操作步骤

口蹄疫液相阻断ELISA实验是农业部规定的人们普遍认可的口蹄疫免疫抗体检测方法,多年来一直用农科院兰州兽医研究所生产的液相阻断ELISA试剂盒检测A性、O型口蹄疫免疫抗体。该实验具有特异、敏感和可重复性强等特点。但是,由于该实验步骤繁多,常因某个环节操作不当而使实验结果不成立或部分不成立而前功尽弃。本文根据近几年的实验工作,表述了试验中常遇到的问题,详细阐述了实验操作步骤及注意事项,

影响口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测实验结果因素的研究

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染猪、牛、羊等偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。本病的流行非常广泛，一旦感染，将会给畜禽养殖业造成极大的经济损失，甚至是灭顶之灾，后果严重。目前，有效的防制措施就是用口蹄疫疫苗对猪、牛、羊等易感动物进行免疫接种。动物经接种后所产生的免疫抗体水平的高低，直接关系到能否对动物进行保护的效果，这只能通过抗体水平的检测来判断。口蹄疫的液相阻断ELISA检测技术，是一种成熟的检测技术，是当前国际上认可的一种标准化的检测诊断技术，也是国际贸易中检测口蹄疫的主要手段。

莱克多巴胺单克隆抗体的研制及阻断ELISA检测方法的建立

用混合酸酐法将莱克多巴胺（RAC）偶联于牛血清白蛋白（BSA）,合成免疫原BSA-RAC,并用紫外和凝胶电泳鉴定;用BSA-RAC免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术建立抗RAC单克隆抗体（mAb）杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备RAC mAb。应用RAC mAb研制RAC残留快速检测阻断ELISA试剂盒（RAC-Kit）,并测定其性能。结果表明,BSA-RAC偶联成功,分子结合比为1∶24.5;筛选出3株杂交瘤细胞,其中最好的4D8株的亲和常数Ka为1.65×1010L/mol。RAC-Kit的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,线性范围为1~170μg/L,灵敏度为0.52μg/L,检测限为1μg/L,饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为91.1%和89.2%,平均批内和批间变异系数〈15%,与多巴酚丁胺的交叉反应率为22.3%,与其他化合物无交叉反应,RAC-Kit在4℃可保存180d。

4种市售莱克多巴胺检测试剂盒的质量评价

莱克多巴胺的残留检测目前常用的检测方法有高效液相色谱法、气相色谱一质谱联用、液相色谱一质谱联用及酶联免疫检测法等，试验旨在通过对不同莱克多巴胺ELISA试剂盒质量评价与检测研究，为莱克多巴胺监测试剂盒的使用提供科学的参考数据。

猪病酶联免疫诊断试剂盒简介

1猪瘟病毒抗体酶联免疫诊断（ELISA）检测试剂盒 猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒是用来检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体的检测试剂盒。该试剂盒是用猪瘟病毒抗原包被的微量反应板，阻断ELISA的原理来检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体。猪瘟ELISA诊断试剂盒用于检测猪血清中猪瘟抗体、评估猪场猪瘟疫苗免疫状况和猪瘟的流行病学调查。试剂盒由抗原包被的微孔板，酶标羊抗猪IsC及其他试剂制成，应用间接ELISA的原理检测猪血清中抗猪瘟病毒的抗体。本试剂盒是采用猪瘟弱毒疫苗株经纯化、浓缩制成的抗原包被微孔板。在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有猪瘟特异性抗体，则将与微孔板上抗原结合。经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后，再加入酶标二抗，与微孔板上抗原抗体复合物发生特异性结合。

阻断酶联免疫吸附试验检测赤羽病

赤羽病(Akabane disease)又称阿卡斑病,是牛、羊的一种以流产、早产、死胎、胎儿畸形、木乃伊、新生胎儿发生关节弯曲积水性无脑综合症为特征的病毒性传染病.本病的病原赤羽病病毒是布尼安病毒科(Bunyaviridae)、辛波(Simbu)病毒群的成员之一.最早在澳大利亚暴发,后在日本、美国、韩国等国也分离到该病毒.本病的流行对养牛、养羊业的发展构成巨大的威胁,因此该病是我国从澳大利亚进口奶牛必须检测的七种疫病之一.

同一厂家不同批号抗原试剂检测猪O型口蹄疫抗体结果出现差异的思考

有效控制口蹄疫的关键在于早期检测,准确的检测是防制口蹄疫的重要环节。世界动物卫生组织（OIE）推荐用液相阻断ELISA（酶联免疫吸附试验）监测口蹄疫抗体,而我国目前应用最广的是部颁标准正向间接血凝试验（IHA）监测口蹄疫抗体[1]。笔者在同一个操作标准和质量控制的条件下,试剂来源同一厂家不同的批号,检测结果出现了一定的差异。笔者分别对不同批号检测的抗体结果进行了比较,现报告如下。