液相色谱—质谱联用仪(LCMS)在化学性中毒预防控制的应用

液质联用系统 (LiquidChromatography Mass ,LC MS)是以高效液相色谱与质谱仪联合而成 ,能对已知或未知物进行科学、快速、准确的定性定量分析 ,提供复杂样品的二维、三维图谱和分子量、分子结构信息。由于在软件上增设了全扫描、选择离子监测、串级子离子扫描、选择反应监测、高分辨扫描、自动增益控制 (AGC)等功能 ,大幅度提高了分析的灵敏度和准确度。迄今为止 ,LC MS在食品中毒素和残留兽药分析 ,如牛奶中残留头孢菌素、食品中残留磺胺类、四环素类化合物的测定 ,兽肉中盐酸克伦特罗、残留的玉米赤霉烯醇的测定 ,以及化妆品中激素的测定 ,农药残留测定和环境污染物测定等研究中已经发挥重要的作用 。

辅助降血糖类保健食品非法添加化学物质检测方法研究

目的：利用超高效液相-串联四级杆-飞行时间液质联用系统（UPLC-DAD-Q-TOF-MS/MS）,建立快速可靠灵敏的测定辅助降血糖类保健食品中非法添加二甲双胍、丁二胍、苯乙双胍、甲苯磺丁脲、格列齐特、吡格列酮、罗格列酮、格列波脲、格列吡嗪、瑞格列奈、格列美脲、格列本脲和格列喹酮13种化学药品的液质联用检测方法。方法：采用UPLC-DAD-Q-TOF-MS/MS检测,以Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18为填充柱;0.1%甲酸-0.01 mol/L乙酸铵水溶液和甲醇梯度洗脱,流速0.3 mL/min;ESI正离子模式,一级、二级质谱全扫描,进行UPLC-DAD-Q-TOF-MS/MS的定性及定量分析。结果：此方法经过验证,线性良好（r〉0.99）、精密度RSD〈3%、样品回收率在74.1%-90.0%之间,检出限在9.29-60.0 ng/mL之间,均能满足辅助降血糖类保健食品非法添加化学成分筛查的要求。结论：此方法快速、准确、灵敏度高、分离度高,可为辅助降血糖类保健食品非法添加筛查检测提供有力工具。

基于网络药理学与分子对接探究宁心通郁滋肾方治疗早发性卵巢功能不全的作用机制

[目的]基于四级杆-静电轨道阱(Q exactive orbitrap,Q-Orbitrap)高分辨液质联用系统分析结果,利用网络药理学结合分子对接的方法探究宁心通郁滋肾方治疗早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)的作用机制。[方法]采用Q-Orbitrap高分辨液质联用系统分析宁心通郁滋肾方中的活性成分,再通过Swiss Target Prediction数据库获取方中活性成分的靶点。利用基因组注释数据平台(Genome Annotation Database Platform,GeneCard)和在线人类孟德尔遗传(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM)数据库获取POI的疾病靶点。在String平台构建交集靶点的蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络后,通过Cytoscape 3.8.2软件筛选关键靶点,并构建“关键靶点-关键活性成分”网络,筛选主要关键活性成分。通过生物学信息注释数据库(the Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery,DAVID)进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。利用Surflex-Dock分子对接程序进行分子对接,获取对接分数(total score)。[结果]共获得有效活性成分71种,有效活性成分的作用靶点807个,POI疾病靶点1143个,交集靶点176个。经分析得到信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、类固醇受体共激活因子(steroid receptor coactivator,SRC)、蛋白激酶B1(protein kinase B1,AKT1)、90kDa热休克蛋白αA1(heat shock protein 90kDaαA1,HSP90AA1)等39个关键靶点及54种关键活性成分。富集分析结果显示,关键靶点主要涉及凋亡过程的负调控、一氧化氮生物合成过程的正调控、蛋白磷酸化的正调控等生物过程及癌症、癌症中的蛋白聚糖、乙型肝炎等信号通路。分子对接结果提示,槲皮素(Quercetin)作为方中最关键的活性成分与对应关键靶点的对接均较稳定。[结论]宁心通郁滋肾方可能通过槲皮素、异鼠李素、瑟丹内酯等关键活性成分,作用于STAT3、SRC、AKT1等靶点,通过缓解氧化应激、修复氧化损伤,改善卵巢功能,治疗POI。

带喷头混合型毛细管色谱柱的制备及其在蛋白质组分离分析中的应用

本研究制备了一种应用于液-质联用(LC-MS)系统中的带喷头混合型毛细管色谱柱.用标准蛋白和酵母蛋白胰蛋白酶酶切溶液考察了其在LC-MS中的离子化效率、毛细管色谱柱分离性能和寿命,并与直接填充型毛细管色谱柱的色谱性能进行比较,未见显著性差异.将制备的带喷头混合型毛细管色谱柱应用于鼠肝蛋白组的分析,在假阳性率为1%的条件下鉴定到1262个肽段,归属于513个蛋白簇.通过对鉴定蛋白质理化性能的统计分析,其等电点和分子量分布高于一般两维凝胶电泳的范围.实验结果还表明该混合型毛细管色谱柱在肽段的理化性能上没有偏性,可以广泛应用于蛋白质组学的研究中.