小干扰RNA对人淀粉样前体蛋白基因的沉默作用(英文)

目的观察小干扰RNA(siRNA)对人淀粉样前体蛋白(APP)基因的沉默作用。方法该研究将设计好的一对寡核甘酸在细胞内源性地转录成小发夹RNA(shRNA),同时构建了携带两个APP亚型的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的GFP-APP重组质粒。利用EGFP作为报告基因,在COS-7细胞内通过共转染siRNA表达质粒和GFP-APP的重组质粒来观察沉默效应。结果针对APP的siRNA可有效地下调APP基因。结论针对APP的siRNA将不仅在研究APP基因功能和深入研究阿尔茨海默病(AD)的病理分子机制上,而且在运用siRNA这种新型的反义核酸药物治疗AD方面扮演重要角色。

阿尔茨海默病中β淀粉样前体蛋白基因外显子9、10的mRNA表达及突变研究

于上海地区汉人群中,探讨阿尔茨海默病(AD)患者外周血中β淀粉样前体蛋白基因外显子9、10(APP9～10)的mRNA表达水平,并作cDNA的点突变检测。采用半定量竞争性反转录聚合酶链反应(semi quantitivecompetitiveRT PCR)技术测定APP9～10的mRNA表达水平;以聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态(RFLP)方法检测基因组DNA中载脂蛋白E基因(APOE)和早老素1基因(PS1)多态;APP9～10cDNA的点突变检测采用变性梯度凝胶电泳法。结果表明(1)AD患者中APP9～10的mRNA表达水平显著高于健康老人(P<0.05);(2)作为AD的主要风险因子,APOE ε4等位基因并不影响AD患者中APP9～10的mRNA表达水平,而另一可疑风险因子PS1基因1等位基因的存在却可显著增加AD患者中APP9～10的mRNA表达;(3)AD患者中不存在APP9～10cDNA的点突变。提示上海汉人群中,AD患者外周血中APP基因外显子9、10的mRNA表达水平显著升高,也许这一生物学改变可作为一种生物学辅助诊断指标应用于AD的临床研究。

家族性阿尔茨海默病家系淀粉样前体蛋白基因突变检测

目的:研究1个中国汉族早发型家族性阿尔茨海默病(EOFAD)家系的临床症状及其致病基因的突变形式。方法:收集1个EOFAD家系,分析2例患者及其他家系成员的临床表现及辅助检查结果。采集患者及部分家系成员外周血,提取基因组DNA,应用PCR联合直接测序法依次行早老素1(PS-1)基因、早老素2(PS-2)基因及淀粉样前体蛋白(APP)基因第16、17号外显子基因检测。结果:该家系2例患者发病年龄较早,均以记忆力下降为首发症状,病情呈进行性加重,均出现癫痫大发作及肌张力增高等其他痴呆类型少见的临床症状。在该家系2例患者中发现APP基因第17号外显子2 149位碱基发生G→A突变,使APP第717号氨基酸由缬氨酸变为异亮氨酸,发生V717I突变;未发现PS-1、PS-2基因突变。结论:在中国汉族EOFAD家系中发现了APP基因的V717I突变,进一步证明了APP基因突变是EOFAD的重要致病原因。

铝对轻度认知功能障碍人群淀粉样前体蛋白基因和β分泌酶1基因甲基化影响研究

轻度认知功能障碍(MCI)被认为是阿尔茨海默病(AD)的前驱阶段,据统计数据显示,MCI发展为AD的年发病率可达10%~15%。国内外对AD的研究证实AD是复杂的多因素疾病,其中环境因素中重金属对AD的影响,也是目前研究的一大热点。已有研究证实铝(Al)可以通过多条途径导致不可逆的神经损伤,其中铝对基因表观遗传学的影响存在争议。本课题组为了进一步研究铝所致的MCI的基因变化,特选取接触铝最多的铝电解工人,从中筛查出MCI人群为研究对象,观察外周血中淀粉样前体蛋白(APP)基因和β分泌酶1(BACE1基因)的甲基化变化情况,及β淀粉样蛋白(Aβ)蛋白的表达,来进一步探讨铝致Aβ沉积的可能机制。

淀粉样前体蛋白基因在急性髓系白血病的表达及其生物学行为研究

目的 探讨淀粉样前体蛋白（APP）基因在急性髓系白血病（AML）细胞的表达及其生物学行为.方法 应用实时定量PCR方法（2-ΔCt）检测85例初诊AML和20例非恶性血液病患者（对照）骨髓细胞APP mRNA的表达,并研究其表达水平对AML患者的临床特征和治疗反应的影响 应用实时定量PCR和Western blot方法检测APP基因和蛋白在AML细胞株的表达,并与AML原代细胞亚型的结果相比较 化学合成针对APP基因的小干扰RNA（siRNA）,利用脂质体转染HL-60细胞,下调APP基因表达.RNA干扰24、48、72 h后,采用MTT法及锥虫蓝拒染细胞计数检测细胞增殖 瑞特-姬姆萨染色观察细胞形态 PI染色流式细胞术分析细胞周期 Annexin V/PI双染色流式细胞术及Hoechst染色检测细胞凋亡 RNA干扰48 h,Western blot法检测凋亡相关蛋白NF-κB、bcl-2和caspase-3的表达 MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性.结果 APP mRNA表达在AML亚型间差异有统计学意义（P=0.019）,伴t（8 21）的M2b表达最高（中位值0.1080）,其次是AML-未定型（0.0467）、M3（0.0266）、M2a（0.0221）、M4a（0.0167）、M5b（0.0151）、M4b（0.0025）,两两比较分析显示,M2b患者APPmRNA表达显著高于M5b患者（P=0.000）.APP mRNA表达水平对AML亚型以外患者临床特征及治疗反应无显著影响（P＞0.05）.Kasumi-1细胞APP基因表达显著高于U937细胞（P＜0.05）,与AML各亚型原代细胞中的结果相一致.APP-siRNA转染HL-60细胞后,其APP mRNA表达下凋64%,在培养24、48及72 h后检测HL-60细胞增殖、分化、凋亡、细胞周期及对阿霉素敏感性均无明显变化（P＞0.05）.结论 伴t（8 21）异位的M2型白血病高表达APP mRNA,单核细胞白血病低表达APPmRNA.APP基因表达沉默对HL-60细胞的生物学作用无显著影响.

淀粉样前体蛋白转基因痴呆模型小鼠视网膜和视神经纤维层病理改变

目的观察淀粉样前体蛋白(amyloid precusor protein,APP)转基因痴呆(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠视网膜组织病理和视神经纤维记数的改变。方法本实验采用6只10月龄的C57BL/6JAPP转基因雄性小鼠模型作为模型组,6只同月龄的C57BL/6J正常雄性小鼠作为正常对照组。处死小鼠,完整取出眼球分离视网膜,进行视网膜常规HE染色,同时取球后视神经制作半薄切片,甲苯胺蓝染色,光镜观察视神经形态,行图像分析和轴突纤维计数。结果视神经横断面模型组小鼠与正常对照组相比:神经纤维组织疏松,排列较紊乱,染色深浅不均,间质增多,部分轴突水肿。与正常对照组(1.77±0.04)×106相比,模型组小鼠视神经纤维数量(2.28±0.06)×106明显减少,视神经纤维密度正常对照组和模型组分别为(0.3836±0.0697)μm-2和(0.2701±0.0517)μm-2,差异有统计学意义(P<0.01)。模型组神经细胞平均光密度值无明显变化,与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,模型组小鼠视网膜神经节细胞层细胞数量明显减少,差异有统计学意义(P<0.01),两组内颗粒层和外颗粒层细胞数量无明显变化,差异无统计学意义(均为P>0.05)。结论 APP转基因AD模型小鼠视网膜神经节细胞数减少,视神经纤维数明显减少而且受损,提示APP转基因AD模型小鼠视网膜和视神经存在退行性病变。

家族性Alzheimer病淀粉样蛋白前体基因第16、17外显子的突变分析

目的:了解中国家族性Alzheimer病(familial Alzheimer disease,FAD)患者中21号染色体上淀粉样蛋白前体(amyloid precursor protein,APP)基因第16、17外显子的突变情况。方法:应用限制性片段长度多态性(restrictionfragment length polymorphism,RFLP)、聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand con-formation polymorphsim,PCR-SSCP)及DNA直接测序技术,对两个FAD家系以及20例正常对照组进行了APP基因第16、17外显子检测。结果:全部家系成员及正常对照组经RFLP分析均存在EcoR Ⅰ酶切位点、BclⅠ消化后无Bcl Ⅰ多态性。经PCR-SSCP分析均未见异常泳动带。两个家系的全部成员及正常对照组经DNA序列分析也未见APP基因的缺失、插入和置换。结论:本研究中的两个家系中未发现APP基因第16、17外显子的突变,证实了APP基因突变所引起的FAD并不多见。

淀粉样前体蛋白/早老素1转基因小鼠脑皮质中过氧化物酶体增殖剂激活受体α的表达及意义

目的探讨淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)转基因小鼠脑皮质中过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)的表达变化及意义。方法选择10只5月龄雄性APP/PS1双转基因C57BL/6J-TgN(APP/PS1)ZLFILAS小鼠为实验组,10只同遗传背景5月龄雄性C57BL/6J野生型小鼠为对照组。采用Morris水迷宫实验测定2组小鼠空间学习记忆能力,免疫组织化学法检测2组小鼠脑组织中β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积情况,Western blot法检测2组小鼠脑皮质中PPARα、APP蛋白及肝组织中PPARα、脂酰辅酶A氧化酶1(ACOX1)及肉碱脂酰转移酶1(CPT1)蛋白表达,生物化学法检测2组小鼠血清中三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)水平。结果实验组小鼠不同时间点逃避潜伏期短于对照组,但2组间比较差异无统计学意义(P>0.05);实验组小鼠在目标象限游动时间短于对照组,但2组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组小鼠脑组织中未见到Aβ阳性斑块,实验组小鼠脑皮质和海马区可见大量大小不等的Aβ阳性斑块。实验组小鼠脑皮质中PPARα蛋白相对表达量显著低于对照组,APP蛋白相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。实验组小鼠肝组织中PPARα、ACOX1、CPT1蛋白相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。实验组小鼠血清TG水平显著高于对照组(P<0.05),实验组与对照组小鼠血清TC水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论APP/PS1转基因小鼠存在脑组织和肝组织PPARα异常表达、脂质代谢紊乱,PPARα在阿尔茨海默病的发病机制中起重要作用。

10月龄淀粉样前体蛋白和早老素双转基因（APP／PS-Tg）小鼠相关指标检测

目的观察10月龄淀粉样前体蛋白（APP）和旱老素（PS）双转基因（APP／PS-Tg）小鼠的各种病理学检测指标，为后续阿尔茨海默病（AD）研究提供参考。方法①用自主活动试验和水迷宫试验观察行为学改变；②用HE染色、硫代黄素s染色和TUNEL荧光染色观察脑组织病理学改变、纤维状AB沉积和细胞凋亡；③用多重荧光检测系统对血清和脑组织匀浆进行与免疫调节和信号通路有关的细胞因子检测。结果①行为学试验中，10月龄APP／PS-Tg小鼠自主活动次数与阴性对照比较差异无统计学意义，但Morris水迷宫试验显示APP／PS-Tg小鼠学习认知的时间（即潜伏期）落后于阴性对照组。②脑组织切片HE染色，可见APP／PS-Tg小鼠大脑皮层和海马区可见散在老年斑病变。老年斑大小不一，部分老年斑周围可见不典型的小胶质细胞反应，而阴性对照无此病理改变。用硫代黄素S染色，在激光共聚焦显微镜下用波长429nm观察，APP／PS-Tg小鼠大脑皮层和海马区可见散在颗粒状绿色荧光，荧光颗粒大小不一，主要分布在大脑皮层，海马区数量较少。阴性对照小鼠大脑皮层和海马区未发现有荧光颗粒。用TUNEL试验检测脑内细胞凋亡情况，在激光共聚焦显微镜下在520士20nm的荧光下观察绿色荧光标记的凋亡细胞。APP／PS-Tg小鼠与阴性对照比较，差异有极显著统计学意义沪≤0．01）。③血清细胞因子检测，10月龄APP/PS-Tg小鼠与阴性对照组比较，白介素（IL）-2、IL-10、IL-12、IL-12、IL—17α、肿瘤坏死因子（TNF）-α和转化生长因子㈣B3含量明显下降，其中IL-2、／L-10、IL-17α和TNFα含量均有显著下降沪≤0．01）；用脑组织匀浆检测细胞因子，APP／PS—Tg小鼠IL-2、IL-17α、TNF-α和TGβ1，2，3的含量较阴性对照高，但差异无统计学意义（P≥0．05）。结论在APP-PS-Tg小鼠的评价指标中，Morris水迷宫试验是一个敏感可靠的行为学试验方法；脑组织切片HE染色、硫代黄素S染色和TUNEL试验均简单易行，可从不同角度检测APP／PS—Tg小鼠的脑内病理改变；血清和脑组织匀浆细胞因子的检测显示有些细胞因子可能参与阿尔茨海默病的发病过程。

沂蒙山区阿尔茨海默病与淀粉样β蛋白及其前体基因的相关研究

目的 探讨阿尔茨海默病 (AD)与淀粉样 β蛋白 (Aβ)及其前体 (APP)基因的关系。 方法 研究 32例沂蒙山区AD患者 ,并设对照组 30例 ,检测脑脊液Aβ水平、APP基因表达量。 结果 AD组Aβ水平 (13.6 2 7±9.335 ) μg/L、APP表达量 (16 2 4± 2 98)拷贝 / μl。均明显高于对照组 (P <0 .0 1)。结论 痴呆程度与Aβ水平、APP基因表达量呈正相关。AD与Aβ、APP密切相关。但APP表达量在AD的诊断中不具特异性。

基于BDNF/TrkB通路探讨清心开窍方对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的影响

目的 基于脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)/原肌球蛋白相关激酶B(Tropomyosin-related kinase B,TrkB)通路探讨清心开窍方对淀粉样前体蛋白/早老素-1(APP/PS1)双转基因小鼠认知功能及神经元保护作用的影响。方法 将30只APP/PS1小鼠按照随机数字表法分为模型组、安理申组(1.67 mg·kg^(-1)·d^(-1))、清心开窍方低剂量组(4.75 mg·kg^(-1)·d^(-1))、清心开窍方中剂量组(9.5 mg·kg^(-1)·d^(-1))和清心开窍方高剂量组(19 mg·kg^(-1)·d^(-1))。选取6只雄性C57/B6小鼠记为对照组,连续90 d于每日上午9点进行灌胃。完成灌胃后,通过Morris水迷宫测试小鼠的空间学习记忆能力;通过HE染色观察小鼠海马CA1区细胞形态变化;通过尼氏染色观察小鼠海马CA1区病理形态变化;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)、TrkB、BDNF mRNA在小鼠海马中的表达;通过蛋白免疫印迹法(Western blotting, WB)检测P-TrkB、TrkB、BACE1、BDNF蛋白的表达水平。结果 与对照组相比,模型组小鼠逃避潜伏期明显增多(P<0.01),而穿越平台次数以及在原平台所在象限滞留的时间明显增多(P<0.01),其小鼠海马神经元出现严重损伤,排列松散,尼氏体数量减少,染色变浅,BACE1表达增加(P<0.01),P-TrkB、TrkB、BDNF表达降低(P<0.01);与模型组相比,清心开窍方治疗组逃避潜伏期缩短,穿越平台次数以及目标象限停留时间明显增多(P<0.05或P<0.01),小鼠海马锥体细胞排列较紧密,形态完整,尼氏体数目增加,着色加深,BACE1表达降低(P<0.05或P<0.01),P-TrkB、TrkB、BDNF表达增加(P<0.05或P<0.01)。结论 清心开窍方可能通过BDNF/TrkB通路改善APP/PS1小鼠学习记忆能力,对神经细胞起保护作用。

DAla2GIP对淀粉样前体蛋白/早老素1转基因小鼠膝关节软骨损伤保护效应的研究

目的探讨葡萄糖依赖性肠促胰岛素多肽（GIP）类似物DAla2GIP对淀粉样前体蛋白/早老素1（APP/PS1）转基因小鼠膝关节软骨损伤的保护效应及潜在机制。方法雄性APP/PS1小鼠及同窝出生野生型小鼠随机分为4组（6只/组）进行实验研究。结果免疫组织化学、免疫荧光和酶联免疫吸附试验（ELISA）结果显示，与野生型对照组比较，转基因组小鼠膝关节软骨肿瘤坏死因子-α（TNF-α，0.11±0.02，P＝0.001）和基质金属蛋白酶（MMP）-13（0.20±0.04，P＝0.001）表达量，脑组织及血浆中TNF-α[（331.60±39.06） pg/ml，P＝0.018]和MMP-9[（98.56±3.08） pg/ml，P＝0.001]及脑组织胶质纤维酸性蛋白（GFAP，0.74±0.12，P＝0.001）含量显著增高，而Ⅱ型胶原（ColⅡ，0.05±0.01）表达量显著下降（P＝0.002）；而经DAla2GIP治疗后，基本逆转转基因对照组的改变。结论APP/PS1转基因小鼠可能是通过促进TNF-α、MMP-9和MMP-13等炎症因子的分泌而诱发骨性关节炎的发生；而DAla2GIP可以通过抑制炎性因子对软骨细胞的损伤来发挥保护效应。

携带淀粉样前体蛋白瑞典型突变基因转基因小鼠的制备及体内表达研究

目的 建立携带人类淀粉样前体蛋白瑞典型突变 (Swedish mutation of amyloid precursorprotein,APPSWE)基因的转基因小鼠模型。方法 采用受精卵原核显微注射法 ,将人类 APPSWE转基因导入C5 7及昆明种小鼠受精卵内 ,然后将注射后保持完整的受精卵移植到假孕母鼠的输卵管内 ,然后应用聚合酶链反应 (polymerase chain reaction,PCR)、荧光原位杂交及逆转录 PCR分析子代小鼠中外源基因的整合及表达情况。结果 注射后卵的存活率和幼子出生率分别为 76 .6 2 %和 10 .38% ;外源基因整合率为 35 .2 9% ;共获得 6只首建小鼠 ,已稳定传 3代 ,PCR检测共 5 5只阳性 ;提取阳性小鼠心、脑、肝、肾组织及骨骼肌以人类 APPSWE基因外显子特异的引物进行逆转录 PCR分析 ,结果发现其心、脑组织及骨骼肌中具有人类APPSWE基因的表达。结论 说明携带淀粉样前体蛋白瑞典型突变基因的转基因小鼠模型已制备成功。

补肾中药有效成分对SAMP8小鼠海马APP及PS1基因表达的影响

[目的]观察补肾中药有效成分淫羊藿苷、补骨脂素、齐墩果酸对6月龄SAMP8小鼠淀粉样前体蛋白(APP)及早老素-1(PS1)基因表达的作用,为补肾中药防治老年性痴呆提供实验依据。[方法]选择6月龄健康雄性SMAP8小鼠40只,随机分为模型组、淫羊藿苷组、补骨脂素组、齐墩果酸组,每组10只。另取10只SAMR1小鼠作为对照组。治疗组分别给予淫羊藿苷、补骨脂素、齐墩果酸灌胃治疗(浓度为淫羊藿苷20 mg/kg,齐墩果酸、补骨脂素各50 mg/kg),每日1次,每次0.3 mL,连续灌胃4周。对照组与模型组均给予等量生理盐水灌胃。4周后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测海马组织PS1基因表达。[结果]1)与对照组相比,淫羊藿苷组、齐墩果酸组及补骨脂素组对APP基因下调均具有统计学意义(P<0.05)。2)与对照组相比,补骨脂素组有下调小鼠海马组织PS1基因的趋势,淫羊藿苷组及齐墩果酸组对PS1基因下调具有统计学意义(P<0.05)。[结论]补肾中药可能通过下调APP及PS1基因的表达,进而达到治疗老年性痴呆作用。

齐墩果酸对快速老化小鼠海马神经元及APP/PS1基因表达的影响

目的观察齐墩果酸对快速老化小鼠(SAMP8)海马组织神经元及淀粉样前体蛋白(APP)基因、早老素(PS)1基因表达的影响。方法选择9月龄健康雄性SAMP8小鼠30只,随机分为模型组、齐墩果酸组、盐酸多奈哌齐(安理申)组,每组10只。另取10只SAMR1小鼠作为正常组。齐墩果酸组给予齐墩果酸50 mg/kg(灌胃治疗),1次/d,连续灌胃4 w。安理申组给予等量安理申溶液(1.3 mg/kg)灌胃。模型组与正常组均给予等量生理盐水灌胃。4 w后应用光镜检测海马组织中神经元的变化,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测海马组织APP和PS1基因的表达。结果光镜下观察海马DG区神经元发现,在形态学上,齐墩果酸组与模型组相比有保护神经元细胞的趋势,且优于安理申组。PT-PCR检测发现,模型组与正常组相比,APP和PS1基因升高(P<0.05)。齐墩果酸组与模型组相比,APP与PS1基因表达量的降低有统计学意义(P<0.05)。安理申组与模型组相比,APP和PS1基因表达量的降低无统计学意义(P>0.05)。结论齐墩果酸可通过下调海马组织中APP及PS1基因的表达,抑制Aβ形成,保护神经元,进而起到防治AD的作用。

海风藤对β-APP基因表达的影响

目的:研究海风藤对人类神经母细胞瘤细胞淀粉样前体蛋白(β-APP)基因表达的影响。方法:用细胞培养和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察海风藤对β-APPmRNA的影响。结果:海风藤选择性抑制β-APP基因表达。结论:β-APP与Alzheimer病(AD)的发病关系密切,海风藤选择性抑制β-APP基因达,为其防治AD提供了更加可靠的实验依据。

阿尔茨海默病转基因小鼠的特点和应用

建立动物模型的目的是在实验动物身上复制人类疾病的模型,用于研究人类疾病的病因、发病、病理变化以及疾病的预防和治疗。目前尚无理想的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)动物模型,AD实验动物模型的滞后在很大程度上制约了AD治疗药物的筛选。随着AD病因和发病机制研究的不断深入,更完善的AD动物模型也在陆续出现。近年来出现的转基因动物模型属于AD的病因模型,但也不能完整复制出AD的所有特征。最大的缺憾在于缺乏神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)和在某些转基因模型中(尤其是单转基因模型)无广泛的神经元丢失。虽然用免疫组化方法检测到tau蛋白,但从未发现成对螺旋纤丝(paired helical filaments,PHF)。

阿尔茨海默病相关转基因小鼠模型的构建

将人类淀粉样前体蛋白瑞典型突变基因 (APPSW)与血小板衍生的生长因子 α链 (PDGFα)的顺式调控因子结合 ,构建成 PDGF- APPSW转基因 ;并通过原核显微注射法将之导入 C5 7小鼠受精卵内 ,成功地获得PDAPSW转基因小鼠模型 ,共出生 2 2只仔鼠 ,其中 5只基因组内有

APP基因启动子区甲基化与冠心病相关性的研究

为了探讨淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)基因甲基化与冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)之间的关系,采用甲基化特异性实时定量聚合酶链反应(quantitative methylation-specific PCR,qMSP)检测538名CHD患者及453名正常对照者的APP甲基化修饰水平。结果显示:CHD组的年龄、男性人数、吸烟及糖尿病患者人数均高于对照组(年龄,P=8.0E-08;男性人数,P=7.0E-07;吸烟,P=0.001;糖尿病,P=0.019)。CHD组患者白蛋白水平显著低于对照组(P=0.001),而AST、ALP及γ-GT的水平在CHD组中显著高于对照组(AST,P=3.0E-04;ALP,P=0.001;γ-GT,P=0.018)。在总体样本及男性样本中,APP基因甲基化水平在CHD组显著高于对照组(总体,P=0.026;男性,P=0.025)。在非吸烟CHD患者中,APP基因甲基化水平与狭窄程度呈正比(r=0.076,P=0.046)。在总体CHD伴高血压患者及男性CHD伴高血压患者中,APP基因甲基化水平和狭窄程度呈正比(总体,r=0.096,P=0.029;男性,r=0.135,P=0.019)。年龄分层分析后发现,在年龄≥63岁的男性CHD伴高血压患者中,APP基因甲基化水平与狭窄程度呈正比(r=0.219,P=0.020)。在年龄<63岁的不吸烟或非高血压CHD患者中,APP基因甲基化水平与狭窄程度呈负相关(不吸烟,r=-0.223,P=0.008;非高血压,r=-0.216,P=0.010)。在男性CHD患者中,APP基因甲基化水平与年龄呈正相关(r=0.163,P=0.001)。在女性CHD患者中,APP基因甲基化水平与年龄呈负相关(r=-0.192,P=0.015)。在男性正常对照组中,APP基因甲基化水平与年龄呈负相关(r=-0.203,P=0.001)。在女性正常对照组中,APP基因甲基化水平与ApoB、白蛋白及ALT水平呈负相关(r=-0.160,P=0.028;r=-0.151,P=0.036;r=-0.163,P=0.024)。在正常对照组中,APP基因甲基化水平与Lp(a)水平呈正相关(r=0.108,P=0.031)。以上结果初步表明APP基因甲基化水平增高可能和男性CHD患病风险有关。

表没食子儿茶素没食子酸酯对APP/PS1双转基因小鼠神经元突触可塑性和神经细胞黏附分子表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠空间学习记忆能力、海马CA1区突触超微结构和神经细胞黏附分子表达的影响。方法选用8周龄雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、EGCG组、盐酸多奈哌齐组,另以同窝阴性小鼠设立正常组,每组12只。连续灌胃给药6个月后进行相关指标检测。采用Morris水迷宫实验观测APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力;透射电子显微镜观察小鼠海马CA1区突触超微结构;分别采用免疫荧光法及免疫印迹法检测APP/PS1转基因小鼠海马CA1区神经细胞黏附分子(NCAM)和唾液酸转移酶(ST8SiaⅡ)的蛋白表达。结果与正常组比较,模型组逃避潜伏期延长;与模型组比较,EGCG组、盐酸多奈哌齐组小鼠逃避潜伏期下降(P<0.05)。电子显微镜结果显示,与模型组比较,EGCG组和盐酸多奈哌齐组突触界面曲率变化不明显;突触间隙宽度变窄,突触后致密物厚度增加(P<0.05)。免疫荧光结果显示,海马CA1区NCAM、ST8SiaⅡ蛋白表达在神经元的胞体内,EGCG组和盐酸多奈哌齐组NCAM、ST8SiaⅡ蛋白表达明显增加(P<0.05),免疫印迹实验发现其含量亦呈高表达水平(P<0.05)。结论EGCG对APP/PS1转基因小鼠的空间学习记忆功能具有改善作用,其机制可能与影响小鼠海马突触结构,提高小鼠海马神经黏附分子表达有关。