人参皂苷对Aβ_(25-35)蛋白诱导的老年性痴呆体外模型NG108-15神经元细胞凋亡的抑制作用

【目的】探讨在以NG108-15细胞作为神经元代表、β-淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)诱导凋亡的阿尔茨海默病体外细胞模型中,人参皂苷Rg1保护神经元的作用及其机制。【方法】采用倒置显微镜观察细胞形态,结合流式细胞仪检测凋亡率,进行Aβ25-35造模浓度与时间的选择以及Rg1预处理最佳浓度时间的选择;在此基础上,采用荧光显微镜和数据处理系统(DMR)图像分析仪检测免疫细胞化学法标记的核因子-κB(NF-κB)的活性;采用免疫组化染色法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达;采用酶标光度计、半胱氨酸/天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)比色检测试剂盒检测caspase-3活性。【结果】20μmol/L Aβ25-35作用24 h可诱导NG108-15细胞凋亡,2μmol/L Rg1组的NF-κB活性与模型组比较显著性提高(P<0.01),Rg1预处理组Bcl-2表达呈阳性,且caspase-3活性较模型组显著性降低(P<0.01)。【结论】高浓度聚焦状的Aβ25-35可下调神经元内NF-κB的活性,诱导细胞凋亡,Rg1通过启动神经元中NF-κB的活化从而上调Bcl-2表达,抑制caspase-3活性而发挥保护神经元的作用。

生长抑素及其受体与β-淀粉样蛋白降解酶的相关研究进展

阿尔兹海默症（AD）是多因素疾病，具体发病机制仍不明确，β-淀粉样蛋白（Ap）在脑内的沉积是导致AD发生的主要原因之一，大量蛋白酶被证实能够在体内外降解Aβ。生长抑素（SST）是一种在体内广泛分布的环肽，SST通过其受体（SSTR）发挥生理学功能。

五味子乙素抑制M146L细胞Aβ_(42)生成的机制研究

目的研究五味子乙素抑制M146L细胞A4β2生成的机制。方法体外培养高效表达Aβ42的M146L细胞株,分别加入不同浓度的五味子乙素(1.67,5.00和15.00μg.mL-1)、β分泌酶抑制剂(S4562,100.00μg.mL-1)和γ分泌酶抑制剂(S2188,13.68μg.mL-1)。用CCK-8(cell counting k it-8)比色法检测不同处理对M146L细胞活性的影响;用ELISA法测定M146L细胞所分泌的Aβ42的变化;用W estern b lotting检测APP的β分泌酶剪切产物C99蛋白的含量变化,结合用β和γ分泌酶活性试剂盒,检测五味子乙素对这两种酶活性的影响。结果不同处理因素对M146L细胞的存活率均无影响,不具有细胞毒作用。中、高剂量的五味子乙素均不同程度地抑制M146L细胞分泌A4β2及γ分泌酶的活性,但都不改变M146L细胞C99蛋白的含量及β分泌酶的活性。结论五味子乙素可抑制γ分泌酶活性,其降低A4β2生成是通过抑制γ分泌酶的活性来实现的。

Aβ单克隆抗体对痴呆模型小鼠学习记忆功能的影响

目的探讨抗阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)新药Aβ单克隆抗体对痴呆模型小鼠学习记忆能力的影响。方法将APP/PS1双转基因小鼠分为模型组、多奈哌齐组、人源化Aβ抗体组、鼠源化Aβ抗体组,以具有相同遗传背景的小鼠作为正常对照组。正常对照组及模型组腹腔注射抗体溶剂;人源化Aβ抗体组及鼠源化Aβ抗体组小鼠分别腹腔注射人源化Aβ抗体及鼠源化Aβ抗体;多奈哌齐组给予阳性药多奈哌齐灌胃给药。每周给药1次,给药15w后用Morris水迷宫方法检测人源化Aβ抗体和鼠源化Aβ抗体对痴呆模型小鼠学习记忆功能的改善作用以及对大脑海马组织Aβ1-42和Aβ1-40蛋白含量的影响。结果与正常对照组相比,模型组小鼠的空间学习记忆功能明显降低(P<0.05),但当腹腔注射人源化Aβ抗体和鼠源化Aβ抗体(1mg/mL)15w后均能显著改善痴呆模型小鼠学习记忆功能(P<0.05),改善作用强度与多奈哌齐(DPH,3mg/kg)相似。给予人源化Aβ抗体和鼠源化Aβ抗体15w后均能显著降低痴呆模型小鼠海马组织的Aβ1-40蛋白含量(P<0.01),而给予多奈哌齐却对海马组织Aβ1-40蛋白含量无明显影响。结论人源化Aβ抗体和鼠源化Aβ单克隆抗体可以明显改善APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠的空间学习记忆能力,其作用机制可能与降低海马组织Aβ1-40蛋白含量有关。

MCI-186对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞氧化损伤的神经保护作用

目的探讨MCI-186(edaravone)对阿尔茨海默病(AD)细胞损伤的保护作用。方法利用淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导PC12细胞制备成AD细胞模型;采用MTT法确定Aβ25-35抑制PC12细胞生长的半数抑制浓度(IC50)和MCI-186对AD细胞保护作用最强时的浓度;利用邻菲罗啉化学发光法测定羟自由基(.OH)含量,确定MCI-186清除.OH最强作用时的浓度。结果Aβ25-35诱导PC12细胞的IC50是29.76μmol/L,此浓度的Aβ25-35对PC12细胞生长的最大抑制率发生在36 h;30μmol/L Aβ25-35诱导PC12细胞36 h可以制成理想的AD细胞模型。20μmol/L MCI-186清除.OH作用最强,即对AD细胞的保护作用最强。结论MCI-186可以通过清除Aβ25-35产生的.OH,在AD中发挥其神经细胞保护作用。

连翘酯苷对PC12细胞增殖及其细胞损伤模型的保护作用

目的： 研究连翘酯苷对PC12细胞增殖及其损伤模型的影响。方法： 应用谷氨酸（20 mmol·L-1）、低糖低血清培养基及β淀粉样蛋白25~35（Aβ25~35，10 μmol·L-1）建立谷氨酸、低糖低血清及Aβ25~35致PC12细胞损伤模型，观察连翘酯苷低、中、高浓度（0.1，1，5 μmol·L-1）剂量对上述模型细胞存活率的影响，同时观察连翘酯苷低、中剂量对Aβ25~35致PC12细胞凋亡的影响。结果： 连翘酯苷可提高PC12细胞存活率，提高谷氨酸、低糖低血清及Aβ25~35致PC12细胞损伤模型的存活率，与模型组比较，有显著性差异（P〈0.05），并呈现一定量效关系。连翘酯苷（0.1，1 μmol·L-1）可降低Aβ25~35引起PC12细胞凋亡率（P〈0.05，P〈0.01）。结论： 连翘酯苷在体外实验具有神经细胞保护作用。