淀粉样肽前体蛋白17肽对紫外线照射后皮肤成纤维细胞内活性氧簇和基质金属蛋白酶-1 mRNA表达的作用

目的通过建赢体外培养人皮肤成纤维细胞的紫外线损伤模型，探讨淀粉样肽前体蛋白319～335肽段（APP17肽）对紫外线（ultraviolet，UV）照射后人皮肤成纤维细胞的保护作用及其可能的机制。方法从健康青年男性的包皮组织原代培养成纤维细胞。UV照射培养的成纤维细胞，并给予不同浓度的APP17肽保护。MTT法检测细胞活性。激光共聚焦显微镜检测活性氧（ROS）的水平，实时定最RTPCR方法检测基质金属蛋白酶-1（MMP-1）mRNA的表达。结果成功培养原代人皮肤成纤维细胞，并建立体外UV损伤模型。UV照射后细胞活性下降（P〈0．05），细胞内ROS产生增多（P〈0．05），MMP-1 mRNA表达增加1．78倍（P〈0．01）。APP17肽可增加UV照射后细胞活性（P〈0．05），降低细胞内ROS水平（P〈0．05），抑制MMP-1 mRNA表达（P〈0．05）。结论APP17肽对成纤维细胞的UV损伤有保护作用，APP17肽的光保护作用可能与其抑制ROS产生有关。

淀粉样β蛋白前体蛋白17肽对神经保护的作用及其机制

目的:探讨淀粉样β蛋白前体蛋白17肽对神经保护的作用机制,为阿尔茨海默病的治疗提供理论依据。资料来源:应用计算机检索Medline1987/2003关于淀粉样b蛋白前体蛋白研究的文章,检索词为“amyloidprecursorprotein,Alzheimer’sdisease”等,限定文章语言种类为英文;同时检索中国期刊网1999/2004期间的相关文献,检索词为“淀粉样β蛋白前体蛋白,阿尔茨海默病”,限定文章语言种类为中文。并手工查阅相关书籍。资料选择:对资料进行初审,选择与淀粉样β蛋白前体蛋白和阿尔茨海默病相关的研究论著,排除重复的同一研究。资料提炼:共收集到29篇相关文献,其中中文文献12篇,英文文献17篇。资料综合:淀粉样β蛋白前体蛋白17肽无论体内实验还是体外实验均显示对神经细胞的保护作用,它通过上调其他神经营养因子的表达,促进神经细胞存活信号通路相关蛋白的表达,抑制神经细胞凋亡因子的表达,影响神经细胞蛋白质代谢,从而改善模型动物神经系统超微结构的损害,提高模型动物学习记忆能力,达到神经保护的作用。结论:促进神经营养因子的表达是淀粉样β蛋白前体蛋白17肽神经元保护作用的有效机制之一;淀粉样β蛋白前体蛋白17肽对神经细胞存活信号通路的各个步骤均有影响,可以促进细胞存活是淀粉样β蛋白前体蛋白17肽神经元保护作用的另一有效机制。

血小板β-淀粉样肽前体蛋白免疫强度及异构体比率对Alzheimer病的诊断价值

目的探讨血小板β-淀粉样肽前体蛋白(APP)免疫强度及异构体比率对Alzheimer病(AD)的诊断价值。方法应用流式细胞术和Western Blot方法分别检测31例AD患者、22例血管性痴呆(VD)患者、28例神经变性病患者及30名健康老年人血小板APP免疫强度和APP异构体比率。结果APP免疫活性各组间差异无统计学意义;APP130/APP106比率AD组明显低于VD组、神经变性病组和健康老年组(均P<0.05);AD组APP130/APP106比率与其简易智力状态量表(MMSE)评分呈正相关(r=0.607,P<0.01)。结论血小板APP异构体比率降低可用于临床对AD的诊断。

淀粉样前体蛋白β位点单链抗体抑制β淀粉样肽的分泌

目的观察淀粉样前体蛋白(APP)β位点单链抗体(sc Fv)对APP的α和β代谢的影响,为其作为APPβ分泌酶特异抑制剂奠定基础。方法以APPβ位点sc Fv 2H10基因序列为模板,通过PCR引入Igκ轻链信号序列和myc标签,与真核表达载体pc DNA3.1hyg(^+)相连,转染过表达人瑞典突变型淀粉样前体蛋白695(APP695)的CHO细胞株(APP695sw/CHO),经潮霉素B筛选出稳定转染细胞株,用夹心ELISA检测稳定转染细胞株培养上清中Aβ40和分泌型APPα(s APPα)的含量,并分别比较两者的变化。结果经PCR、酶切和测序鉴定证明,获得引入Igκ分泌信号和myc标签的APPβ位点sc Fv基因片段,且与真核表达载体正确相连。转染APP695sw/CHO细胞后,经潮霉素B筛选得到稳定转染株;Western blot法可检测到目的蛋白表达,ELISA结果显示,与对照相比,稳定转染细胞培养上清Aβ40分泌量约下降30.4%、s APPα水平上升23.1%。结论 APPβ位点sc Fv在抑制Aβ分泌的同时还可能有利于APP的α代谢,可作为β分泌酶高特异性抑制剂。

β淀粉样肽前体蛋白和β淀粉样肽研究进展

老年性痴呆(AD)的神经病理以神经元内大量出现双殷螺旋细丝(PHF)和细胞外间隙出现以β淀粉样肽(β—Amyloid，Aβ，βA4)沉积为主的老年斑。本文主要介绍Aβ及其前体蛋白(Amyloid precunsor protein，APP)研究的某些进展。

血小板β-淀粉样肽前体蛋白免疫强度及异构体比率对Alzheimer病的诊断价值

目的探讨血小板β-淀粉样肽前体蛋白(APP)异构体比率对Alzheimer病(AD)的诊断价值。方法应用流式细胞术和Western Blot分别检测31例AD患者、22例血管性痴呆(VD)患者、28例神经变性病患者及30例健康老年人血小板APP免疫强度和APP130/APP106比率。结果APP免疫活性各组间差异无显著性;AD组APP130/APP106比率明显低于VD组、神经变性疾病组和健康老年组(均P<0.05),AD组APP130/APP106比率与其MMSE评分呈显著正相关(r=0.607,P<0.01)。结论AD患者血小板APP异构体比率降低可用于临床对AD鉴别。

淀粉样肽前体蛋白片段免疫改善糖尿病小鼠脑内β淀粉样肽类蛋白的表达

目的 探讨用 β淀粉样肽前体蛋白 (APP)中的某些肽段免疫小鼠可否减轻小鼠脑内 β淀粉样肽 (Aβ)及其前体蛋白 (APP)的表达。方法 分别用 APP中的 31 9- 335肽段 (APP1 7肽 )、597- 62 4肽段 (APP2 8肽即 Aβ1 - 2 8)免疫小鼠 ,APP1 7肽、Aβ1 - 2 8由我室合成并纯化。第 3次免疫后 ,诱发小鼠糖尿病模型。小鼠分 4组 :即用 APP1 7肽免疫的正常小鼠 (1 7PC) ;用 APP1 7肽免疫后诱发糖尿病的小鼠 (1 7PDM) ;用 Aβ1 - 2 8免疫的正常小鼠 (2 8PC) ;用 Aβ1 - 2 8免疫后诱发糖尿病的小鼠 (2 8PDM)。第 5次免疫后 ,对各组小鼠脑切片进行 Aβ类抗体的免疫组织化学染色。结果 1 7PC组小鼠海马内表达 Aβ1 - 4 2、 Aβ1 - 1 6及 APP C端抗体的阳性染色神经元数目多 ,而 1 7PDM组小鼠海马内上述各种抗体的阳性染色数目比 1 7PC组明显减少 (P<0 .0 1 ) ;2 8PC组小鼠海马内表达 Aβ1 - 4 2、Aβ1 - 1 6及 APP N端抗体的阳性染色神经元数目多 ,而 2 8PDM组小鼠海马内上述各种抗体阳性染色的数目比 2 8PC组明显减少 (P<0 .0 1 )。结论 糖尿病小鼠血 -脑屏障破坏 ,抗体进入脑组织 ,与β淀粉样肽或其前体蛋白结合而使之易被清除。

β-淀粉样肽前体蛋白的结构及生物活性

β 淀粉样肽前体蛋白是AD患者脑内神经炎斑的主要成分———β 淀粉样肽的代谢前体。其基因定位于人第 2 1号染色体 ,经可变剪接可产生 1 0种转录物。β 淀粉样肽前体蛋白广泛表达于几乎所有的神经元和非神经元组织 ,具有一个较长的细胞外肽链、单一跨膜区及一个短的胞内区域。研究表明 ,它具有神经营养、调节细胞粘附及抑制丝氨酸蛋白酶等多种生物活性。现有资料还提示β 淀粉样肽前体蛋白可能是细胞因子 (或其类似物 )

子宫内膜癌中淀粉样肽前体样蛋白2表达变化及对预后的影响分析

目的探讨子宫内膜癌中淀粉样肽前体样蛋白2(APLP2)的表达变化及对预后影响,为改善患者预后提供参考依据。方法通过免疫组织化学法对38例子宫内膜癌和42例正常子宫内膜石蜡切片的APLP2表达情况,并收集患者的临床资料和随访结果,分析APLP2的表达与患者临床资料关系,根据患者APLP2表达情况分为阳性组和阴性组,比较2组患者生存情况。结果子宫内膜癌组织中APLP2的阳性表达率为28.95%,明显低于正常子宫内膜组织的85.71%(P<0.05);APLP2阳性表达与肌层浸润、雌激素受体表达、分化程度相关(P<0.05),与年龄、FIGO分期、病理类型、淋巴结转移无关(P>0.05);随访时间6~36个月,阳性组生存率为81.48%,明显高于阴性组的55.45%(P<0.05)。结论子宫内膜癌患者中APLP2呈低表达,其低表达与肌层浸润和分化程度有关,并可作为患者预后的重要评估指标。

二苯乙烯苷对神经细胞淀粉样肽前体蛋白表达的影响及其与CREB调节相关的作用机制

目的探讨二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,TSG)对培养神经细胞淀粉样肽前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)表达的影响及其作用机制。方法应用Western blotting法检测APP和c AMP效应元件结合蛋白(c AMP responsive element-binding protein,CREB)的表达。用Matinspector软件分析APP启动子区CRE顺式反应元件;构建不同长度APP启动子区荧光素酶表达质粒;用双荧光素酶报告基因系统检测细胞中荧光素酶活性。结果由Forskolin激活SH-SY5Y细胞中CREB的同时可下调APP表达,成功构建了含有CRE元件的APP启动子区荧光素酶表达质粒。TSG能够抑制SH-SY5Y细胞内APP表达,并对APP启动子转染细胞内含有CRE1和2的APP荧光素酶报告基因质粒表达有显著抑制作用。结论 TSG能够下调神经细胞中APP的表达,其机制可能与影响CREB与CRE元件的结合有关。

血清生长分化因子-15、淀粉样蛋白A及N末端脑钠肽前体水平与川崎病患儿冠状动脉损伤的关系

目的探讨血清生长分化因子-15(growth differentiation factor-15,GDF-15)、血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)及N末端脑钠肽前体(N-terminalprobrainnatriureticpeptide,NT-proBNP)水平与川崎病患儿冠状动脉损伤的相关性。方法选取2017年6月至2020年2月广东省东莞市第三人民医院诊治的川崎病患儿为研究对象,最终筛选出59例川崎病患儿为观察组,按照随机数表法选取同期25例健康儿童为对照组。同时根据患儿冠状动脉损伤情况分为损伤组(19例)和无损伤组(40例)。检测各组血清GDF-15、SAA及NT-proBNP水平,分析GDF-15、SAA、NT-proBNP表达与川崎病患儿冠状动脉损伤的关系。结果①观察组血清GDF-15、SAA及NT-proBNP水平高于对照组(P<0.05);②损伤组GDF-15、SAA、NT-proBNP又显著高于无损伤组(P<0.05);③川崎病患儿血清GDF-15、SAA及NT-proBNP水平与冠状动脉内径均呈显著正相关(P<0.05);④联合检测诊断的受试者工作特征曲线下面积为0.921,诊断敏感度为73.7%,特异度为97.5%。结论血清GDF-15、SAA及NTproBNP的表达与川崎病患儿冠状动脉损伤存在一定关系,三者可作为川崎病合并冠状动脉损伤的早期诊断指标。

表观遗传和蛋白质翻译后修饰对β位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达调控的研究进展

β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)最早于1999年被发现鉴定,它是催化β淀粉样蛋白(Aβ)生成的关键限速酶,而Aβ单体的异常聚集所形成的淀粉样斑块是阿尔茨海默病(AD)的典型病理特征。在AD患者的大脑及体液中BACE1的浓度及活性异常增高,BACE1在AD的病理级联过程中发挥重要作用。因此,BACE1是减少Aβ生成,改善早期AD的重要药物靶标。

APP17肽对β-淀粉样肽及有关蛋白质表达的影响

本研究选用人类野生型SY5Y及SY5YA4CT基因转染细胞,应用免疫沉淀Western Blot等分析方法研究APP17肽对β-淀粉样肽及有关蛋白质如IDE、NT-3、JF表达的影响,探讨其影响神经元存活和退变的可能机理。结果发现,APP17肽能抑制转染细胞Aβ胞外分泌,并能促进野生型SY5Y细胞中IDE的表达,同时对内源性NT-3和NF的表达也有促进作用。提示:APP17肽抑制Aβ分泌和促进内源性神经营养因子的表达可能是其支持神经元存活、改善神经退变的机理之一。

家族性Alzheimer病淀粉样蛋白前体基因第16、17外显子的突变分析

目的:了解中国家族性Alzheimer病(familial Alzheimer disease,FAD)患者中21号染色体上淀粉样蛋白前体(amyloid precursor protein,APP)基因第16、17外显子的突变情况。方法:应用限制性片段长度多态性(restrictionfragment length polymorphism,RFLP)、聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand con-formation polymorphsim,PCR-SSCP)及DNA直接测序技术,对两个FAD家系以及20例正常对照组进行了APP基因第16、17外显子检测。结果:全部家系成员及正常对照组经RFLP分析均存在EcoR Ⅰ酶切位点、BclⅠ消化后无Bcl Ⅰ多态性。经PCR-SSCP分析均未见异常泳动带。两个家系的全部成员及正常对照组经DNA序列分析也未见APP基因的缺失、插入和置换。结论:本研究中的两个家系中未发现APP基因第16、17外显子的突变,证实了APP基因突变所引起的FAD并不多见。

正常人血清β-淀粉样肽及血小板β淀粉样前蛋白水平与年龄的相关性探讨

目的:探讨正常人血清β-淀粉样肽及血小板β淀粉样前蛋白水平与年龄的相关性.方法:应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定正常中青年人血清APP和Aβ40、Aβ42含量.结果:血清Aβ40和Aβ42水平在39岁以下组最低,40~49岁年龄组最高,而到了50岁以上,反而比40~49岁组降低;APP在40~49岁年龄组最低,比39岁以下组低,50岁以上组最高.结论:在40~49岁年龄组,血清APP分解为Aβ40和Aβ42增加.

突触融合蛋白17通过调节自噬减少阿尔茨海默病细胞模型中淀粉样物质沉积

目的:探究突触融合蛋白17(STX17)对小鼠海马神经元HT22细胞中自噬和淀粉样物质沉积的影响及可能机制。方法:用慢病毒介导HT22细胞内淀粉样前体蛋白(APP)和STX17过表达,RT-qPCR检测慢病毒感染后各组细胞中APP和微管相关蛋白1轻链3-II(LC3-II)及STX17的mRNA表达情况。刚果红染色观察HT22细胞中淀粉样物质沉积情况。Western blot检测自噬相关蛋白LC3-II和P62的表达。免疫荧光观察细胞中STX17定位,以及LC3-II定位和斑点数量。结果:HT22细胞成功过表达APP后,淀粉样物质沉积增多,STX17表达下降,STX17主要定位在细胞质内,LC3-II和P62表达明显增多。过表达STX17后,LC3-II和P62表达下降,淀粉样物质沉积减少。结论:STX17通过调节自噬减少阿尔茨海默病淀粉样物质沉积。

Alzheimer氏病淀粉样前体蛋白的研究进展

Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ氏病（ＡＤ）是一种发生于老年人群的原发性退行性脑病，其特征性病变为细胞内神经纤维缠绕（ＮＦＴ）及细胞外老年斑（ＳＰ）．构成ＳＰ的主要成分β淀粉样多肽（βＡ）为一由淀粉样前体蛋白（ＡＰＰ）剪切而来的分子质量约为４ｋｕ的多肽，其神经毒性可能由其氧化作用和在脂质双层中形成的Ｃａ２＋通道所致．ＡＰＰ的功能目前尚未完全明了，可能具有促进细胞粘附、维护突触膜稳定性等功能．ＡＰＰ主要通过两种途径进行加工修饰：一为分泌途径，由一些假定的分泌酶催化；另一为胞内体溶酶体途径．在形成ＳＰ的βＡ中，较长者比短者更易聚集，因此一些ＡＰＰ突变由于能够释放出更多的较长的βＡ或者使较短的βＡ生成量增加而致发家族性ＡＤ．一些可能在ＡＰＰ的代谢中起着重要作用的因素，如早衰蛋白的突变，也可通过增加βＡ的生成量而致发ＡＤ．

脑灵汤对阿尔茨海默病模型大鼠行为学及海马CA3区域淀粉样前体蛋白表达的影响(英文)

目的:探讨脑灵汤对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马CA3区APP蛋白表达的影响,并揭示AD发病的部分机制和脑灵汤可能的作用机制。方法:选取40只SPF清洁级SD大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、AD组、脑灵汤组和脑复康组,每组8只,喂养1周后,采用Aβ1-42注射大鼠海马法制成大鼠模型,再喂养28 d,治疗后用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆行为能力,HE染色检测大鼠海马组织形态学变化,免疫组织化学法观察APP蛋白在大鼠海马CA3区中的表达。结果:Morris水迷宫实验结显示:AD大鼠组的隐匿平台逃避潜伏期延长(P<0.05),在探索实验中,AD大鼠存在记忆障碍(P<0.05),而脑灵汤治疗后可使AD大鼠的逃避潜伏期缩短(P<0.05),大鼠平均探索次数明显增多(P<0.05)。AD组大鼠海马CA3区锥体细胞排列紊乱,有细胞缺失的现象,APP蛋白表达增多,脑灵汤治疗后可改善CA3区椎体细胞的病理改变以及降低APP蛋白的表达。结论:脑灵汤能明显改善AD模型大鼠低下的空间学习记忆能力,降低模型大鼠海马CA3区APP表达,对老年性痴呆大鼠学习记忆能力可能有提高作用。

长期口服雌激素对去卵巢大鼠海马结构内β-淀粉样前体蛋白及其mRNA表达的影响

目的观察长期口服复方尼尔雌醇和小剂量17β-雌二醇补充治疗对去卵巢大鼠海马结构内β-淀粉样前体蛋白(β-APP)及其mRNA表达的影响。方法7月龄SD大鼠按体重随机分成5组正常对照组、假手术组(SHAM)、去卵巢组(OVX)、17β-雌二醇预防干预组(OVX/ERT)和复方尼尔雌醇预防干预组(OVX/NL)连续观察。5组均在去卵巢后35w处死。用免疫组织化学方法(SABC法)显示大鼠海马结构内β-APP,原位杂交方法显示β-APPmRNA。细胞计数及图像分析观察β-APP及其mRNA的变化。结果OVX组海马结构内各亚区β-APP阳性神经元数量和平均光密度均高于正常组、SHAM组、OVX/ERT组、OVX/NL组(P<0.05),而β-APPmRNA阳性神经元数量和平均光密度在5组之间均无显著性差异。结论长期雌激素缺乏导致了大鼠海马结构内β-APP含量的增加,长期口服复方尼尔雌醇和小剂量17β-雌二醇补充治疗可减少β-APP的含量,且二者效果相当。促进β-APP分解、减少β-APP的含量,进而减少Aβ的沉着可能是雌激素神经保护的重要机制之一。