大豆肽减轻β-淀粉样蛋白肽诱导的小鼠原代海马神经元损伤

目的:研究大豆肽对β-淀粉样蛋白肽(Aβ)诱导的海马神经元损伤是否具有保护作用。方法:分离胚胎18.5 d C57BL/6小鼠海马原代神经元,培养7 d后用10μmol/L的Aβ25-35处理,制作神经元损伤模型;随后分别在神经元培养基中加入0.1%、0.5%和1.0%的大豆肽,处理48 h后,利用MTT法检测大豆肽对海马神经细胞活力的影响,DAPI染色检测神经细胞凋亡形态变化;免疫印迹检测神经细胞凋亡蛋白表达的变化;免疫荧光染色法检测原代神经元中微管蛋白β-Ⅲ-tubulin及微管相关蛋白MAP2的变化。结果:大豆肽提高了Aβ25-35所致神经损伤模型中海马神经元的细胞活力,大豆肽降低了Aβ25-35所致神经损伤模型中海马神经元的凋亡,减轻了细胞骨架的损伤。结论:大豆肽对Aβ诱导的神经细胞凋亡及细胞骨架损伤具有明显的抑制作用。

血小板β-淀粉样肽前体蛋白免疫强度及异构体比率对Alzheimer病的诊断价值

目的探讨血小板β-淀粉样肽前体蛋白(APP)免疫强度及异构体比率对Alzheimer病(AD)的诊断价值。方法应用流式细胞术和Western Blot方法分别检测31例AD患者、22例血管性痴呆(VD)患者、28例神经变性病患者及30名健康老年人血小板APP免疫强度和APP异构体比率。结果APP免疫活性各组间差异无统计学意义;APP130/APP106比率AD组明显低于VD组、神经变性病组和健康老年组(均P<0.05);AD组APP130/APP106比率与其简易智力状态量表(MMSE)评分呈正相关(r=0.607,P<0.01)。结论血小板APP异构体比率降低可用于临床对AD的诊断。

血小板β-淀粉样肽前体蛋白免疫强度及异构体比率对Alzheimer病的诊断价值

目的探讨血小板β-淀粉样肽前体蛋白(APP)异构体比率对Alzheimer病(AD)的诊断价值。方法应用流式细胞术和Western Blot分别检测31例AD患者、22例血管性痴呆(VD)患者、28例神经变性病患者及30例健康老年人血小板APP免疫强度和APP130/APP106比率。结果APP免疫活性各组间差异无显著性;AD组APP130/APP106比率明显低于VD组、神经变性疾病组和健康老年组(均P<0.05),AD组APP130/APP106比率与其MMSE评分呈显著正相关(r=0.607,P<0.01)。结论AD患者血小板APP异构体比率降低可用于临床对AD鉴别。

β-淀粉样肽前体蛋白的结构及生物活性

β 淀粉样肽前体蛋白是AD患者脑内神经炎斑的主要成分———β 淀粉样肽的代谢前体。其基因定位于人第 2 1号染色体 ,经可变剪接可产生 1 0种转录物。β 淀粉样肽前体蛋白广泛表达于几乎所有的神经元和非神经元组织 ,具有一个较长的细胞外肽链、单一跨膜区及一个短的胞内区域。研究表明 ,它具有神经营养、调节细胞粘附及抑制丝氨酸蛋白酶等多种生物活性。现有资料还提示β 淀粉样肽前体蛋白可能是细胞因子 (或其类似物 )

阿尔茨海默病转基因果蝇模型β淀粉样蛋白对胆碱能突触的毒性影响

目的研究β淀粉样蛋白(Aβ)多肽对阿尔茨海默病(AD)转基因果蝇大脑中胆碱神能经元突触的影响。方法分别建立转Aβ40,Aβ42基因果蝇AD两个模型组,以野生果蝇(canton-s)作为对照组。采用生物素染色和激光共聚焦成像记录投射神经元的形态;通过全细胞膜片钳方法记录各组投射神经元胆碱能的自发突触后电流和微兴奋性突触后电流;检测各组果蝇的嗅觉短期记忆能力。结果与对照组相比较,Aβ42组的自发突触后电流的频率和振幅均有明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);Aβ42组微兴奋性突触后电流的频率明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。在巴甫洛夫的嗅觉相关的短期学习记忆测试中,与对照组相比较,Aβ40,Aβ42两组果蝇学习记忆指数均明显降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 Aβ肽对胆碱能突触传递的影响提示,其可能是由Aβ肽引起胆碱能神经元变性和记忆不断下降的可能机制之一。

子宫内膜癌中淀粉样肽前体样蛋白2表达变化及对预后的影响分析

目的探讨子宫内膜癌中淀粉样肽前体样蛋白2(APLP2)的表达变化及对预后影响,为改善患者预后提供参考依据。方法通过免疫组织化学法对38例子宫内膜癌和42例正常子宫内膜石蜡切片的APLP2表达情况,并收集患者的临床资料和随访结果,分析APLP2的表达与患者临床资料关系,根据患者APLP2表达情况分为阳性组和阴性组,比较2组患者生存情况。结果子宫内膜癌组织中APLP2的阳性表达率为28.95%,明显低于正常子宫内膜组织的85.71%(P<0.05);APLP2阳性表达与肌层浸润、雌激素受体表达、分化程度相关(P<0.05),与年龄、FIGO分期、病理类型、淋巴结转移无关(P>0.05);随访时间6~36个月,阳性组生存率为81.48%,明显高于阴性组的55.45%(P<0.05)。结论子宫内膜癌患者中APLP2呈低表达,其低表达与肌层浸润和分化程度有关,并可作为患者预后的重要评估指标。

二苯乙烯苷对神经细胞淀粉样肽前体蛋白表达的影响及其与CREB调节相关的作用机制

目的探讨二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,TSG)对培养神经细胞淀粉样肽前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)表达的影响及其作用机制。方法应用Western blotting法检测APP和c AMP效应元件结合蛋白(c AMP responsive element-binding protein,CREB)的表达。用Matinspector软件分析APP启动子区CRE顺式反应元件;构建不同长度APP启动子区荧光素酶表达质粒;用双荧光素酶报告基因系统检测细胞中荧光素酶活性。结果由Forskolin激活SH-SY5Y细胞中CREB的同时可下调APP表达,成功构建了含有CRE元件的APP启动子区荧光素酶表达质粒。TSG能够抑制SH-SY5Y细胞内APP表达,并对APP启动子转染细胞内含有CRE1和2的APP荧光素酶报告基因质粒表达有显著抑制作用。结论 TSG能够下调神经细胞中APP的表达,其机制可能与影响CREB与CRE元件的结合有关。

胰岛淀粉样蛋白多肽与糖尿病

一般认为胰岛'细胞只释放一种激素产物(胰岛素及其相关前体物质)入血,然而在过去的十年中,人们发现'细胞还能分泌少量其它肽和蛋白,其中最引入注目的是新近发现的37个氨基酸的神经肽样分子——胰岛淀粉样蛋白多肽(Islet Amyloid Polypeptide IAPP),它与Ⅱ型糖尿病(NIDDM)之间的关系日益受到重视,现就有关问题综述如下; 一、IAPP与胰岛淀粉样蛋白 早在1900年,病理学家Opie就报导人类朗罕氏胰岛发生有“透明样变性”,以后利用刚果红染色和极化显微镜的组织化学检查揭示了其淀粉样蛋白(Amyloid)的特征,并证实Amyloid是NIDDM患者。

TO901317对海马神经元β-分泌酶表达及β-淀粉样肽生成的影响

目的研究肝X受体(LXR)配体TO901317对海马神经元淀粉样前体蛋白(APP)、α-分泌酶(ADAM10)和β-分泌酶(BACE1)mRNA表达的影响及与β-淀粉样肽(Aβ)生成的关系。方法大鼠海马神经元培养至第7天,在饲养液中加入2.0μmol/LTO901317,继续培养48h。应用RT-PCR方法研究海马神经元APP、ADAM10和BACE1等基因的mRNA的表达,放免法检测培养液Aβ含量的变化。结果TO901317降低海马神经元APP和BACE1 mRNA表达(P<0.01),减少培养液Aβ含量(P<0.01),但不影响ADAM10 mRNA表达(P>0.05)。结论TO901317激活LXR,能通过降低APP和BACE1的表达来减少海马神经元Aβ分泌。

淫羊藿黄酮与淫羊藿苷对APP转基因小鼠大脑伊淀粉样肽及α-synuclein的影响

目的：β淀粉样肽前体蛋白（APP）经淀粉源途径水解产生过量Aβ表达是AD病理发生、发展级联反应的主要起始病因和重要病理机制。β分泌酶BACE是产生β-淀粉样肽（Aβ）的淀粉源途径中的重要分泌酶，对Aβ生成有直接影响。α-synuclein（α-syn）是AD病人脑内老年斑的核心成分的前体蛋白。本实验的拟观察淫羊藿黄酮和淫羊藿苷对APP转基因小鼠脑内APP、BACE蛋白表达、A8含量及淀粉样斑块数量及α-syn表达的影响。方法：用药组小鼠自4月龄开始灌胃给予淫羊藿黄酮小（30mg／kg／d）、大剂量（100mg／kg／d）及淫羊藿苷小（18mg／kg／d）、大剂量（58mg／kg／d）6个月至10月龄，正常对照组、转基因阴性对照组及模型组以同样方式灌胃给予蒸馏水。应用免疫组化学及Western blot方法分别检测海马CAl区及皮层中APP、BACE和α-syn的表达，采用双抗体夹心ELISA试剂盒测定海马中不溶性Aβ-42含量，采用刚果红染色和Bielsehowsky镀银染色法检测淀粉样斑块，采用免疫荧光双标染色方法分别检测Aβ与淀粉样纤维、α-syn与Aβ及淀粉样纤维共表达。结果：10月龄的APP转基因小鼠大脑海马和皮层APP、BACE、α-syn表达及海马不溶性Aβ1-42含量明显增加，海马和皮层淀粉样斑块数量明显增加，并且淀粉样纤维与Aβ1-42在海马CAl区、齿状回和皮层顶叶存在共定位关系，提示转基因小鼠脑内淀粉样斑块形成与Aβl-42密切相关。结论：10月龄的APP转基因小鼠脑内存在多种拟AD痴呆样病理改变，是较好的拟AD痴呆动物模型。淫羊藿黄酮和淫羊藿苷能减少APP转基因模型小鼠脑内Aβ经由淀粉源途径生成及含量，并能降低α-syn表达，从而减少Aβ与α-syn彼此促进的淀粉样纤维聚集，对防治AD等神经退行性疾病具有良好的应用前景。

APP17肽对链佐星-大鼠海马胰岛素信号转导相关蛋白表达的影响

目的 通过免疫组化的方法 ,研究APP1 7肽对链佐星 (STZ)诱发的糖尿病大鼠海马神经元Akt PKB ,CREB ,GSK 3β以及Bax ,Bcl 2等蛋白表达的影响。方法 用STZ腹腔注射诱发糖尿病模型 ,并皮下注射APP1 7肽对糖尿病组进行治疗。 1 0周后行通道水迷宫测定 ,取脑组织进行Akt PKB ,GSK 3β以及Bax ,CREB ,Bcl 2的免疫组化染色。结果 糖尿病组海马内Akt PKB ,CREB的阳性反应神经元数目减少 ,染色淡。GSK 3β,Bax阳性神经元较对照组明显增多 (P <0 .0 1 )。Bcl 2阳性神经元数目 3组间相比无明显差异。糖尿病APP1 7肽治疗组与对照组相近。结论 糖尿病脑病大鼠海马存在胰岛素信号转导途径相关和凋亡级联反应相关蛋白的表达异常 ;APP1 7肽能改善这些蛋白表达 。

尿酸与阿尔兹海默症相关蛋白的关系研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是高发于老年前期和老年的一种中枢神经系统退行性疾病[1],以进行性认知障碍并伴有行为损伤为特征。主要临床表现为交流障碍、视空间功能障碍、记忆力持续衰退和社会接触能力减退,严重者发展为痴呆,丧失生活自理能力。AD是严重影响老年人健康的疾病之一,据2019年全球疾病负担研究统计,在1990年至2019年期间,中国AD发病率增长了264.8%,死亡率上升了247.9%,40岁及以上人群因AD而死亡的估计人数从1990年的9万增加到2019年的32万,给人群健康和医疗保健系统带来了巨大的挑战[2]。AD起病隐匿,发病进程缓慢,临床前期大脑内已经有AD相关生物标志物的病理改变。

对神经元氧化应激损伤具有保护活性的灵芝化合物体外筛选及作用机理

【目的】筛选灵芝中具有保护神经元活性的化合物,并探究其相应的作用机理,为研发具有预防和治疗阿尔茨海默病(AD)功效的灵芝功能性食品、保健品和药品提供科学依据。【方法】基于β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的氧化损伤建立细胞模型,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法、铁离子还原/抗氧化能力检测法和2,2-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除法初步评估得到的抗氧化活性较强的灵芝醇提物进行筛选,并对其神经元保护活性进行评价。进一步利用灵芝醇提物中与抗氧化有关的4种三萜类化合物,验证其活性并通过表面等离子共振技术探究其相关作用机理。【结果】DPPH、ABTS自由基清除及铁离子还原/抗氧化能力等体外理化初筛与细胞水平筛选试验结果表明,6种灵芝醇提物(108、161、106-2、171、173和109)抗氧化保护神经元活性较强,其中108、109和106-2样品对大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞(PC12细胞)氧化应激损伤的保护效果最好;灵芝醇提物可通过缓解细胞周期紊乱、抑制细胞早期凋亡、提高超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)含量,抑制丙二醛(MDA)含量上升来发挥神经元保护作用。灵芝醇提物108、106-2和109中4种三萜类化合物(灵芝醛A、灵芝酸B、灵芝酸C2和灵芝酸LM2)的平均含量占比相对较高。活性验证表明4种化合物对细胞氧化应激损伤均有明显修复效果,其中灵芝醛A与Aβ_(1~42)具有较强的亲和力,其KD值为15.62μmol/L,可通过与Aβ_(1~42)竞争性结合来抑制Aβ_(1~42)与RAGE结合。【结论】灵芝醇提物的抗氧化神经元活性通过灵芝酸C2、灵芝酸B、灵芝酸LM2和灵芝醛A 4种化合物的协同效应来实现。灵芝醛A能通过与RAGE竞争性结合来减轻或抑制Aβ_(1~42)细胞毒性作用。灵芝具有开发防治AD功能性产品的潜力。

凝聚态Aβ_(25～35)可通过JNK/p38 MAPK途径诱导胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化

目的 探讨JNK／p38MAPK在p淀粉样蛋白多肽片段25-35（Aβ25-35）诱导的阿尔茨海默病（AD）样胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化中的作用。方法 应用蛋白免疫印迹和免疫细胞化学染色的方法，观察Tau蛋白磷酸化和JNK／p38丝裂原活化的蛋白激酶（JNK／p38MAPK）的表达情况。结果凝聚态Aβ25-35（20μmol／L）作用于皮层神经元12h，Tau蛋白sep396、Ser199/202、Thr205位点的磷酸化水平明显增高，同时JNK／p38MAPK的总量及其活性形式．磷酸化JNK／p38MAPK的蛋白表达水平也增加。结论 Aβ25-35可通过激活JNK／p38MAPK使Tau蛋白的磷酸化水平增高。

小鼠糖尿病脑病神经元退变的机制及淀粉样β蛋白前体17肽的作用

目的 观察小鼠糖尿病脑淀粉样 β肽 (Aβ)和内质网Aβ结合蛋白 (ERAB)的变化 ,以了解糖尿病神经元退变的可能机制并观察淀粉样 β蛋白前体 (APP) 17肽的作用。 方法 用链脲佐菌素诱发糖尿病小鼠模型 ,并用APP17肽保护。 4周后 ,取脑 ,做APP17肽、Aβ 1～ 40、Aβ 1～ 42、Aβ 1～ 16及ERAB免疫组化染色。结果 正常小鼠海马内表达APP17肽、Aβ 1～ 40、Aβ 1～ 42、Aβ 1～ 16及ERAB的神经元数目少 ,染色淡 ,糖尿病小鼠海马内上述各种神经元的染色数目及染色程度均比正常小鼠明显增加 (P <0 .0 5 ) ,用APP17肽保护后 ,上述各种神经元染色数目及程度与正常小鼠接近。结论 糖尿病小鼠海马神经元表达Aβ和ERAB比正常小鼠明显增加 ,这可能是糖尿病脑病海马神经元退变的机制之一。APP17肽可使糖尿病小鼠Aβ及ERAB表达恢复正常 ,提示APP17肽有调节Aβ代谢和改善神经元退变的功能。

PI3K特异性抑制剂Wortmannin和APP17肽对SY5Y细胞胰岛素信号转导通路的作用

目的利用PI3K的特异性抑制剂Wortmannin阻断体外培养的人神经母细胞瘤株SY5Y细胞的存活信号转导通路,观察β淀粉样肽前体蛋白(APP)17肽对SY5Y细胞生长的影响及其作用机制。方法体外培养SY5Y细胞,分为对照组、Wortmannin组、APP17肽组、APP17肽+Wortmannin组、葡萄糖组、葡萄糖+APP17肽组、葡萄糖+Wortmannin+APP17肽组,观察各组细胞的噻唑蓝(MTT)代谢率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、细胞轴突长度、胞体面积。结果(1)APP17肽可促进SY5Y细胞MTT代谢率升高、LDH漏出率降低、细胞轴突长度和胞体面积增加,但经Wortmannin作用后,其作用减弱。(2)APP17肽对高糖环境下的SY5Y细胞也有上述作用,且经Wortmannin作用后其作用减弱。结论APP17肽能通过激活胰岛素的PI3K信号转导通路发挥其神经保护作用。

淀粉样肽前体蛋白17肽对紫外线照射后皮肤成纤维细胞内活性氧簇和基质金属蛋白酶-1 mRNA表达的作用

目的通过建赢体外培养人皮肤成纤维细胞的紫外线损伤模型，探讨淀粉样肽前体蛋白319～335肽段（APP17肽）对紫外线（ultraviolet，UV）照射后人皮肤成纤维细胞的保护作用及其可能的机制。方法从健康青年男性的包皮组织原代培养成纤维细胞。UV照射培养的成纤维细胞，并给予不同浓度的APP17肽保护。MTT法检测细胞活性。激光共聚焦显微镜检测活性氧（ROS）的水平，实时定最RTPCR方法检测基质金属蛋白酶-1（MMP-1）mRNA的表达。结果成功培养原代人皮肤成纤维细胞，并建立体外UV损伤模型。UV照射后细胞活性下降（P〈0．05），细胞内ROS产生增多（P〈0．05），MMP-1 mRNA表达增加1．78倍（P〈0．01）。APP17肽可增加UV照射后细胞活性（P〈0．05），降低细胞内ROS水平（P〈0．05），抑制MMP-1 mRNA表达（P〈0．05）。结论APP17肽对成纤维细胞的UV损伤有保护作用，APP17肽的光保护作用可能与其抑制ROS产生有关。

APP17肽对D-半乳糖脑老化小鼠海马凋亡相关基因表达的影响

目的 研究APP17肽对D 半乳糖脑病小鼠海马神经元凋亡的影响。 方法 用D 半乳糖制备脑老化模型 ,皮下注射APP17肽治疗D 半乳糖脑老化小鼠 ,3个月后取脑组织做Bcl 2、Bax、CREB、AKt、AIF免疫组织化学染色。 结果 D 半乳糖脑病小鼠海马内Bax、AIF阳性反应神经元胞浆与突起深染 ,而正常小鼠及APP17肽保护的D 半乳糖小鼠海马阳性细胞数目少 ,染色淡 ;D 半乳糖小鼠海马内Bcl 2、CREB、AKt阳性细胞数目少 ,染色淡 ;而正常小鼠及APP17肽保护的D 半乳糖小鼠海马阳性反应神经元胞浆与突起深染。 结论 促进凋亡的Bax、AIF在D 半乳糖小鼠海马表达增加 ;抑制凋亡的Bcl 2、CREB、AKt在D 半乳糖小鼠海马表达降低。APP17肽能影响D 半乳糖脑病小鼠脑内Bcl 2、Bax、CREB、AKt、AIF的表达 。

乌司他丁对氯胺酮麻醉后幼鼠认知功能及Tau、Aβ蛋白的影响

目的探讨乌司他丁预给药对氯胺酮麻醉后幼鼠认知功能的影响。方法健康雄性SPF级C57BL/6小鼠36只,21日龄,体重20~30 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=12):空白对照组(C组)、氯胺酮组(K组)、乌司他丁预先给药组(S组)。K组和S组腹腔注射氯胺酮30 mg/kg、每隔30 min重复注射一次,3次/d,连续7 d;S组于每天第1次注射氯胺酮前30 min腹腔注射乌司他丁50000 U/kg。末次给药结束后24 h立即行行为学测试,行为学测试完毕后立即处死大鼠,取海马组织,以western blot法测定海马tau蛋白、Aβ淀粉肽样蛋白的表达。结果与C组比较,K组逃避潜伏期延长,原平台停留时间,穿越平台次数减少,海马海马tau蛋白、Aβ淀粉肽样蛋白的表达含量升高(P<0.05),S组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。与K组比较,S组逃避潜伏期明显缩短,原平台停留时间延长,穿越原平台次数增多,海马tau蛋白、Aβ淀粉肽样蛋白的表达降低(P<0.05)。结论乌司他丁预先给药可改善氯胺酮慢性暴露所致幼鼠认知功能障碍,其机制可能与抑制海马海马tau蛋白、Aβ淀粉肽样蛋白的表达有关。

人参皂苷Re对瞬时转染APPswe N2a细胞内β2-肾上腺受体及β-样淀粉蛋白肽的影响

目的:研究人参皂苷Re对瞬时转染瑞典型突变淀粉样前体蛋白(APPswe)cDNA的小鼠神经瘤母细胞(N2a细胞)内β2-肾上腺受体(β2-AR)及β-样淀粉蛋白肽(Aβ)的影响。方法:瞬时转染APPswe质粒入N2a细胞24h后,加入1、10及100μmol/L浓度的人参皂苷Re处理细胞24h后收集细胞。应用点印迹检测4G8(识别Aβ17-24片段)的表达,免疫印迹检测APP、β2-AR、β2-AR丝氨酸346位点磷酸化(pS346-β2-AR)和β2-AR苏氨酸68位点磷酸化(pT68-β2-AR)的表达,并采用免疫细胞化学技术分析统计pS346-β2-ARβ及β2-AR的染色强度。结果:瞬时转染APPswe质粒的N2a细胞内pS346-β2-AR的表达较pcDNA组增强(P<0.05),pT68-β2-AR的表达较pcDNA组减弱(P<0.05)。与APPswe组比较,1、10、100μmol/L的人参皂苷Re可降低pS346-β2-AR的表达(P<0.01),人参皂苷Re不能逆转pT68-β2-AR的表达水平。免疫细胞化学统计显示,转染APPswe质粒的N2a细胞内pS346-β2-AR染色强度较对照组显著增强(P<0.05),人参皂苷Re可减弱其表达。β2-AR的表达在各组无显著差异。转染APPswe质粒的N2a细胞内APP及4G8的表达较对照组显著增加(P<0.01);与APPswe组比较,比较,100μmol/L的人参皂苷Re可减少APP蛋白的表达(P<0.05),10μmol/L及100μmol/L的人参皂苷Re降低4G8表达(P<0.05)。结论:人参皂苷Re可降低瞬时转染APPswe质粒的N2a细胞内pS346-β2-AR的表达水平,并显著减少该细胞内APP及Aβ的表达,改善AD的基本病变。