海马注射β-淀粉样蛋白前体蛋白抗体诱导神经元的退行性变及学习记忆障碍(英文)

探讨海马内注射淀粉样蛋白前体蛋白(APP)抗体诱导细胞表面APP的铰链是否影响大鼠的水迷宫行为学以及是否诱导神经元的退行性改变,并进一步探讨其可能的机制.成年雄性SD大鼠海马内分别注射生理盐水、对照IgG和APP抗体.水迷宫行为学检测测试动物的学习和记忆能力.Cresyl Violet(CV)和Fluoro-Jade B染色观察神经元的退行性变.免疫组织化学方法检测MAP-2和磷酸化paxillin及磷酸化tau蛋白在海马的异常表达和分布.海马内注射APP抗体可延长动物的寻台潜伏期,减少大鼠在平台所在象限的探索时间和穿梭次数.CV和Fluoro Jade-B染色结果显示,海马注射APP抗体可导致海马锥体细胞的死亡和退变.同时伴MAP2免疫染色的减少和磷酸化paxillin及磷酸化tau的免疫染色的增加.上述结果表明,海马内注射APP抗体可诱导学习和记忆功能障碍及神经元的退行性改变,其机制可能与MAP-2和磷酸化paxillin及磷酸化tau的异常表达分布有关.

亚低温干预对颅脑创伤大鼠β-淀粉样蛋白前体蛋白表达的影响

目的观察颅脑创伤（TBI）大鼠脑海马组织β-淀粉样蛋白前体蛋白（APP）的表达以及亚低温干预对APP表达的影响。方法30只Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组、TBI常温组[（37．0±0．5）℃]和TBI亚低温组[（32．0±O．5）℃]，每组10只。用液压冲击致伤法建立中度TBI动物模型，常温或亚低温干预6h后，观察大鼠神经功能行为学变化，苏木素-伊红（HE）染色观察海马组织病理学改变，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测海马区APPmRNA表达，组织免疫荧光和蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测APP、β-淀粉样蛋白（Aβ）蛋白表达。结果与对照组比较，TBI常温组神经功能行为评分（分）明显降低（26．08±1．23比35．00±0．00），脑海马组织存活的神经元数量减少，APP阳性神经元数量明显增加，APPmRNA及相关蛋白表达均明显升高（APPmRNA：1．491±0．122比0．711±0．082，APP蛋白：1．782±0．034比0．763±0．023，Aβ蛋白：1．321±0．240比0．092±0．002，均P〈0．05）。与TBI常温组比较，TBI亚低温干预能显著提高大鼠TBI后神经功能行为评分（32．29±1．31比26．08±1．23），增加脑海马区存活的神经元数量，减少APP阳性神经元细胞数，APPmRNA及其相关蛋白表达均显著降低（APPmRNA：0．733±0．084比1．491±0．122，APP蛋白：0．653±0．026比1．782±0．034，Aβ蛋白：0．123±0．003比1．321±0．240，均P〈0．05）。结论大鼠TBI后的APP蓄积可能是发生继发性脑损伤（SBI）的机制之一，亚低温可通过减少APP的生成来减轻SBI的程度，起到神经保护作用。

三七总皂苷对快速老化小鼠SAMP8大脑β-淀粉样蛋白前体蛋白表达的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对快速老化小鼠SAMP8β-淀粉样蛋白前体蛋白(APP)表达的影响。方法采用免疫组织化学方法,在高倍显微镜下随机选取小鼠大脑顶叶皮层和海马周围白质连续五个视野,并计数五个视野APP免疫阳性细胞平均个数。结果PNS能明显减少快速老化小鼠大脑APP阳性细胞数量。结论PNS对SAMP8 APP的表达有明显抑制作用。

β-淀粉样蛋白前体蛋白胞内结构域(AICD)研究进展

老年性痴呆症(Alzheimer's disease,AD)一个重要的病理学特征,是在神经细胞外形成由β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)组成的淀粉样斑(amyloid plaques)。β-淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid procursor protein,APP)经β-分泌酶和γ-分泌酶依次水解后产生Aβ和APP胞内结构域(APP intracellular domain,AICD)。现在已经知道Aβ在AD的发病机制中起着关键作用,但是关于AICD的生理及病理功能还不清楚。近年来研究发现AICD可以与细胞内多种蛋白相互作用,而且AICD在基因转录、细胞凋亡以及APP的加工和运输过程中均有调节功能。本文针对这一领域的研究进展,对AICD的生理及病理功能进行探讨。

β-淀粉样蛋白前体蛋白胞内结构域(AICD)与阿尔茨海默病

阿尔茨海默病的(Alzheimer's disease,AD)一个重要的病理学特征之一是脑内出现β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)组成的淀粉样斑。β-淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)经β-分泌酶和γ-分泌酶依次水解后产生Aβ和APP胞内结构域(APPintracellular do-main,AICD)。现在已经知道Aβ在AD的发病机制中起着关键作用,但是关于AICD的生理及病理功能还不清楚。近年来研究发现AICD可以与细胞内多种蛋白相互作用,而且AICD在基因转录、细胞凋亡,突触可塑性,神经发生以及APP的加工和运输过程中均有调节功能。本文针对AICD的生理及病理功能进行探讨。

分泌型β-淀粉样蛋白前体蛋白的神经保护作用及其分子机制

β-淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)是体内广泛表达的跨膜蛋白质,已知APP经β-分泌酶切割产生的β-淀粉样蛋白(Aβ)是阿尔茨海默病(AD)的标志性病理分子之一,但对APP生理功能的认识比较有限。近年的研究却发现,APP经分泌酶切割的可溶性胞外片段sAPP对于兴奋性神经毒性、脑缺血、脑创伤等病理状况具有与β-淀粉样蛋白相反的神经保护作用。离体和在体研究证明,APP的α-分泌酶切割片段sAPPα可促进神经元的增殖、分化以及促进突触的发育,并改善突触传递和突触可塑性,进而提升学习与认知功能;APP基因缺失则造成不良后果。已报道的sAPPα神经保护作用机制包括激活高电导钾通道,抑制电压依赖性钙通道和NMDA受体通道介导的钙内流,调节神经细胞的离子稳态,平衡神经元和突触的兴奋性。值得注意的是,最新的研究鉴定出sAPP在细胞表面的特异性受体GABA_BR1a,sAPP通过与该受体结合调节突触传递,协同降低神经元的异常兴奋性。可以预见,深入研究与发掘sAPP神经保护作用的机制与替代方法,恢复退行性病变脑组织已经降低的sAPPα水平与下游效应分子功能,将可能为相关脑疾病的发病机制与防治提供新思路或新策略。

天然产物来源的β位淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1抑制剂的研究进展

目的 对天然产物来源的β位淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1(BACE1,又称β-分泌酶)抑制剂的研究进展进行总结。方法 通过收集文献中报道的具有抑制BACE1活性的天然产物信息,对其BACE1抑制活性进行总结,根据化学结构、来源植物、半抑制浓度等信息对化合物进行分类。结果 根据结构类型将文献中报道的天然产物来源的BACE1抑制剂分为黄酮类、三萜及甾体类、香豆素类、蒽醌类、鞣质多酚类及生物碱类。结论 梳理天然产物来源的BACE1抑制剂的研究进展,为基于该靶点的创新药物研发奠定基础。

小鼠皮层和海马Aβ前体蛋白表达的增龄性改变

目的探讨年龄对小鼠皮层和海马神经元Aβ前体蛋白(APP)695表达的影响。方法 C57BL/6J雄性小鼠按照年龄随机分为3组:2月龄组、12月龄组和20月龄组;采用免疫组织化学和免疫印迹方法观测各组皮层和海马神经元APP695蛋白的表达。结果与2月龄相比,12月龄组海马和皮层神经元APP695蛋白水平明显升高(P<0.05);20月龄组APP水平较12月龄组明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论小鼠皮层和海马神经元APP695的表达随着年龄的增长而增高。

阿尔茨海默病中BACE1相互作用蛋白筛选及功能分析

目的β淀粉样蛋白前体蛋白裂解酶1(β-site APP cleaving enzyme 1,BACE1)是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)中淀粉样斑块形成的限速酶,其表达水平与活性在AD发生发展中起到关键作用。BACE1的相互作用蛋白可以通过直接结合、间接结合、参与各种细胞信号转导通路等方式,直接或间接在BACE1的转录、翻译、修饰、胞内运输等各个环节对BACE1进行调节,从而参与AD的发生与疾病的进程。本研究拟筛选并验证BACE1的相互作用蛋白,为进一步深入阐明淀粉样斑块形成的机制提供新的依据。方法采用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)与质谱联合应用的技术富集并鉴定AD模型小鼠海马组织中BACE1的相互作用蛋白,通过生物信息学分析筛选与BACE1有潜在相互作用的蛋白质,采用Co-IP实验及免疫荧光共聚焦技术进行初步验证,并探究BACE1相互作用蛋白在AD细胞模型中蛋白质表达水平变化。结果本研究在AD组中共鉴定到与BACE1相互作用的差异表达蛋白614个。基因本体(GO)富集分析显示,AD组BACE1相互作用蛋白主要参与细胞内信号转导、靶向高尔基体囊泡的转运、浦肯野细胞层发育等生物学过程;京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析显示,AD中BACE1相互作用蛋白主要参与了PI3K-Akt信号通路、mTOR信号通路等神经退行性疾病相关通路。通过构建BACE1相互作用蛋白网络,筛选了12个可信度较高的相互作用蛋白,其中NSF、NUMB、HSP90aa1、SNAP91为首次发现的BACE1相互作用蛋白。经进一步验证,发现NSF与BACE1存在相互作用,并且在AD细胞模型中NSF表达水平上调。结论BACE1相互作用蛋白参与多种AD相关生物途径及信号通路,NSF为新鉴定到的BACE1相互作用蛋白,与BACE1存在相互作用。NSF在AD细胞模型中表达水平上调,预测NSF与BACE1蛋白间相互作用参与调节AD疾病的进程,为疾病的机制研究提供新的靶点和方向。

APP17肽对链佐星-大鼠海马胰岛素信号转导相关蛋白表达的影响

目的 通过免疫组化的方法 ,研究APP1 7肽对链佐星 (STZ)诱发的糖尿病大鼠海马神经元Akt PKB ,CREB ,GSK 3β以及Bax ,Bcl 2等蛋白表达的影响。方法 用STZ腹腔注射诱发糖尿病模型 ,并皮下注射APP1 7肽对糖尿病组进行治疗。 1 0周后行通道水迷宫测定 ,取脑组织进行Akt PKB ,GSK 3β以及Bax ,CREB ,Bcl 2的免疫组化染色。结果 糖尿病组海马内Akt PKB ,CREB的阳性反应神经元数目减少 ,染色淡。GSK 3β,Bax阳性神经元较对照组明显增多 (P <0 .0 1 )。Bcl 2阳性神经元数目 3组间相比无明显差异。糖尿病APP1 7肽治疗组与对照组相近。结论 糖尿病脑病大鼠海马存在胰岛素信号转导途径相关和凋亡级联反应相关蛋白的表达异常 ;APP1 7肽能改善这些蛋白表达 。

绞股蓝正丁醇提取物对快速老化小鼠Aβ蛋白的影响

目的探讨壮药绞股蓝Gynostemma pentaphyllum正丁醇提取物对快速老化SAMP8小鼠淀粉样蛋白(Aβ蛋白)的影响。方法 50只快速老化SAMP8小鼠随机分为模型组、石杉碱甲组[0.15 mg/(kg·d)]和绞股蓝正丁醇提取物高、中、低剂量组[500、250、125 mg/(kg·d)],10只正常老化SAMR1小鼠为正常对照组。灌胃给药8周后,取小鼠血清和脑匀浆,以ELISA法检测其Aβ蛋白的水平,RT-PCR和免疫组织化学法检测App基因和APP蛋白的表达。结果与模型组比较,绞股蓝正丁醇提取物给药组小鼠脑组织中的APP基因表达和蛋白表达明显下调,血清和脑组织中的Aβ蛋白水平显著降低。结论绞股蓝正丁醇提取物可通过抑制APP蛋白的生成,使Aβ蛋白的表达减少,从而起到防治阿尔茨海默症(AD)的作用。

运动对快速老化小鼠海马β-淀粉样蛋白及淀粉样蛋白前体蛋白的影响

目的 研究运动对快速老化小鼠（SAMP）8海马β-淀粉样蛋白（Aβ）及淀粉样蛋白前体蛋白（APP）的影响,以探讨运动改善阿尔茨海默病（AD）学习记忆功能的机制.方法 将40只3月龄SAMP8小鼠采用单纯随机抽样法分为运动组和对照组,运动组进行跑笼运动训练,第1个月每周训练5 d,每天10 min,第2个月每周训练5 d,每天20 min.2个月后采用H-E染色观察2组小鼠海马神经元形态改变;免疫组织化学技术检测海马Aβ免疫阳性细胞的表达;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测海马APP mRNA的表达水平.结果 对照组5月龄SAMP8小鼠海马部分神经元细胞变性、死亡,核浓缩,空泡变性;运动组偶有神经元细胞变性、死亡,大部分细胞形态正常.运动组海马Aβ免疫阳性细胞表达水平为（0.192±0.018）,明显低于对照组的（0.274±0.017）（P＜0.05）;运动组海马APP mRNA表达水平为（0.168±0.059）,明显低于对照组的（0.574±0.115）（P＜0.01）.结论 运动可以延缓SAMP8小鼠海马神经元变性,降低海马Aβ及APP的表达,这可能是运动改善AD学习记忆功能的重要机制之一.

淀粉样前体蛋白(APP)相互作用及其生物学意义

淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)是一类与阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease,AD)的发生、发展密切相关的I型跨膜蛋白,具有膜受体样结构,但迄今人们对APP真正的生理功能仍知之甚少。近年来研究发现,APP分子间可以进行二聚化,并且反式的二聚化作用有促进细胞黏附的功能。而APP的降解产物β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)反过来又可以加速APP的聚集,经过一系列反应,最终引发细胞凋亡。本文综述这一领域的研究进展,特别是APP的相互作用,以及这些相互作用对细胞状态和行为的影响。

β分泌酶抑制剂对冈田酸诱导PC12细胞淀粉样蛋白前体蛋白代谢的影响

目的探索β分泌酶抑制剂对冈田酸（OA）诱导的PC12细胞淀粉样蛋白前体蛋白（APP）代谢的影响。方法10nmol／L OA作用4h、8h、16h、24h及48h诱导PC12细胞tau磷酸化，加β分泌酶抑制剂干预，MTT法测定细胞抑制率，免疫细胞化学法及Western blot检测全长APP和β-C末端片段（βCTF）。结果10nmol／L OA对PC12细胞的抑制作用呈时间依赖性，β分泌酶抑制剂可明显减轻该作用。OA诱导PC12细胞内全长APP和βCTF含量增加，β分泌酶抑制剂进一步增加细胞内全长APP含量，并减少βCTF含量。结论OA诱导PC12细胞中APP主要经β分泌酶途径代谢，生成具有神经毒性的βCTF。β分泌酶抑制剂通过维持细胞存活和减少βCTF从而减轻OA诱导的神经毒性，但使细胞内APP进一步增多。

人淀粉样蛋白前体蛋白639及其编码序列及用途

该发明专利公开了一种新的多肽——人淀粉样蛋白前体蛋白639(APP639蛋白)的氨基酸序列及其编码序列，抗此多肽的抗体，以及该多肽和核苷酸在筛选治疗老年性痴呆症的药物和制备检测肝脏发育状况的试剂盒等方面的应用。

补肾活血针刺法对SAMP8小鼠认知功能及海马神经元沉默信息调节因子2调控作用的研究

目的探究补肾活血针刺法对加速衰老的小鼠模型SAMP8小鼠认知功能和海马神经元沉默信息调节因子2(SIRT2)介导的内质网蛋白4B(RTN4B)/β淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)通路的影响。方法6只SAMR1小鼠为正常对照组,18只SAMP8小鼠随机分为模型对照组、针刺治疗组、非针刺治疗组,各6只。针刺治疗组血海、膈俞施捻转泻法,肾俞、百会施捻转补法,运针1 min,留针10 min;非针刺治疗组在非经非穴点进行抓捉刺激;均干预8周。通过Morris水迷宫试验评估小鼠认知功能。采用免疫组织化学染色和酶联免疫吸附试验评估海马神经元小胶质细胞的激活和β淀粉样蛋白(Aβ)沉积。通过蛋白质免疫印迹检测SIRT2途径相关蛋白SIRT2、RTN4B、BACE1和β淀粉样前体蛋白C-末端片段(APP-CTF)的表达水平。结果与正常对照组比较,模型对照组逃避潜伏期延长,目标象限停留时间减少,穿越平台次数减少(P<0.05),海马组织Aβ42和CD68阳性面积增大(P<0.01),血清Aβ42水平增高,海马组织中SIRT2、BACE1和APP-CTF表达明显增加,RTN4B表达降低(P<0.05)。与模型对照组及非针刺治疗组比较,针刺治疗组逃避潜伏期缩短[第1天:(37.80±10.42)s比(49.80±6.14)s、(44.60±7.40)s,P<0.05;第2天:(36.80±12.69)s比(48.80±5.97)s、(44.20±7.72)s,P<0.05;第3天:(38.60±9.71)s比(51.20±5.54)s、(43.60±6.46)s,P<0.05;第4天:(36.00±11.20)s比(46.40±5.81)s、(45.20±7.36)s,P<0.05;第5天:(36.60±11.37)s比(47.80±5.31)s、(43.80±9.44)s,P<0.05],目标象限停留时间增加[(7.83±0.98)s比(1.00±0.63)s、(3.33±0.52)s,P<0.05],穿越平台次数增加[(13.33±1.03)次比(3.17±1.17)次、(7.33±0.52)次,P<0.05];海马组织Aβ42和CD68阳性面积减少(P<0.01),血清Aβ42水平显著降低[(11.38±1.57)μg/mL比(23.14±2.41)μg/mL、(17.16±1.27)μg/mL,P<0.05];海马组织中SIRT2[(1.98±0.19)比(4.21±0.31)、(3.22±0.23),P<0.05或P<0.01]、BACE1[(1.81±0.14)比(2.80±0.19)、(2.43±0.13),P<0.05或P<0.01]和APP-CTF[(2.56±0.26)比(4.53±0.33)、(3.48±0.25),P<0.05或P<0.01]表达降低,RTN4B[(0.79±0.06)比(0.27±0.03)、(0.46±0.05),P<0.05或P<0.01]表达增高。结论补肾活血针刺法通过抑制SIRT2介导的RTN4B/BACE1途径,改善SAMP8小鼠的认知功能和Aβ沉积。

SH-SY5Y神经细胞中尼古丁受体α3亚单位基因表达抑制与APP代谢的关系

目的用RNA干扰技术抑制神经型尼古丁受体(nAChR)α3亚单位基因表达并观察对神经细胞淀粉样蛋白前体蛋白(APP)代谢的影响。方法设计并体外合成α3nAChR的特异性编码siRNA序列的寡核苷酸,退火后克隆至pSliencer3.1-H1neo质粒中,构建重组质粒α3nAChR pSilencer3.1-H1neo。将α3nAChR pSilencer3.1-H1neo转染SH-SY5Y细胞,用含G418的培养液筛选,挑选阳性克隆后采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹方法检测转染细胞中α3nAChR mRNA及蛋白表达水平的变化;并测定分泌型APP、总APP蛋白表达的变化。结果成功构建α3nAChR siRNA表达质粒,转染后经G418筛选获得稳定转染重组质粒的细胞克隆株,与对照组相比,α3nAChR mRNA及蛋白表达量均降低(抑制率分别为98%和66%);分泌型APP表达下降,总APP水平比较表达水平无显著性差异。结论α3nAChR siRNA表达质粒能特异性抑制α3nAChR基因表达,α3nAChR可能通过增加α-分泌酶对APP的切割发挥神经保护作用。

淀粉样脑血管病26例尸检标本免疫组化病理研究

目的探讨β淀粉样蛋白(Aβ1-40、Aβ1-42)、β淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,βAPP)以及半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C,CC)在淀粉样脑血管病(cerebral amyloid angiopathy,CAA)脑组织中的表达情况。方法采用免疫组化方法,检测26例CAA患者尸检脑组织中Aβ1-40、Aβ1-42、βAPP和CC的表达情况。结果 Aβ1-40表达广泛见于枕叶、颞叶、顶叶、额叶,Aβ1-42、βAPP表达可见于颞叶、枕叶和顶叶,CC表达仅见于1例顶叶和枕叶;Aβ1-40、Aβ1-42、βAPP染色阳性主要见于中、小血管的血管壁外层,CC染色阳性多见于血管壁外膜,均可见脑血管壁增厚,透明样变性。结论 Aβ1-40是CAA血管壁内沉积淀粉样蛋白的主要成分,在CAA发生机制中起重要作用,并为CAA治疗目标Aβ从血管的靶向清除提供指导意义。

锌离子与锌转运体6在APP/PS1转基因小鼠小脑内的分布

目的研究游离锌离子和锌转运体6(zinc transporter 6,ZnT6)在APP/PS1转基因小鼠小脑内的分布。方法应用浸入式金属自显影技术(AMG)和免疫组织化学染色标记游离锌离子、ZnT6和淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP),通过免疫荧光染色和共聚焦激光扫描显微镜观察ZnT6和β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)在老年斑内的定位,并分析锌离子、ZnT6与APP和Aβ分布的相关性。结果游离锌离子、ZnT6和APP免疫阳性反应产物均定位于老年斑内,老年斑主要分布于小脑分子层,浦肯野细胞层和颗粒层分布较少;ZnT6和Aβ荧光双标的结果进一步证实两者共存于老年斑内。结论APP/PS1转基因小鼠小脑Aβ老年斑内有大量的ZnT6蛋白表达,并聚集着大量的锌离子,提示锌离子可能参与小脑Aβ老年斑的形成,而ZnT6在老年斑内锌离子的聚集过程中起着重要的调节作用。

EGb761对AD大鼠大脑神经生长因子(NGF)及其受体p75的影响

目的研究EGb761(达纳康)对Aβ25-35所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑组织神经生长因子(NGF)及其受体p75的调节机制。方法采用双侧杏仁核注射Aβ25-35造成AD大鼠模型,观察大鼠Morris水迷宫空间记忆能力,并分别通过免疫组化和RT-PCR方法研究AD大鼠神经元NGF及其受体p75和APPmRNA变化以及EGb761对其影响。结果AD模型大鼠Morris水迷宫测试出现空间记忆能力下降,APPmRNA表达提高,NGF减少,神经系统失去了营养保护。EGb761能有效控制以上病理变化。结论EGb761提高模型大鼠定向学习记忆能力,可能通过降低皮层、海马部位APPmRNA的表达,增加NGF阳性样细胞、减少p75受体阳性样细胞调节神经营养而发挥作用。提示通过有效调节NGF及其受体是EGb761的重要作用机制之一。