大豆低聚肽对小麦淀粉理化性质的影响

为改善小麦粉的品质,提升小麦食品的蛋白质含量,将具有营养价值和生物活性的大豆低聚肽添加到小麦淀粉中,对小麦淀粉糊化特性、流变学特性、热力学特性和结构特性进行研究。结果表明,大豆低聚肽的添加(0%~40%)使复合物的峰值黏度、低谷黏度和终值黏度降低,糊化温度显著升高(P<0.05)。复合物表现为弱凝胶性质,具有假塑性剪切稀化行为。与对照组相比,大豆低聚肽添加量为40%时,复合物的峰值黏度最小,糊化温度最大,分别为396 cp和77.5℃,焓变下降了79.6%,Zeta-电位的绝对值下降了89.6%,粒径增加至924.1 nm。大豆低聚肽增加了复合物氨基酸含量和热稳定性,降低了复合物的凝胶特性,为功能性谷物食品的开发和加工提供了参考。

糯小麦“山农糯麦1号”籽粒及淀粉品质分析

为更好地了解糯小麦的品种特性,以山东省第一个审定的高产糯小麦“山农糯麦1号”为材料,研究其籽粒和淀粉特性。结果发现:该品种几乎不含直链淀粉(仅0.1%),较普通小麦具有较高的蛋白质含量(16.4%)和面粉白度(81.2%)。扫描电镜观察淀粉粒度分布不均匀,A型淀粉颗粒较多。快速粘度分析(RVA)测定表明淀粉具有较低的糊化温度,较短的糊化时间,较低的峰值黏度、最终粘度和回生值。加工时面团吸水率明显较高,形成时间大于稳定时间。这些结果将为山农糯麦1号适于用作配粉和加工食品提供参考依据。

绿豆蛋白α-淀粉酶抑制肽的制备与鉴定

采用胃-胰蛋白酶水解绿豆蛋白及其分级蛋白,以水解物α-淀粉酶活性抑制率为主要指标,结合水解度、氨基酸组成及分子质量分析其抑制效果差异及原因。结果表明,绿豆蛋白肽对α-淀粉酶活性抑制率最高,为16.51%;与绿豆分级蛋白相比,绿豆蛋白的疏水氨基酸含量和水解度最高,分别为32.68%和6.28%,水解物的肽分子质量最小,均小于20kDa,因此选用绿豆蛋白制备α-淀粉酶抑制肽。然后分离鉴定绿豆蛋白肽,新发现了17条有潜在α-淀粉酶抑制效果的肽。本研究表明绿豆蛋白较其分级蛋白具有更强的α-淀粉酶抑制效果,能够用于降血糖的功能性食品或药物中。

复脉益心方辅助治疗风湿性心脏瓣膜病患者的临床疗效及对其心功能、基质金属蛋白酶-9、N末端前体脑利钠肽水平的影响

目的 探讨复脉益心方辅助治疗风湿性心脏瓣膜病患者的疗效及对其心功能、血清基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloprotein-9,MMP-9)水平、N末端前体脑利钠肽(N-terminal precursor brain natriuretic peptide,NT-pro BNP)水平的影响。方法 选取2021年2月—2022年2月期间湖南中医药大学第一附属医院收治的风湿性心脏瓣膜病患者88例作为研究对象。采用随机数字表法将患者分为对照组和观察组,每组各44例。两组患者均接受二尖瓣置换术治疗,术后根据病情给予西医常规治疗,观察组术后在常规西医治疗基础上联合复脉益心方治疗。治疗4周后,观察比较两组患者临床疗效、安全性,治疗前后中医证候积分,MMP-9、NT-pro BNP水平、心功能指标(每分钟心输出量、每搏输出量、心脏指数、左心室射血分数)、生活质量评分(社会限制、体力限制、症状、情绪)变化情况。结果 治疗后两组患者心悸、疲乏、气短、盗汗或自汗、心烦、失眠多梦评分均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组心悸、疲乏、气短、盗汗或自汗、心烦、失眠多梦评分均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者血清MMP-9和NT-pro BNP水平均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组血清MMP-9和NT-pro BNP水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者每分钟心输出量、每搏输出量、心脏指数及左心室射血分数指标均较治疗前明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组每分钟心输出量、每搏输出量、心脏指数及左心室射血分数指标均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者社会限制、体力限制、症状及情绪评分均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组社会限制、体力限制、症状及情绪评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后观察组总有效率95.45%(42/44)明显高于对照组79.55%(35/44),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,两组患者肝肾功能、血常规均未发生异常,术后也未出现明显用药不良反应。结论 复脉益心方辅助二尖瓣置换术治疗风湿性心脏瓣膜病,能够降低MMP-9、NT-proBNP水平,有助于改善患者心功能,保护心肌,快速缓解患者临床症状,提高生活质量。

老年肾衰竭血液透析患者血清淀粉样蛋白A、和肽素、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白表达水平与感染的相关性

目的:探讨老年肾衰竭血液透析患者血清淀粉样蛋白A (serum amyloid A protein,SAA)、和肽素(Copeptin)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)表达水平与感染的相关性,为临床预测老年肾衰竭血液透析患者发生感染提供可靠数据支持。方法:选取2020年7月—2022年2月南阳油田总医院收治的89例血液透析后7 d发生感染的老年肾衰竭患者为感染组,同期89例透析后7 d未发生感染的老年肾衰竭患者为未感染组。比较两组患者透析后1 d、7 d血清SAA、Copeptin、NGAL表达水平,分析透析后1 d血清SAA、Copeptin、NGAL表达水平间相关性、发生感染的危险因素以及对感染的危险度。结果:感染组透析后1 d、7 d血清SAA、Copeptin、NGAL表达水平较未感染组高,差异有统计学意义(t=21.193、8.050、19.949;42.658、17.844、29.740,P<0.05);老年肾衰竭血液透析患者透析后1 d血清SAA与血清Copeptin、NGAL,血清Copeptin与NGAL呈正相关(r=0.587、0.629、0.448,P<0.001);logistic回归分析显示,透析后1 d血清SAA (>56.44 mg/L)、Copeptin (>4.57μmol/L)、NGAL (>48.89 ng/mL)表达水平是老年肾衰竭血液透析后7 d发生感染的危险因素(OR=7.385、6.765、4.129,P<0.05);透析后1 d血清SAA、Copeptin、NGAL高水平患者发生感染危险度高于低水平(RR=4.310、3.225、3.525,P<0.05)。结论:老年肾衰竭血液透析伴感染者血清SAA、Copeptin、NGAL表达水平呈高表达,动态监测其血清水平变化有助于早期制定防感染措施。

虎杖苷对β淀粉样蛋白诱导体外皮质神经元线粒体氧化应激和功能障碍的保护作用

目的探讨虎杖苷对β淀粉样蛋白25~35(Aβ_(25~35))诱导的原代培养大鼠皮质神经元损伤的保护作用及可能的作用机制。方法原代培养SD大鼠皮质神经元,分为对照组、虎杖苷组、Aβ_(25~35)组和联合组(Aβ_(25~35)+虎杖苷)。采用四甲基偶氮唑盐检测皮质神经元活力,2,7-二氯荧光素二乙酸酯探针或红色线粒体超氧化物荧光探针染色检测细胞内和线粒体活性氧水平,线粒体膜通透性转换孔(MPTP)试剂盒检测MPTP开放程度,蛋白免疫印记法检测细胞色素C及线粒体转录因子A(TFAM)表达。另外,测定细胞内电子传递链复合物(包括复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)活性和三磷酸腺苷(ATP)水平。采用高效液相色谱法测定线粒体中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)。结果与对照组比较,Aβ_(25~35)组皮质神经元细胞活力、线粒体荧光强度、线粒体呼吸链酶活性(复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)、细胞内ATP、线粒体内TFAM表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与Aβ_(25~35)组比较,虎杖苷组线粒体荧光强度、线粒体呼吸链酶活性(复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)、细胞内ATP、线粒体内TFAM表达明显增高,皮质神经元暴露3、6、12、24h细胞内和线粒体内活性氧明显降低(P<0.05,P<0.01),联合组细胞色素C细胞质/线粒体比值、线粒体内8-OHdG水平明显低于Aβ_(25~35)组[3.02±0.28 vs 5.73±0.45,P<0.05;(8.07±1.45)×10^(6)dG vs(16.07±2.29)×10^(6)dG,P<0.05]。结论虎杖苷可有效地保护皮质神经元免受Aβ_(25~35)诱导的损伤,至少部分作用是通过抑制线粒体氧化应激和改善线粒体功能实现。

淀粉脂质复合体的构建及其Pickering乳液性能表征

采用干法制备月桂酸、单月桂酸甘油酯、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯的淀粉脂质复合体,并通过复合率、溶解率、膨胀力、碘吸收曲线、红外光谱、拉曼光谱、乳化性等对淀粉脂质复合体的性能进行表征。结果表明:4种淀粉脂质复合体的复合率随着脂肪酸碳链的增长而增大;溶解率和膨胀力总体上随着温度的升高逐渐变大,但随着碳原子数的增加而减小。碘吸收特性、红外光谱和拉曼光谱结果表明,随着碳原子数的增多,V型结晶淀粉与脂肪酸复合的效果越好。此外,利用质量浓度为8 g/L的淀粉脂质复合体制备的乳液具有较稳定的乳化状态。试验表明,淀粉脂质复合体在Pickering乳液中具有较大的应用潜力。

稻米淀粉、蛋白质和脂质与蒸煮食味品质关系研究进展

蒸煮食味品质是消费者选择稻米的重要评价标准。淀粉、蛋白质和脂质作为稻米的三大主要物质成分,与其蒸煮食味品质关系密切。为进一步探索稻米蒸煮食味品质形成机制及水稻优质栽培技术,本文综述了稻米三大主要物质的组成与分布、合成代谢特点及其与蒸煮食味品质关系的研究进展,总结了干湿交替灌溉技术对稻米三大主要物质及其蒸煮食味品质的影响,并提出了研究存在三大主要物质互作与稻米蒸煮食味品质关系不清楚以及干湿交替灌溉对蒸煮食味品质的调控机制不明确等问题。建议今后基于淀粉、蛋白质和脂质累积与合成代谢的关系深入研究稻米蒸煮食味品质形成机制以及轻-干湿交替灌溉对稻米蒸煮食味品质的调优机制。

不同加工方式的淀粉质食品老化的影响因素和延缓老化方法的研究进展

淀粉质食品是人类生活中必不可少的一类食品,淀粉的老化影响淀粉质食品的品质。淀粉质食品种类繁多,淀粉种类不同并且加工方式也各不相同,因此老化的程度及影响因素也不尽相同。为了探究影响淀粉老化的因素及延缓老化的方法,综述了不同加工方式的淀粉质食品老化的影响因素和延缓老化的研究进展,对于开发新型抗老化食品有一定的参考意义。

胰高血糖素样肽-1受体激动剂改善高果糖饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏脂质沉积机制研究

背景 非酒精性脂肪性肝病发病率逐年升高但无特效药物,临床和基础研究显示降糖药物胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂能改善肝脏脂质沉积,但具体机制不明确。目的 探讨GLP-1受体激动剂改善高果糖诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏脂质沉积的机制。方法 2016年1—4月选取Wistar大鼠36只随机分为对照(ND)组和造模组,ND组给予普通饲料、造模组给予高果糖饲料喂养,8周后行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验证实造模组胰岛素抵抗形成,继续将造模组大鼠随机分为高果糖(HFD)亚组和高果糖+艾塞那肽(HFD+Ex)亚组,HFD+Ex亚组给予艾塞那肽注射液腹部皮下注射4周后,观察糖脂水平、胰岛素抵抗、肝脏脂质沉积、β-catenin表达和核转位以及脂质合成通路因子的变化。进一步用转染技术在HepG2细胞用小干扰RNA抑制β-catenin的表达观察细胞脂质沉积和脂质合成通路相关因子的变化,将HepG2细胞用25 mmol/L果糖和100 nmol/L exendin-4处理,未转染的细胞用作对照,全部细胞分为正常对照(Con)组、高果糖(HF)组、高果糖+exendin-4(HF+Ex4)组、高果糖+exendin-4+对照siRNA(HF+Ex4+Si-control)组、高果糖+exendin-4+β-catenin siRNA(HF+Ex4+Si-β-catenin)组。实验结束后收集大鼠体质量、肝指数、三酰甘油(TG)、肝脏TG、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、葡萄糖曲线下面积(AUC_(glu))、葡萄糖输注速率(GIR)、肝脏油红O染色,并测定大鼠肝脏及HepG2细胞固醇调节元素结合蛋白1(SREBP-1)和下游脂质合成的关键酶脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、硬脂酰CoA脱饱和酶1(SCD-1)以及β-catenin的蛋白表达水平。结果 (1)高果糖喂养8周后造模组大鼠体质量、肝指数、肝脏TG水平均高于ND组,GIR低于ND组(P<0.05);药物干预4周后HFD亚组大鼠体质量、肝指数、TG、FFA、ALT、FBG、FINS、AUC_(glu)高于ND组,GIR低于ND组(P<0.05);HFD+Ex亚组大鼠体质量、肝指数、FFA、ALT、FBG、FINS、AUC_(glu)低于HFD亚组,GIR高于HFD亚组(P<0.05)。(2)HFD亚组大鼠肝脏TG水平高于ND组(P<0.05),油红O染色肝细胞内可见大量红色脂滴聚集;HFD+Ex亚组大鼠肝脏TG水平低于HFD亚组(P<0.05),肝细胞内红色脂滴减少。(3)HFD亚组大鼠肝脏SREBP-1、FAS、SCD-1、ACC蛋白表达均高于ND组(P<0.05);HFD+Ex亚组大鼠肝脏SREBP-1、FAS、SCD-1、ACC蛋白表达均低于HFD亚组(P<0.05)。(4)HFD亚组大鼠肝脏β-catenin的总蛋白及核内蛋白表达低于ND组(P<0.05);HFD+Ex亚组大鼠肝脏β-catenin的总蛋白及核内蛋白表达高于HFD亚组(P<0.05)。(5)HF+Ex4组、HF+Ex4+Si-control组HepG2细胞β-catenin总蛋白、核内蛋白表达均高于HF组,TG水平低于HF组(P<0.05);HF+Ex4+Si-β-catenin组HepG2细胞β-catenin总蛋白、核内蛋白表达低于HF+Ex4组,TG水平高于HF+Ex4组(P<0.05)。(6)HF+Ex4组、HF+Ex4+Si-control组HepG2细胞SREBP-1、ACC、FAS、SCD-1蛋白表达均低于HF组(P<0.05);HF+Ex4+Si-β-catenin组HepG2细胞SREBP-1、ACC、FAS、SCD-1蛋白表达高于HF+Ex4组(P<0.05)。结论 GLP-1受体激动剂可能通过调控β-catenin表达改善胰岛素抵抗大鼠肝脏脂质沉积,是治疗非酒精性脂肪性肝病的潜在新药,β-catenin可能是药物治疗的重要靶标。

海藻糖抑制淀粉质多肽42构象转变的分子动力学模拟

应用分子动力学模拟方法研究了海藻糖抑制淀粉质多肽42(Aβ42)构象转变的分子机理.结果表明,海藻糖溶液浓度对Aβ42构象转变具有非常重要的影响.在水和低浓度海藻糖溶液(0.18mol·L-1)中,Aβ42可由初始的α-螺旋结构转变成β-折叠的二级结构;但海藻糖浓度为0.37mol·L-1时即可有效抑制Aβ42的构象转变.这是因为海藻糖利用其优先排阻作用使水分子在多肽周围0.2nm内富集,而其自身却在距离多肽0.4nm的位置附近团聚.另外,海藻糖还可通过降低多肽间的疏水相互作用,减少多肽分子内远距离的接触,有效抑制多肽的疏水塌缩和构象转变.上述分子模拟的结果对于进一步合理设计阿尔茨海默病的高效抑制剂具有非常重要的理论指导意义.

多肽抑制剂抑制淀粉质多肽42构象转换的分子动力学模拟和结合自由能计算

应用分子动力学模拟和结合自由能计算方法研究了多肽抑制剂KLVFF、VVIA和LPFFD抑制淀粉质多肽42(Aβ42)构象转换的分子机理.结果表明,三种多肽抑制剂均能够有效抑制Aβ42的二级结构由α-螺旋向β-折叠的构象转换.另外,多肽抑制剂降低了Aβ42分子内的疏水相互作用,减少了多肽分子内远距离的接触,有效抑制了Aβ42的疏水塌缩,从而起到稳定其初始构象的作用.这些抑制剂与Aβ42之间的疏水和静电相互作用(包括氢键)均有利于它们抑制Aβ42的构象转换.此外,抑制剂中的带电氨基酸残基可以增强其和Aβ42之间的静电相互作用(包括氢键),并降低抑制剂之间的聚集,从而大大增强对Aβ42构象转换的抑制能力.但脯氨酸的引入会破坏多肽的线性结构,从而大大降低其与Aβ42之间的作用力.上述分子模拟的结果揭示了多肽抑制剂KLVFF、VVIA和LPFFD抑制Aβ42构象转换的分子机理,对于进一步合理设计Aβ的高效短肽抑制剂具有非常重要的理论指导意义.

解淀粉芽孢杆菌Lx-11产脂肽类物质鉴定及表面活性素对水稻细菌性条斑病的防治作用

【目的】对解淀粉芽孢杆菌Lx-11产生的脂肽类物质进行分离鉴定和水稻条斑病防效测定。【方法】根据脂肽类抗菌物质合成相关基因序列对Lx-11进行PCR扩增检测,采用MALDI-TOF-MS对脂肽类物质进行分析。【结果】通过3对特异性引物对Lx-11菌株检测,扩增产物经克隆、测序和BLAST分析,表明解淀粉芽孢杆菌Lx-11基因组中含有sfp、fenB、ituA或bamA基因。质谱分析发现提取的粗提物中含有surfactin、bacillomycin D和fengycin等3种脂肽类抗生素。通过构建surfactin突变体菌株,平板和盆栽试验显示突变体菌株抑制条斑病菌能力显著降低。【结论】解淀粉芽孢杆菌Lx-11产生的surfactin类物质对条斑病菌具有较强的抑制作用,是抑制条斑病菌主要物质之一。

类风湿关节炎合并肺间质病变与类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体、涎液化糖链抗原-6相关性

目的探讨类风湿因子(RF),抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体,涎液化糖链抗原-6(KL-6)在类风湿关节炎(RA)合并肺间质病变(ILD)病人中的表达及与疾病的相关性。方法回顾性研究2018年5月至2021年5月大同市第五人民医院收治的125例RA病人,根据病人病情分为单纯RA组及RA合并ILD组,按照年龄、性别随机分层选择60例健康体检者为对照组。收集一般资料,比较三组研究对象的年龄、性别、C-反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、疾病活动性评分(DAS28)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、用力肺活量(FVC)、第一秒用力呼吸末容积(FEV_(1))、第一秒用力呼吸末容积与用力肺活量比值(FEV_(1)/FVC)等指标;采用酶联免疫吸附法检测血清中RF、抗CCp、KL6表达水平,Pearson法分析RF、抗CCp、KL6与相关指标表达的相关性,采用多重线性回归分析RA合并ILD病人RF、抗CCp、KL6表达水平的影响因素。利用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清RF、抗CCp、KL6水平对RA合并ILD病人的诊断价值。结果RA合并ILD组与单纯RA组病人血清中RF[(572.25±118.54)、(312.66±58.23)IU/mL)]、抗CCp[(255.44±74.56)、(152.36±50.28)IU/mL]、KL6[(619.12±205.68)、(363.70±51.87)U/mL]表达水平均高于健康对照组[(85.51±9.49)IU/mL,(63.83±11.85)IU/mL,(317.25±48.87)U/mL],且RA合并ILD组高于单纯RA组(P<0.05);RA合并ILD病人血清中RF、抗CCp表达呈正相关(r=0.45,P<0.05),RF与KL6表达呈正相关(r=0.44,P<0.05),抗CCp、KL6表达呈正相关(r=0.42,P<0.05);RA合并ILD病人血清中RF、抗CCp、KL6表达与CRP、ESR、DAS28、CRP、ESR、DAS28表达均呈正相关,与FVC、FEV_(1)表达均呈负相关(P<0.05)。三者联合检测RA合并ILD病人的AUC 95%CI为0.99(0.96,1.00),灵敏度和特异度分别为97.96%、96.05%。结论在RA合并ILD病人血清中RF、抗CCp、KL6表达水平明显升高,且联合检测三者对诊断RA合并ILD病人具有重要意义。

胰岛淀粉样多肽和P物质在不同发育阶段家兔直肠的表达及分布特点

目的观察不同发育阶段家兔直肠内胰岛淀粉样多肽(islet amyloid polypeptide,IAPP)、P物质(substance P,SP)的表达及分布特点。方法收集生后5、15、25、35、60 d及90 d家兔各10只。取直肠组织入Bouin液固定,梯度酒精脱水,常规石蜡包埋,制成连续切片。用免疫组织化学SABC法和图像分析法对IAPP、SP免疫反应阳性细胞的定位和表达进行观察。结果生后5 d家兔直肠内可见少量散在分布IAPP阳性细胞,多位于上皮;35 d IAPP阳性细胞的数量呈明显上升趋势,至60 d达到最多(P<0.05),90 d时减少(P<0.05),主要分布于固有层。图像分析测得IAPP阳性细胞的平均灰度值随家兔的生长发育逐渐降低,60 d达最低(P<0.05)。SP阳性细胞于生后15 d始出现,35 d后细胞数量明显增多(P<0.05),60 d达最高(P<0.05)。其平均灰度值也于35 d开始下降(P<0.05),于60 d达最低水平(P<0.05)。结论 IAPP、SP在直肠的表达随家兔的生长发育而逐渐变化,推测两者参与调节生后发育期间家兔直肠消化功能的成熟过程。

淀粉质原料在普鲁兰多糖生物合成中的作用及生理机制

为了考察不同淀粉质原料对出芽短梗霉生物合成普鲁兰多糖的影响,本文分别选用来源于木薯、玉米、马铃薯、红薯和小麦等作物的淀粉作为碳源发酵生产普鲁兰多糖。结果发现,木薯淀粉有利于普鲁兰多糖的生物合成,最高产量达到23.96 g/L;红薯淀粉则不利于普鲁兰多糖的合成,显著(P<0.05)降低了普鲁兰多糖的产量和分子量。进一步地,对普鲁兰多糖分批发酵动力学参数和生理学指标进行分析比较,发现木薯淀粉提高了普鲁兰多糖合成关键酶活性和胞内前体物质尿苷二磷酸葡萄糖的含量,进而提高了普鲁兰多糖的合成能力和产量;而红薯淀粉则提高了普鲁兰多糖降解酶活性,显著(P<0.05)降低了普鲁兰多糖的分子量。对普鲁兰多糖分批发酵碳源成本进行估算,发现利用木薯淀粉合成普鲁兰多糖的碳源成本只有葡萄糖对照组的56.6%。该研究结果为普鲁兰多糖的廉价高效生产提供了可行的技术参考。

双侧丘脑注射β淀粉样肽42寡聚体是构建阿尔茨海默病小鼠模型的新方法

目的:通过双侧丘脑注射β-淀粉样肽42(amyloidβ-peptides 42,Aβ_(42))寡聚体构建阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)小鼠动物模型。方法:将120只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、溶剂组和Aβ组,每组40只。Aβ组利用立体定位技术将Aβ_(42)寡聚体注射至双侧丘脑。术后3、7、14和28 d分别利用Morris水迷宫实验评价动物神经功能;免疫组化和Western blot检测小鼠双侧丘脑神经元核抗原(neuronal nuclear antigen,NeuN)、胶质细胞原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、离子钙结合适配器分子1(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1)和磷酸化tau蛋白[p-tau(Ser396)]水平。结果:与假手术组和溶剂组相比,Aβ组小鼠平均逃避潜伏期显著延长,穿越原平台次数和在原平台所在象限游泳时间显著减少(P<0.05),Aβ组小鼠GFAP、Iba1和p-tau(Ser396)水平显著升高,而NeuN表达显著减少(P<0.05)。结论:Aβ_(42)寡聚体小鼠双侧丘脑注射法是构建AD动物模型的新方法。

超滤亲和结合液相色谱-质谱联用和分子对接技术筛选茶叶中α-葡萄糖苷酶抑制肽

目的:筛选茶叶中具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的肽段。方法:采用响应面法优化茶叶酶解产物制备工艺,超滤亲和法分离与α-葡萄糖苷酶结合的茶多肽,液相色谱-质谱联用对分离肽段进行序列测定,生物信息学方法进行虚拟筛选。结果:茶叶酶解产物最佳制备工艺为碱性蛋白酶酶解温度50℃,酶解时间3 h,液料比10:1(mL/g),对α-葡萄糖苷酶抑制率为57.29%,从中鉴定出624条肽段,筛选出一条四肽LIGF具有α-葡萄糖苷酶抑制活性,在5 mg/mL的浓度下对α-葡萄糖苷酶的最大抑制率为88.13%,IC_(50)值为1.22 mg/mL。分子对接显示,LIGF与α-葡萄糖苷酶能形成5个氢键,结合能为−3.51 kJ,具有高的亲和力、稳定性以及与α-葡萄糖苷酶结合的能力。结论:LIGF具有成为Ⅱ型糖尿病治疗药物的潜在价值。

寡聚态β-淀粉样肽_(1～42)可通过胶质-炎症反应损伤神经元

目的观察寡聚态β-淀粉样肽1～42(Oligo-Aβ1～42)诱导的小胶质细胞条件培养液对Neuro-2A神经元细胞的影响,探讨炎症介质在胶质介导的神经元损伤中的作用。方法以Oligo-Aβ1～42诱导BV-2细胞,制备小胶质细胞条件培养液,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定Neuro-2A神经细胞的活力,AO-EB染色荧光显微镜观察计数细胞凋亡和坏死率;酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定小胶质细胞培养上清中的肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)及前列腺素E2(PGE2)水平;Griess法检测上清NO水平;免疫印迹法测定小胶质细胞胞质环氧合酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达水平。结果Oligo-Aβ1～42诱导的小胶质细胞条件培养液(Aβ-CM)明显引起Neuro-2A神经细胞损伤,MTT法显示神经元活力随Aβ诱导剂量的增加而逐渐下降(P<0.01),并且浓度为1.0μmol/L和5.0μmol/L的Aβ-CM组比同浓度Aβ单纯组神经细胞的存活率更低,分别为(53.75±3.95)和(34.61±2.72)(Aβ-CM组与Aβ单纯组相比P<0.05,P<0.01);联合作用组(Aβ-CM+Aβ)神经细胞存活率下降更明显,两因素方差分析显示,Aβ诱导的小胶质细胞条件培养液与单纯Aβ(1.0μmol/L)有协同作用[F(3,39)=53.16,P<0.001]。AO-EB荧光观察计数显示,低浓度(0.2μmol/L)Oligo-Aβ1～42诱导的小胶质细胞条件培养液可引起神经细胞发生凋亡性损伤,较高浓度(1.0～5.0μmol/L)Oligo-Aβ1～42诱导不仅引起神经细胞凋亡,还引起细胞发生坏死性改变。进一步研究显示,低浓度(0.2～5.0μmol/L)的Oligo-Aβ1～42明显增加小胶质细胞培养上清中TNF-α、PGE2、NO的产量及胞质COX-2和iNOS蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),呈现一定的量效关系。结论低浓度Oligo-Aβ1～42可通过胶质-炎症反应加剧神经元损伤,其作用可能与Oligo-Aβ1～42诱导小胶质细胞产生炎症介质及胞质内COX-2、iNOS蛋白表达水平增高有关。

腹壁脂肪组织、唇腺及骨髓3部位活检联合质谱分析技术诊断轻链型淀粉样变性的价值

目的:分析腹壁脂肪组织、唇腺及骨髓3部位联合活检在诊断轻链型淀粉样变性中的应用,探讨3种微创活检方法在不同器官累及患者中的应用价值及3部位联合活检对提高诊断阳性率的意义。方法:回顾性分析我院2017年01月至2022年09月期间诊断的61例具有梅奥分期数据的轻链型淀粉样变患者的临床资料,分析3部位微创活检的阳性率,器官累及情况与不同部位活检的结果,2018年01月后我中心对于任1部位刚果红阳性的病例加做激光显微切割联合质谱(LMD/MS)分析。结果:联合应用腹壁脂肪活检、唇腺活检及骨髓活检的40例患者,至少1个部位阳性的为36例(90%),对刚果红阳性部位加做LMD/MS阳性率为100%。结论:3部位微创活检可以明显提高轻链型淀粉样变性的确诊率,LMD/MS技术最终对淀粉样变性的类型起定性作用;建议临床对怀疑轻链型淀粉样变性的患者常规进行腹壁皮下脂肪组织、唇腺、骨髓3部位活检并通过LMD/MS进一步印证。