应用功能分类基因芯片筛选卵巢癌淋巴结定向高转移细胞系中差异性表达基因

目的:在裸鼠体内建立以人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞系SKOV3具有淋巴结定向高转移亚克隆第二代SKOV3-pm2、第三代SKOV3-pm3细胞系,应用基因芯片技术比较这3种具有不同淋巴结定向转移能力的细胞亚系中基因表达谱的差异,寻找卵巢癌侵袭转移相关基因。方法:采用Trizol一步法抽提SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm33种细胞总RNA;取等量RNA逆转录合成cDNA用Ampolabeling-LPR(linear polymerase re-action,线性聚合酶反应)法标记的cDNA链做探针,混合后与功能分类基因芯片[OligoTumor Metastasis Microarray Catalog No.OHS-028(人)]杂交,计算机分析后比较3种细胞中差异性表达基因,并应用RT-PCR技术对其中3个表达差异明显的基因进行验证。结果:共筛选出表达差异性基因60个,其中表达上调基因47个(ratio>3),有21个基因在SKOV3-pm2、SKOV3-pm3中共同表达上调;表达下调基因13个(ratio<0.5),有1个基因在SKOV3-pm2、SKOV3-pm3细胞中共同表达下调。结论:基因表达芯片检测与肿瘤淋巴体外转移模型相结合,为肿瘤转移研究提供了新方法、新思路。

淋巴管内皮细胞微环境对卵巢癌淋巴结定向高转移细胞上皮-间质转化的影响

目的通过人卵巢癌淋巴结定向高转移的细胞株(SKOV3-PM4)与人淋巴管内皮细胞株(HLEC)的条件培养和共培养,探讨HLEC微环境对SKOV3-PM4的运动迁移能力以及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法采用transwell小室体外侵袭法,观察经HLEC的条件培养后SKOV3-PM4的侵袭、迁移能力的改变。SKOV3-PM4经HLEC的条件培养和共培养后的爬片细胞,采用免疫组化法检测转化生长因子(TGF-β1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达的变化。结果经HLEC培养基的条件培养后SKOV3-PM4细胞的侵袭率为(53±11)%,单独培养的SKOV3-PM4细胞的侵袭率为(30±5)%(P<0.05);条件培养后SKOV3-PM4细胞的迁移率为(48±5)%,单独培养的SKOV3-PM4细胞的迁移率为(34±2)%(P<0.05)。SKOV3-PM4细胞经条件培养和共培养后TGF-β1和vimentin表达上调(P均<0.05),E-cadherin表达下调(P<0.05)。结论淋巴管内皮细胞微环境可促进卵巢癌淋巴结定向高转移细胞间质化的转变,增强卵巢癌细胞的侵袭、迁移能力。

SFRP1在卵巢癌淋巴结定向高转移细胞中的表达及意义

目的进一步探讨分泌型卷曲相关蛋白(SFRP1)在卵巢癌发生、发展中的作用。方法采用荧光定量PCR法定量分析SFRP1 mRNA在不同淋巴结转移能力卵巢癌Skov3细胞亚系中表达水平。结果SFRP1 mRNA在原代Skov3细胞与转移能力依次增高的Skov3-pm2、Skov3-pm3、Skov3-pm4细胞系中的表达呈下降趋势(P<0.05)。结论SFRP1在高淋巴结转移能力的卵巢癌细胞中表达减少,与卵巢癌发生、发展密切相关,其可作为监测卵巢癌的分子靶标。

CCR7在恶性肿瘤细胞侵袭及淋巴定向转移中的作用

CCR7属于CC类趋化因子受体,曾用名EBI-1、BLR-2和CMKBR2,含378个氨基酸残基,基因定位于17q12～q21.2。与其结合的CC类趋化因子配体为CCL21(也称为次级淋巴组织趋化因子,secondary lymphoid-tissue chemokine,SCL)

integrin α6和MKK4基因在卵巢癌不同淋巴结转移能力细胞系中的表达及其意义

目的:探讨integrin α6、MKK4基因在卵巢癌不同淋巴结转移能力细胞亚系的表达及其意义。方法:采用TRIZOL一步法抽提卵巢癌不同淋巴结转移能力细胞的总RNA,逆转录合成CDNA,应用RT-PCR技术检测integrin α6、MKK4基因在不同细胞亚系表达的灰度值,应用实时荧光定量PCR技术对integrin α6、MKK4基因在不同细胞亚系的表达进行定量分析。结果:integrin α6基因在SKOV3、SKOV3-PM2、SKOV3-PM3细胞系中的表达呈上升趋势,但在SKOV3-PM4细胞系中的表达低于SKOV3细胞系。MKK4基因表达量在SKOV3、SKOV3-PM2、SKOV3-PM3、SKOV3-PM4细胞系呈逐渐下降趋势。结论:integrin α6表达上调和MKK4表达下调与卵巢癌的淋巴结定向高转移过程密切相关,出现integrin α6在SKOV3-PM4细胞系表达的下调的现象,可能存在整合素各亚单位之间的相互调控。

卵巢癌细胞与卵巢癌淋巴定向高转移细胞分泌蛋白差异初筛

目的:分析卵巢癌细胞株(SKOV3)与卵巢癌淋巴结定向高转移细胞株(SKOV3-PM4)分泌蛋白的差异,寻找与卵巢癌淋巴定向转移密切相关的潜在诊断分子标志。方法:分别收集SKOV3与SKOV3-PM4培养上清,利用双向凝胶电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI_T0F-MS/MS)技术筛选及鉴定差异表达的蛋白点,对其进行生物学分析后采用蛋白质印迹法验证挑选目标蛋白在细胞分泌蛋白中的表达情况。结果:二维凝胶电泳显示,SK-OV3细胞分泌蛋白质点数约为569±156,SKOV3-PM4细胞分泌蛋白质点数约为598±175。选取差异较大的7个差异蛋白点进行MS+MS/MS质谱鉴定,分别为乙二醛酶1(GLO1)、翻译后调节肿瘤蛋白(TPTC)、二磷酸核苷激酶B(ND-PK-B)、膜联蛋白(ANXA1)、热休克蛋白27(HSP)、过氧化物氧化还原(PRDX1)和磷脂酰乙醇胺结合蛋白Ⅰ(PEBP-Ⅰ)。挑选NDPK-B、ANXA1和HSP蛋白经蛋白质印迹法验证发现,SKOV3-PM4细胞中ANXA1和HSP27表达高于SKOV3细胞,而NDPK-B表达低于SKOV3细胞。与质谱分析的结果基本一致。结论:在卵巢癌细胞与卵巢癌淋巴结定向高转移细胞之间分泌蛋白存在很大的差异,其中已被鉴定的ANXA1和HSP27与卵巢癌淋巴结转移密切相关,有望成为诊断或预测卵巢癌淋巴结转移患者血清检测的标志。

射波刀治疗腹膜后淋巴结转移癌81例

目的探讨射波刀治疗腹膜后淋巴结转移癌的疗效和不良反应。方法81例恶性肿瘤术后出现腹膜后淋巴结转移的患者，其中33例伴腹痛或腰背部疼痛，7例伴一侧’肾积水、输尿管扩张，8例伴单侧或双侧下肢肿胀。采用射波刀立体定向精确放疗，DT33～45Gy分3．6次．观察患者症状的改善情况、肿瘤客观反应率和放射不良反应。结果所有患者治疗后4周，疼痛、下肢肿胀症状完全缓解，肾积水完全消失；每隔2～3个月行增强CT或MRI复查1次，随访至6个月时，完全缓解率为77％（62／81），部分缓解率为21％（17／81），稳定率为3％（2／81），无进展病例，有效率98％。不良反应主要为肠道损伤，1级16％（13／81），2级9％（7／81）。多因素分析显示肿瘤完全缓解率与原发肿瘤类型、肿瘤大小无关（P〉0．05），而与肿瘤和肠管间距离〉0．5cm、肿瘤生物等效剂量（α/β=10）〉70Gy相关（P〈0．01）；不良反应发生率与肿瘤最大径〉5cm、肿瘤与肠管间距离〈0．5cm相关（P〈0．01）。结论射波刀治疗恶性肿瘤术后腹膜后淋巴结转移疗效显著．不良反应轻微。