CD3单抗联合EBV建立人B淋巴母细胞株的方法研究

目的采用国产的CD3单克隆抗体代替环胞菌素A,建立人淋巴母细胞株(LCL)。方法采静脉血用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,分别应用CD3单克隆抗体以及环胞菌素A作为免疫抑制剂,对比LCL建株情况。结果CD3单抗组经过4周的培养CD3+细胞由培养前的59.65%减低到52.78%,而环胞菌素A组升高至61.15%(P>0.05);对CD19+细胞的促进作用由培养前的5.39%提高到12.70%,而环胞菌素A为8.47%,两者的差异有显著性意义(P<0.01)。结论CD3单克隆抗体与环胞菌素A同样能够促进B淋巴样细胞株生成,防止体外B细胞的退化。

具染色体不稳定特点的B淋巴母细胞株BCHI-1的建立

经微量全血EB病毒转化法建立了一具染色体不稳定特点的B淋巴母细胞株(BCHI-1),该细胞株呈悬浮生长,核型为2n=46,XX。细胞群体倍增时间为52h。该细胞株表现为姐妹染色单体交换增高(16.88个/细胞),染色体畸变为4.5％,微核率25‰。该细胞株自发和丝裂霉素C诱发的染色体不稳性与正常的细胞株JMS95031相比均具有显著性差异(P<0.01)。

带有ring(13)的B淋巴母细胞株JMSR13的建立

经微量全血EB病毒转化法建立了-Ring（13）染色体B淋巴母细胞株（JMSR13），该细胞呈悬浮生长，核型为2n=45，XY／46，XYring（13）。细胞群体倍增时间为54hr／代。Ring（13）染色体在复制时的交换次数是构成ring（13）染色体倍性改变的原因，Ring（13）衍生染色体的随机断裂和其在有丝分裂中的不分离是其产生遗传学效应的主要根源。

福建省畲族人群永久性淋巴母细胞株的建立

目的建立畲族的永久性淋巴母细胞株以探讨基因组结构及其健康素质以及遗传结构，同时为畲族纯系基因组的保存提供一种行之有效的手段。方法按照经典的建株方法，以携带ＥＢ病毒的Ｂ９５－８细胞转化畲族青少年的外周血淋巴细胞，其中男性１５例，女性１５例，平均年龄１５．５１±１．０７岁。结果经培养筛选，目前能连续传代的培养物有１２份。染色体观察，未发现核型在数目和结构上有明显变化。

建自黑皮病患者的B淋巴母细胞株

为研究黑皮病患者细胞的生物学特性，我们用微量全血EB病毒转化法建立了黑皮病患者的B淋巴母细胞株（JMSSHH），并进行了核型分析及细胞生物学性状鉴定．该细胞呈悬浮生长，细胞群体倍增时间为46．7小时／代．核型为46XX。自发的姐妹染色单体互换（SCE）值为14．10±0．90，微核率24．60‰；丝裂霉素C（MMC）诱发的SCE值为23．60±1．80，微核率为41．90％，均明显高于对照细胞系（P＜0．01）．这些结果提示，该患者的临床症状可能与体细胞的DNA损伤修复功能缺陷有关．

建自习惯流产夫妇的高SCE B淋巴母细胞株生物学特征的研究

用EB病毒转化微量全血法建立了一对具高SCE特征的习惯流产夫妇的B淋巴母细胞株：JMSW-1，JMSW-2。细胞株平均倍增时间分别为45．5小时／代；48小时／代。常规染色体核型分析为正常核型且均保持高SCE特征。JMSW－1自发SCE为14．00次／每细胞，JMSW－2自发SCE为13．28次／每细胞。微核率分别为24．5‰；，20．5‰，加0．01μg／ml丝裂霉素C（MMC）处理，诱发SCE及微核率与正常细胞株相比均显著升高。JMSW－1诱发SCE为23．58次／每细胞，微核率42‰；JMSW-2诱发SCE为22．72次／每细胞，微核率39．5％；，夫妇双方自发、诱发SCE均高于正常对照组（P＜0．01）。

B淋巴母细胞株95041的建立及生物学特性的研究

本人用微量全血 EB 病毒转化法建立了杜纳综合征患者的 B 淋巴母细胞株95041。该细胞呈悬浮生长,核型为45,XO,细胞群体倍增时间为62h/代。该细胞株表现为姐妹染色单体交换率(6.27次/细胞)及丝裂霉素 C 诱发姐妹染色单位交换率(13.56次/细胞)微核率(8‰,11.2‰)与正常细胞 JMS95031相比无显著性差异(P>0.05)。

血小板CD36缺失个体永生化淋巴母细胞株的建立及验证

目的探讨血小板CD36缺失个体永生化淋巴母细胞株的构建及验证方法。方法选择2012年1月至2018年1月经相关检测确定为血小板CD36缺失的8例个体为研究对象。其中,6例为于南宁中心血站参与献血的无偿献血者,1例为广西923医院收治的血小板输注无效(PTR)患者,1例为广西壮族自治区妇幼保健院收治的胎儿/新生儿同种免疫血小板减少症(FNAIT)患儿母亲。全部受试者年龄为15~66岁,研究前期经流式细胞术与血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定试验(MAIPA)及CD36基因分型等技术的检测,鉴定为血小板CD36缺失者,其中1例为CD36基因538T>C突变杂合子,3例为380C>T突变杂合子,1例为329-330del突变纯合子,3例为329-330del突变杂合子。采集受试者肝素抗凝血5 mL,并且分离淋巴细胞。采用EB病毒(EBV)与环孢素处理血小板CD36缺失个体的外周血淋巴细胞,获得永生化淋巴母细胞株,稳定传代后冻存,并且对这些细胞株进行复苏活性与支原体检测,同时进行CD36基因的测序验证。本研究遵循的程序符合2013年修订版《世界医学会赫尔辛基宣言》的要求,征得受试者的知情同意,并与之签署知情同意书。结果①受试者外周血淋巴细胞经EBV与环孢素处理后,继续培养7 d后,细胞母细胞化,细胞边缘多刺,部分细胞凝集呈团状。持续更换全培养液约1个月,细胞大量增殖,生长旺盛,肉眼可见较多克隆球形成,成功获得CD36缺失永生化淋巴母细胞株。② CD36缺失永生化淋巴母细胞株传代20代后,冻存于液氮;全部CD36缺失永生化淋巴母细胞株均复苏成功,倒置相差显微镜下观察细胞株生长状态良好。③ CD36缺失永生化淋巴母细胞株支原体检测结果示阴性。④对CD36缺失永生化淋巴母细胞株DNA进行PCR扩增测序结果显示,其与建株前血小板CD36缺失个体的CD36基因型完全一致,没有发生基因突变。本研究建立的CD36缺失永生化淋巴母细胞株基因类型包括CD36基因538T>C突变杂合子(1例),380C>T突变杂合子(3例),329-330del突变纯合子(1例),329-330del突变杂合子(3例)。结论CD36缺失永生化淋巴母细胞株传代稳定,血小板CD36缺失个体的基因能够稳定地被保存,并且为CD36基因相关的血小板免疫学等方面研究提供永久性实验材料。

取自麻风患者的抗酚糖脂—1的人单克隆抗体及特异性抗基因型的制取

用GM4672淋巴母细胞株与麻风患者外周血单核细胞融合的杂交瘤产生人单克隆抗体（MAb）,用ELISA对杂交瘤的上清液作免疫球蛋白分类及与麻风菌、酚糖脂—1（PG—1）、单链DNA结合反应,选择了两株细胞的抗体PR4和TH3,进行了特性的研究。此两株抗体都是Igm型Kappa轻链。PR4和TH3都能结合麻风菌、PG—1和单链DNA;PR4还能结合鸟分枝菌和堪萨斯菌;TH3结合堪萨斯菌。酶联免疫抑制试验（酶抑）证实这两种抗体并非结合PG—1终端的双糖分子,