Epstein-Barr病毒转化的B淋巴母细胞样细胞系的建立

目的 通过建立EB病毒转化的B淋巴母细胞样细胞系 (LCLs) ,以揭示机体的免疫功能状态 ,为进一步建立外周血T细胞克隆奠定基础。方法 常规制备EB病毒上清 ,分别感染Graves病、糖尿病、正常人三个群体外周血B淋巴细胞。结果 成功建立了免疫功能亢进、免疫功能低下和免疫功能正常三种功能状态下的B淋巴母细胞样细胞系 (LCLs)。结论 从B淋巴细胞转化为B淋巴母细胞样细胞系 (LCLs)

血管免疫母细胞淋巴结病样T细胞淋巴瘤1例动态临床病理观察

目的 探讨血管免疫母细胞淋巴结病样T细胞淋巴瘤 (AILD TCL)的临床病理学特点和鉴别诊断要点。方法 对 1例AILD TCL病程的不同时期进行临床病理学观察与免疫组织化学检测。结果 病变早期淋巴结表现为多形性细胞 (中、小淋巴细胞、嗜酸性细胞、浆细胞、免疫母细胞及组织细胞 )浸润伴分支状毛细血管后小静脉的明显增生而导致正常结构的部分破坏 ,细胞无明显异型。病变中期出现散在分布的胞质透明、紧密排列的免疫母细胞簇 ,细胞中度异型。病变后期 ,免疫母细胞成簇或弥漫分布 ,细胞异型性大 ,核分裂象易见。免疫组化标记示淋巴结内弥漫性浸润的细胞胞质表达CD3、CD4 5RO、CD4、CD8,增生的滤泡树突细胞表达CD2 1,CD2 3阳性的中心细胞稀少。结论 AILD TCL是一种发展快、预后差的周围T细胞淋巴瘤 。

儿童原发性免疫缺陷病患者EBV转化的B淋巴母细胞系的建立及应用

目的:建立原发性免疫缺陷病人外周血永生化B细胞系,保存原发性免疫缺陷病人特有的基因组资源,为进一步研究原发性免疫缺陷病提供丰富实验材料。方法:采用密度梯度离心法分离PBMC,加入环孢菌素A、EB病毒共培养以转化外周血淋巴细胞。结果:成功建立14例原发性免疫缺陷病人外周血永生化B细胞系,建株成功率100%;对已建立的永生细胞株冻存和复苏,成功率为100%;转化前后制备细胞染色体和G显带核型分析无明显改变。结论:经EB病毒成功转化外周血B淋巴细胞为永生细胞株,为进一步开展原发性免疫缺陷病的基础研究提供了资料。

简单可行的EB病毒转化B淋巴细胞方法的探讨

介绍两种简便可行的EB病毒转化B淋巴细胞的方法，即微量全血法和冻存全血法。与环孢霉素A法相比较，这两种方法具有操作简单，所需血样少，无需环孢霉素A等优点。这些特点尤其是在进行大量样本转化时显得更为突出。用微量全血法和冻存全血法共进行79例转化试验，转化成功率分别为46％与85％。对于影响这两种EB病毒转化结果的因素也进行了讨论。

知母治疗阿尔茨海默病网络药理学研究及实验验证

目的:探索知母治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法:通过网络药理学筛选知母治疗AD的活性成分、作用靶点,蛋白质-蛋白质相互作用网络构建及核心靶点分析,并进行基因本体(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。提取外周血淋巴细胞并构建淋巴母细胞样细胞系(LCL),建立LCL-SKNMC体外细胞模型。采用MTT法和细胞计数试剂盒8(CCK-8)法分别检测SKNMC细胞和LCL的活性,7´-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针检测共培养模型中生成的活性氧,免疫荧光染色检测共培养模型中生成的β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42)),蛋白质印迹法检测共培养模型中相关蛋白的表达。分别观察氧化应激、正常状态及热应激状态下N2线虫的寿命,DCFH-DA探针检测N2线虫生成的活性氧,瘫痪实验研究CL4176线虫的瘫痪时间,硫黄素S染色检测CL4176线虫咽部沉积的Aβ。结果:知母具有15个潜在活性成分及103个药物-疾病靶点,可能通过白蛋白、Akt1、肿瘤坏死因子、表皮生长因子受体、血管内皮生长因子A、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、淀粉样前体蛋白(APP)等相关靶点发挥抗AD作用。知母药理作用主要涉及阿尔茨海默病、内分泌抵抗、胰岛素抵抗等生物过程,以及神经活性配体-受体相互作用、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-Akt信号通路、钙信号通路、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、神经营养因子信号通路等通路。体外实验显示,知母可减少LCL-SKNMC中活性氧生成和Aβ_(1-42)的产生(均P<0.01),抑制β-分泌酶1、APP、Aβ_(1-42)蛋白的表达(均P<0.05),上调PI3K、Akt、GSK3β蛋白的磷酸化水平(均P<0.05)。体内研究进一步证实,知母可延长应激状态及正常情况下线虫的寿命,减轻活性氧积累及Aβ沉积毒性。结论:知母可减少AD中Aβ的生成,抑制其诱导的氧化应激作用,这些作用可能是通过调控PI3K/Akt/GSK-3β通路实现的。

Epstein-Barr病毒(EBV)及其介导的细胞永生化

Epstein- Barr病毒 (EBV)因其与众多肿瘤的相关性以及其在体外能使 B淋巴细胞永生化形成淋巴母细胞样细胞系 (L CL s)的特性而成为近年来细胞永生化研究的热点之一。研究表明 ,EBV主要是通过其潜伏蛋白激活细胞因子与其受体相互作用的途径而使细胞永生化的 ,但是病毒蛋白的具体作用机制尚无定论。本文综述了 EBV生物学特性方面近年来的研究成果 ,并以 L CL s为切入点初步探讨了 EBV介导的细胞永生化。

HFRS患者汉滩病毒特异性CTL克隆靶细胞的建立及意义

目的 :建立肾综合征出血热 (HFRS)患者汉滩病毒(HTNV)核衣壳蛋白 (NP)特异性CTL克隆的靶细胞 .方法 :采用Ficoll密度梯度离心法分离HFRS患者外周血单个核细胞(PBMC) ,并用EB病毒 (EBV)转化B淋巴细胞 ,建立B淋巴母细胞样细胞系 (B LCL) .然后 ,用含HTNVS基因的重组痘苗病毒 (rVV)转染B LCL ,间接免疫荧光 (IFA)检测NP的表达 ,并用HTNV特异性T细胞克隆对转染rVV的B LCL进行细胞毒杀伤实验 .结果 :B淋巴细胞经EBV感染 4wk左右 ,可形成B LCL .HTNV S基因在B LCL中能有效表达NP ,且能被HTNV特异性T细胞克隆识别 .结论 :成功建立了HFRS患者永生化B LCL .含HTNVS的基因重组痘苗病毒转染的B

肺癌细胞株中EPS8表达下降对顺铂化疗敏感性的影响

目的探究肺癌细胞株中表皮生长因子受体通路底物8(EPS8)表达下降对顺铂化疗敏感性的影响。方法脂质体转染法将EPS8沉默后并通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测EPS8在各细胞系的沉默效率。采用Caspase-3/7细胞凋亡实验检测,5μmol顺铂对淋巴母细胞样细胞系(LCLs)和A549肺癌细胞凋亡的影响。Alamar Blue细胞生长抑制实验中采用0.01μmol/L光神霉素A作为EPS8抑制剂单用及联用不同浓度顺铂,Alamar Blue细胞生长抑制实验检测其对癌和非癌细胞系生长抑制的影响。结果与对照组比较,LCLs细胞系中EPS8的沉默导致顺铂干预时细胞存活率升高7.9%,凋亡率下降8.7%。与此相反,顺铂干预导致肺癌细胞存活率下降20.6%。光神霉素A在LCLs细胞系中能够降低EPS8的表达,并与对照组比较,非癌细胞系LCLs在顺铂干预时具有更低Caspase-3/7活性,凋亡率降低。在5种非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系中,光神霉素A同样能够导致EPS8表达下降。与LCLs细胞系比较,光神霉素A的干预能够使4种NSCLC细胞和膀胱癌细胞HTB9对顺铂的敏感性增加(P<0.05),但NSCLC中存在EGFR突变的H1975细胞对顺铂的敏感性并未出现统计学改变(P>0.05)。结论通过核糖核酸(RNA)干扰或者光神霉素A将EPS8表达抑制后,肿瘤细胞对顺铂的敏感性升高,而正常细胞LCLs对其敏感性却出现下降。对EPS8分子机制的进一步研究有望其成为抗肿瘤治疗的新靶点。

脊髓小脑性共济失调遗传种质库的建立

目的:建立脊髓小脑性共济失调(SCA)的遗传种质库。方法:收集临床诊断为脊髓小脑性共济失调的36个家系43例患者、38例散发患者血样标本,采用微量外周新鲜血EB病毒(EBV)转化法转化淋巴细胞成为淋巴母细胞样细胞系(LCLs),后者可以无限次分裂。结果:所有81份血样标本均被成功转化,淋巴母细胞样细胞可以常规冻存并复苏、传代。结论:建立SCA的遗传种质库有重要意义,EB病毒转化外周血淋巴细胞简单有效,可以永久保存珍贵稀有家系的遗传物质。