贵州布依族淋巴母细胞永生细胞株的研究

目的:建立和保存贵州布依族B淋巴母细胞株。方法:采用EB病毒转化外周血B淋巴细胞,同时加环孢霉素A法。结果:建立了7株永生细胞,供血者身体健康且三代均为布依族。结论:建立永生细胞株可长期保存布依族独特的基因组,为民族起源、演进及遗传多样性等研究提供细胞资源。

宁夏回族永生B淋巴细胞株的建立及保存

目的永久地保存现有的回族遗传资源。方法以EB病毒(Epstein-barr virus,EBV)转化同时加入环孢霉素A的方法建立永生细胞。结果成功建立了10株宁夏回族永生B淋巴细胞株。结论该永生细胞地建立为回族遗传资源的永久保存以及今后在细胞和分子水平上深入开展回族遗传病的研究奠定了基础。

福建省畲族人群永久性淋巴母细胞株的建立

目的建立畲族的永久性淋巴母细胞株以探讨基因组结构及其健康素质以及遗传结构，同时为畲族纯系基因组的保存提供一种行之有效的手段。方法按照经典的建株方法，以携带ＥＢ病毒的Ｂ９５－８细胞转化畲族青少年的外周血淋巴细胞，其中男性１５例，女性１５例，平均年龄１５．５１±１．０７岁。结果经培养筛选，目前能连续传代的培养物有１２份。染色体观察，未发现核型在数目和结构上有明显变化。

人急性淋巴母细胞白血病细胞株Molt-4遗传学特性的研究

本研究探讨人急性淋巴母细胞白血病细胞株Molt-4的遗传学特性,评价其在Flow-FISH方法检测细胞端粒长度中的应用价值。悬浮培养Molt-4细胞并进行规律传代,选取8代不同代数、处于对数生长期的Molt-4细胞进行研究。应用细胞计数法描绘细胞生长曲线并计算细胞倍增时间,流式细胞术检测细胞DNA倍体指数,常规G显带进行染色体核型分析,Southern blot检测细胞端粒长度。结果显示:Molt-4细胞的倍增时间为(1.315±0.062)d、DNA倍体指数为(2.085±0.0093)、端粒长度为(32.05±5.27)kb,不同代数之间无显著性差异(P值分别为0.931、0.888和0.935)。染色体核型分析结果显示,Molt-4细胞染色体数量为91-99条,多数为超四倍体,并且具有稳定的、特征性染色体结构异常。结论:Molt-4细胞具有稳定的遗传特性和较长的端粒长度,可作为Flow-FISH的内对照细胞。

中国白裤瑶永生细胞库的建立

目的 建立和保存白裤瑶B淋巴母细胞永生细胞株。方法 采用EB病毒转化外周血B淋巴细胞 ,同时加环孢菌素A法。结果 成功地建立了含有 4 4株永生细胞的白裤瑶永生细胞库。供血者身体健康 ,三代均为白裤瑶。结论 建立永生细胞库 ,可永久保存白裤瑶特有的基因组 ,为民族起源、演进和遗传多样性的研究提供细胞资源。

简单可行的EB病毒转化B淋巴细胞方法的探讨

介绍两种简便可行的EB病毒转化B淋巴细胞的方法，即微量全血法和冻存全血法。与环孢霉素A法相比较，这两种方法具有操作简单，所需血样少，无需环孢霉素A等优点。这些特点尤其是在进行大量样本转化时显得更为突出。用微量全血法和冻存全血法共进行79例转化试验，转化成功率分别为46％与85％。对于影响这两种EB病毒转化结果的因素也进行了讨论。

血小板CD36缺失个体永生化淋巴母细胞株的建立及验证

目的探讨血小板CD36缺失个体永生化淋巴母细胞株的构建及验证方法。方法选择2012年1月至2018年1月经相关检测确定为血小板CD36缺失的8例个体为研究对象。其中,6例为于南宁中心血站参与献血的无偿献血者,1例为广西923医院收治的血小板输注无效(PTR)患者,1例为广西壮族自治区妇幼保健院收治的胎儿/新生儿同种免疫血小板减少症(FNAIT)患儿母亲。全部受试者年龄为15~66岁,研究前期经流式细胞术与血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定试验(MAIPA)及CD36基因分型等技术的检测,鉴定为血小板CD36缺失者,其中1例为CD36基因538T>C突变杂合子,3例为380C>T突变杂合子,1例为329-330del突变纯合子,3例为329-330del突变杂合子。采集受试者肝素抗凝血5 mL,并且分离淋巴细胞。采用EB病毒(EBV)与环孢素处理血小板CD36缺失个体的外周血淋巴细胞,获得永生化淋巴母细胞株,稳定传代后冻存,并且对这些细胞株进行复苏活性与支原体检测,同时进行CD36基因的测序验证。本研究遵循的程序符合2013年修订版《世界医学会赫尔辛基宣言》的要求,征得受试者的知情同意,并与之签署知情同意书。结果①受试者外周血淋巴细胞经EBV与环孢素处理后,继续培养7 d后,细胞母细胞化,细胞边缘多刺,部分细胞凝集呈团状。持续更换全培养液约1个月,细胞大量增殖,生长旺盛,肉眼可见较多克隆球形成,成功获得CD36缺失永生化淋巴母细胞株。② CD36缺失永生化淋巴母细胞株传代20代后,冻存于液氮;全部CD36缺失永生化淋巴母细胞株均复苏成功,倒置相差显微镜下观察细胞株生长状态良好。③ CD36缺失永生化淋巴母细胞株支原体检测结果示阴性。④对CD36缺失永生化淋巴母细胞株DNA进行PCR扩增测序结果显示,其与建株前血小板CD36缺失个体的CD36基因型完全一致,没有发生基因突变。本研究建立的CD36缺失永生化淋巴母细胞株基因类型包括CD36基因538T>C突变杂合子(1例),380C>T突变杂合子(3例),329-330del突变纯合子(1例),329-330del突变杂合子(3例)。结论CD36缺失永生化淋巴母细胞株传代稳定,血小板CD36缺失个体的基因能够稳定地被保存,并且为CD36基因相关的血小板免疫学等方面研究提供永久性实验材料。

硼替佐米联合多柔比星对淋巴母细胞淋巴瘤Molt-4细胞的作用

目的 研究硼替佐米联合多柔比星对淋巴母细胞淋巴瘤细胞株Molt-4的作用。方法 硼替佐米与多柔比星作用于Molt-4细胞后，采用CCK-8检测细胞的增殖，锥虫蓝染色计数细胞的活性，应用AnnexinV-FITC凋亡试剂盒及线粒体膜电位检测试剂盒经流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡，用免疫标记经FCM检测细胞膜表面Fas的表达。结果 硼替佐米与多柔比星单药作用对Molt-4细胞具有生长抑制作用，生长抑制率与药物浓度呈正相关（r＝0.863，P＝0.027；r＝0.915，P＝0.038）；两者联合应用对细胞生长抑制有协同作用，48 h作用最明显，抑制率达（57.24±0.10）%；联合应用细胞总凋亡率增高48 h达（23.08±1.25）%，与硼替佐米和多柔比星单药组（15.11±1.09）%和（15.96±0.81）%比较差异具有统计学意义（t值分别为0.046，0.037，均P＜0.05），早期凋亡率无明显变化（t值分别为0.052、0.048，均P＞0.05）。线粒体膜电位检测显示联合作用较单药作用细胞凋亡率升高分别为15.84 %、5.38 %、5.52 %，FCM检测药物联合作用后细胞表面Fas表达无明显改变（t＝0.040，P＞0.05）。结论 硼替佐米联合多柔比星能够有效抑制淋巴母细胞淋巴瘤细胞株Molt-4细胞增殖并诱导其凋亡，作用机制与活化线粒体凋亡途径有关，与外源性凋亡途径无关。

用人类淋巴母细胞建株方法保存罕见的异常染色体

目的探索应用人类淋巴母细胞建株方法，将珍贵的染色体异常类型的生物标本资源永久保存。方法通过EB病毒转化外周血淋巴细胞建立永生淋巴母细胞的方法，将临床患有流产、死胎、出生缺陷、死产、不良妊娠和不育、先天畸形等患者中罕见类型的染色体异常个体的外周血淋巴细胞转化成永生细胞系。结果通过实验研究得到人类染色体异常个体的完整临床资料和异常核型与其相关的表型效应关系，建立对其深入研究的资源平台。结论将这些罕见的人类染色体异常核型通过转化外周血B淋巴母细胞方法，建立一种能连续分裂永生细胞系，长期保存人类染色体异常个体的生物资源，处于国内外同类研究的先进水平。

白血病

0005796 急性髓性白血病的浆细胞增多症:浆细胞增多症及急性髓性白血病母细胞产生白细胞介素-6的增加/Wulf G G∥Ann Hematol.-1998,76(6).-273～277