猪瘟兔化弱毒免疫猪淋巴细胞亚类及转化水平、IFN-γ的变化与分析

为研究免疫猪瘟兔化弱毒(HCLV)对猪细胞免疫应答的影响,本研究分别采用HCLV脾淋毒单独(A组)、HCLV细胞毒与兔脾淋组织液联合(B组)、HCLV细胞毒单独(C组)及生理盐水(对照组)免疫仔猪,应用流式细胞术、淋巴细胞增殖试验及ELISA方法测定免疫前后外周血淋巴细胞(PBL)亚类比值、PBL非特异性(NSI)及特异性(SSI)刺激指数、IFN-γ浓度。结果显示免疫后各组CD3+/PBL与CD3+CD8+/PBL差异不显著;CD3+CD4+/PBL于第7 d时A、B和对照组显著高于C组(p<0.05);CD3+CD4+/CD3+CD8+于第7 d、14 d时A、B和对照组显著高于C组(p<0.05),并且C组CD3+CD4+/CD3+CD8+显著降低(p<0.05);NSI于第3 d、7 d时A与B组显著高于C组(p<0.05),而C组显著高于对照组(p<0.05);SSI于第3 d、7 d时A组显著高于B与C组(p<0.05),而B与C组显著高于对照组(p<0.05);IFN-γ含量由高至低依次为:A、B、C和对照组,并且于第3 d、7 d时差异显著(p<0.05)。研究结果表明,HCLV细胞毒引起机体CD3+CD8+相对更快速增殖,而HCLV脾淋毒引起机体CD3+CD4+相对更快速增殖及NSI、SSI、IFN-γ浓度更高,脾淋毒与细胞毒可能侧重不同的免疫分子途径发挥免疫保护效力;兔脾淋组织液对NSI和IFN-γ浓度具有增强作用。

牛流行热病毒灭活疫苗免疫后牛外周血淋巴细胞亚类分布的研究

对牛流行热病毒灭活疫苗免疫并攻毒后 ,牛外周血淋巴细胞亚类的变化进行了研究。结果表明 ,灭活苗免疫后 ,牛的CD4 + 显著升高 ,可能与参与辅助B淋巴细胞合成抗体有关 ,攻毒后 ,γδT细胞均显著上升 ,免疫组在攻毒后 3周仍保持在相当的高水平 ,IL_2Rα阳性细胞在攻毒后高热期也有显著升高 ,而CD8+ 细胞没有明显变化。

牛流行热病毒人工感染牛外周血淋巴细胞T淋巴细胞亚类的分布研究

通过人工接种 ,使牛患牛流行热 ,并以流式细胞术分析了患牛高热期外周血中CD3+ 、CD4+ 、CD8+ 、γδΤ淋巴细胞和B淋巴细胞的分布情况。结果表明 ,高热期患牛外周血中CD4+ 细胞数明显升高 ,说明细胞免疫在牛流行热中的重要性 ;其它淋巴细胞亚类百分率无显著变化 ,但CD3+ 、CD8+ 和B淋巴细胞也有一定程度的提高 ;在反刍动物中起重要作用的γδΤ淋巴细胞则表现为下降 ,其作用尚需进一步探讨。本研究首次证明 ,BEFV可显著刺激牛外周血淋巴细胞CD4+ 的急剧增殖 。

临床健康牛外周血淋巴细胞亚类分布的研究

以流式细胞术研究了临床健康牛外周血中CD3、CD4、CD8和γδT淋巴细胞的分布情况。结果表明 ,牛外周血淋巴细胞中各T淋巴细胞亚类分布差异较大。其中CD3平均值为 5 3.88± 8.71% ,CD4为 17.13± 3.2 2 % ,CD8为 15 .10± 5 .81% ,γδT为 18.77± 8.0 7%。同时检测了广泛存在于各种淋巴细胞表面的白细胞介素_2α受体 (IL_2Rα) ,发现IL_2Rα百分率与γδT细胞百分率具有正相关关系 ,即γδT细胞百分率高时 ,IL_2Rα也高 ,反之亦然。跟踪 3头牛外周血各淋巴细胞亚类分布百分率的实验结果 ,证明牛外周血中各淋巴细胞亚类分布的差异 ,与牛的生物节律有着密切关系。

T淋巴细胞亚类在地方流行性牛白血病牛外周血及脾脏中的分布

应用抗牛白细胞分化抗原单克隆抗体经免疫组织学方法及流体细胞计数器法对地方流行性牛白血病病牛（以下称牛白血病牛），健康成年牛（以下称成年牛）及健康未成年牛（以下称未成年牛）的外周血和脾脏的Ｔ淋巴细胞亚类进行了分析。无论是在外周血还是脾脏，牛白血病牛和成年牛的Ｔ淋巴细胞亚类的百分率（ＣＤ３＋，ＣＤ４＋，ＣＤ８＋和ＷＣ１＋γδＴ淋巴细胞）均明显低于未成年牛。虽然牛白血病牛外周血中Ｔ淋巴细胞亚类的百分率低于成年牛，但在脾脏却高于成年牛。这提示在脾脏存在一定程度的肿瘤免疫反应。病理组织学观察证实脾脏未见有滤泡增生，增生的肿瘤细胞主要见于红髓。因此认为脾脏不是牛白血病淋巴肉瘤的原发器官，肿瘤细胞是从外周血中转移而来。

用单克隆抗体对淋巴细胞浸润皮肤病淋巴细胞亚类的观察

应用各种抗淋巴细胞亚类的单克隆抗体及间接免疫过氧化酶标记技术,对一些具有不同程度的淋巴样细胞浸润的皮肤病进行淋巴细胞亚类的观察。结果表明,在所检查的各种皮肤病皮损中均有较多的OKT_(11)^+,Lcu_εa^+及OkIa^+细胞浸润,说明细胞免疫机制参与各皮肤病的临床表现。

首发重度抑郁症患者不同亚类T淋巴细胞产生主要细胞因子水平的研究

目的观察首发重度抑郁症患者不同亚类T淋巴细胞产生主要细胞因子水平的变化。方法选取2014年3月-2014年11月该院首发重度抑郁症患者30例为研究对象,按治疗前和治疗后留取血清样本,酶联免疫吸附试验检测血清细胞因子水平,30例健康体检者为对照组;用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评价患者抑郁程度,抑郁组治疗前后血清细胞因子水平与HAMD各因子分进行Spearman相关性分析。结果抑郁组治疗前血清中干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-9(IL-9)水平高于对照组(P<0.05);抑郁组治疗前IFN-γ水平与胃肠道症状呈负相关,与疑病呈正相关(P<0.05);IL-4水平与早醒呈负相关(P<0.05);IL-9水平与睡眠不深、疑病呈正相关(P<0.05),与自卑感呈负相关(P<0.05);IL-17水平与胃肠道症状呈负相关(P<0.05);抑郁组治疗后IFN-γ水平与忧郁情绪、性行为呈负相关(P<0.05);IL-9水平与工作和兴趣呈正相关(P<0.05),与全身症状、绝望感呈负相关(P<0.05);IL-17水平与疑病呈正相关(P<0.05)。结论首发重度抑郁症患者存在免疫失衡,细胞因子可能参与重度抑郁症的发生、发展。

鸡毒支原体F弱毒疫苗株细胞免疫特性研究

为了解鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)F弱毒疫苗株的细胞免疫特性,分别以活菌浓度为109(A组)、106(B组)ccu/mL的MG F株及生理盐水(C组)点眼接种SPF鸡,采用流式细胞技术及T淋巴细胞增殖试验对免疫前后淋巴细胞亚类Th/T、Tc/T、Th/Tc及刺激指数(SI)的动态变化规律进行研究。结果显示免疫后A、B组的Th/T、Tc/T、SI明显升高,其中Th/T于d5、d7,Tc/T、SI于d7、d14,A组显著高于B组(P<0.05)。研究结果表明,免疫MG F株可较好的提高鸡的细胞免疫,且MG F株活菌浓度与接种鸡外周血Th/T、Tc/T、SI呈正相关。

海洛因依赖者血清中Th1和Th2细胞产生主要细胞因子水平的研究

目的:通过检测Th1、Th2细胞产生主要细胞因子IFN-γ、IL-4在海洛因依赖者血清中水平的变化,为充分认识海洛因对机体免疫功能的影响提供依据。方法:93例海洛因依赖者按吸食海洛因时间长短分为三组(2年以内、5～10年、10年以上),31例正常人血清作为对照组,用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组人血清IFN-γ、IL-4水平。结果:各组海洛因依赖者血清细胞因子IFN-γ水平高于正常对照组(P<0.05),而IL-4水平低于正常对照组(P<0.05)。吸食海洛因2年到5-10年到10年以上,IFN-γ水平呈先高后低变化(108.52±25.84pg/ml、133.13±36.35pg/ml、113.4±38.17pg/ml),IL-4水平呈先低后高变化(129.18±83.42pg/ml、76.35±47.01pg/ml、139.74±111.37pg/ml)。结论:Th1、Th2细胞产生主要细胞因子IFN-γ、IL-4在海洛因依赖者血清中水平改变明显,证明海洛因依赖者存在Th1/Th2功能紊乱。特别是吸食5～10年间以Th1亢进,Th2降低为主。

猪2型圆环病毒核酸疫苗的接种Balb/c小鼠实验免疫研究

为了筛选得到较理想的核酸疫苗,用pVAX1真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙株的衣壳蛋白和与复制相关蛋白基因为目的基因,构建了4个重组质粒,分别是pVAX1-ORF2、pVAX1-UL18ORF2、pVAX1-ORF2ORF1和pVAX1-IL18ORF2ORF1。用它们免疫6-8周龄Balb/c小鼠,进小鼠后一周首免,每隔19d免1次,共免3次;每10d采血1次,三免后10d杀鼠取脾。用ELISA方法检测小鼠血清抗体效价,流式细胞仪检测脾T淋巴细胞亚类CD4+、CD8+数量。统计学分析发现:4个核酸疫苗实验免疫组均是从最后一次采集的小鼠血清中,获得最高的抗体效价,与对照组PBS和空载体pVAX1相比都能产生一定的体液免疫反应,且以pVAx1-IL18ORF2ORF1核酸疫苗免疫小鼠产生的血清抗体效价最高;脾T淋巴细胞亚类数量测定发现,免疫实验组的CD4+与CD8+的T细胞亚类总数显著高于对照组(P<0.05),并以pVAX-1-IL18ORF2ORF1数值较高。结论是核酸疫苗pVAX1-IL18ORF2ORF1既能较好地刺激细胞免疫又能产生一定的体液免疫反应,相对较好,将作为候选核酸疫苗进行下一步本体动物免疫实验研究。

短肽佐剂对猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗CH-1R株的免疫增强作用研究

为评价一种短肽佐剂对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R弱毒疫苗的免疫增强效果,本研究分别采用CH-1R疫苗株单独(单独免疫组)、CH-1R疫苗株与短肽佐剂共同(共同免疫组)及生理盐水(对照组)免疫仔猪,4周后以高致病性PRRSV(H P-PRRSV)TJ-F5攻毒,并采用流式细胞术对攻毒前后淋巴细胞亚类T、Th、Tc及N K进行绝对和相对计数。结果显示攻毒后共同免疫组仅在第3 d淋巴细胞亚类数量显著下降后回升,28 dTc/T显著高于单独免疫组,临床症状和各组织器官病理变化轻微;单独免疫组在攻毒后第3 d淋巴细胞亚类数量显著下降后回升,之后于第14和15 d再次显著下降后又回升,临床症状和各组织器官病理变化比共同免疫组严重,但比对照组明显减轻。单独免疫组、共同免疫组及对照组的攻毒保护率分别为40%、80%、0。研究结果表明,短肽佐剂配合CH-1R弱毒疫苗具有缓解H P-PRRSV TJ-F5的免疫抑制、增强细胞免疫及提高免疫保护力的作用;在抵抗H P-PRRSV TJ-F5攻击时,共同免疫组的免疫保护力明显高于单独免疫组。

驱虫斑鸠菊对小鼠免疫分子的影响

探讨驱虫斑鸠菊对小鼠免疫功能的影响,揭示其免疫作用机理。利用犤3H犦-TdR参入法测定驱虫斑鸠菊对小鼠体内免疫功能的影响,运用酶联免疫吸附实验测定驱虫斑鸠菊对小鼠B淋巴细胞分泌抗体功能的影响;采用流式细胞测定方法测定CD19B细胞亚类表达水平;采用犤3H犦-TdR参入法利用CTLL-2细胞株测定T淋巴细胞分泌IL-2活性。结果驱虫斑鸠菊的低、中、高三个剂量对体内T、B淋巴细胞的增殖活性、血清总抗体和抗原特异性抗体含量、CD19B细胞亚类表达均有明显的抑制作用,对T淋巴细胞分泌IL-2活性也具有明显抑制作用。说明驱虫斑鸠菊对机体体液免疫和细胞免疫功能都具有明显抑制作用。

反复喘息婴幼儿维生素D3水平及与Th1／Th2细胞平衡变化的相关性研究

目的 探讨反复喘息婴幼儿血清25-羟维生素D3［25-（OH）D3］水平与Th1/Th2细胞平衡变化之间的关系。方法 分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）、双抗体夹心 ELISA（ABC-ELISA）法检测60例反复喘息的婴幼儿及60例健康对照儿童血清中25-（OH）D3、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-4、IL-13水平，并分析反复喘息的婴幼儿维生素D3水平与Th1/Th2平衡变化的相关性。结果 反复喘息婴幼儿组血清 25-（OH）D3水平明显低于健康对照组［（18.24±5.64）μg/L比（37.85±7.78）μg/L］（t=15.810，P =0.000）；反复喘息婴幼儿组血清IFN-γ水平明显低于健康对照组［（11.20±2.08）ng/L比（20.68 ±3.87）ng/L］（t=16.700，P =0.000）；反复喘息婴幼儿组 IL-4、IL-13水平明显高于健康对照组［IL-4：（28.61 ±6.44）ng/L比（22.14±5.29）ng/L；IL-13：（20.02±4.83）ng/L比（17.72±4.06）ng/L］（t=6.201，P =0.000；t=2.829，P =0.006）；反复喘息婴幼儿组Th1/Th2低于健康对照组（0.41±0.12比1.00±0.36）（t=11.796，P =0.000）；反复喘息婴幼儿组血清 25-（OH）D3水平与Th1/Th2呈负相关（r= -0.649，P =0.000），健康对照组血清25-（OH）D3水平与Th1/Th2无相关性（r= -0.217，P =0.096）。结论 血清25-（OH）D3水平低下可能为婴幼儿反复喘息的高危因素。反复喘息婴幼儿血清25-（OH）D3水平与 Th1/Th2呈负相关，表明婴幼儿反复喘息与变态反应密切相关。