用TCRβ可变区基因阵列反映疾病的淋巴细胞克隆变化

将正常脐带血TCRβ(T细胞受体 β)重排基因制备成基因阵列 ,观察能否反映肿瘤或自身免疫病患者的淋巴细胞克隆的变化。方法 采用RT -PCR扩增混合 1 0例脐带血的cDNA不同家族的TCRβ可变区基因全部序列 ,经测序胶或SS CP电泳后 ,电转移到尼龙膜上 ,制成TCRβ可变区基因阵列。用同位素α - 32 PdCTP标记正常成人、脐带血、待检患考的TCRβ基因 ,与基因阵列杂交。结果 :从测序胶排列的基基阵列发现 ,正常成人及脐带血呈正常高斯分布 ,即呈多克隆性 ;一些肿瘤患者T淋巴细胞克隆有少数几个克隆的异常增生 ,即呈寡克隆性 ;1例急性T淋巴细胞白血病患者仅在Vβ1 6见单一的条带扩增 ,呈单克隆性。结论 :该基因阵列可以反映正常人淋巴细胞的克隆分布和疾病时出现的淋巴细胞变化。

基因指纹图谱探索胚胎淋巴细胞克隆发生的规律

目的 通过人胚胎发生不同时期的IgH基因指纹图谱 ,观察执行免疫功能的B淋巴细胞克隆是如何发育起来的。方法 提取不同胎龄肝脏、脾脏、骨髓、胸腺标本的RNA ,根据不同淋巴细胞克隆具有不同的IgH基因重排的特点 ,用RT-PCR扩增IgHV1-V6基因 ,变性胶电泳获得人类胚胎B细胞克隆的表达谱系。结果 胎龄 11w大部分B细胞克隆已在肝脏出现 ,13w～ 14w达高峰后迁移至脾脏。脾脏的B细胞克隆于 14w出现 ,19w～ 2 0w达高峰。骨髓的B细胞克隆迟至 17w出现 ,2 5w出现全部表达谱系。有IgH基因家族标志的淋巴细胞克隆出现是有规律的 ,肝脏IgHV6是优势利用的家族 ,而IgHV3为脾脏优势表达的家族 ,骨髓更多利用的基因家族也是IgHV3。胎儿胸腺内也可以有B淋巴细胞克隆表达。结论 人类胚胎B细胞克隆谱系发育有明显规律。在不同脏器 ,具有不同的IgH基因家族标志的淋巴细胞可成为优势克隆 。

受体T淋巴细胞克隆的建立及其抗原特异性的检测

目的 建立受体T淋巴细胞克隆后 ,进一步分析检测该克隆针对供体的抗原特异性。方法 供体鼠脾细胞免疫受体鼠 ,再分离、纯化受体鼠T细胞 ,克隆受体T细胞。将动物分组免疫 ,对各组受体作电镜观察淋巴细胞超微结构、MTT法测定淋巴细胞增生试验以及流式细胞分析T细胞亚群的变化 ,分析检测该克隆针对供体的抗原特异性。结果 ①受体针对供体抗原特异性T淋巴细胞克隆稳定建立 ;②经免疫组的受体T细胞超微结构改变显著 ,淋巴细胞增生试验及流式细胞分析结果与对照组的差异有显著性意义 (t>t0 0 5)。结论 成熟T淋巴细胞 ,在一定条件下仍可发生分裂和增生 ,形成克隆。通过供体脾细胞抗原特异性刺激 。

大颗粒淋巴细胞克隆性疾病

大颗粒淋巴细胞(LGL)是一种形态上可辨认的淋巴细胞亚群,其形态特点为:胞体较正常淋巴细胞大,胞浆丰富,有明显嗜天青颗粒,颗粒可粗可细,部分细胞无颗粒。这类细胞占外周血单个核细胞的10％～15％,由CD^(3+)和CD^(3-)的两个细胞群体组成:CD^(3+)LGL为激活的细胞毒T淋巴细胞,它介导非主要组织相容性复合物(MHC)

伴单克隆B淋巴细胞和单克隆浆细胞增殖的AITL 1例

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(angioimmunoblastic T-cell lymphoma,AITL)是一种预后较差的侵袭性淋巴瘤。本文报道1例伴单克隆B淋巴细胞和单克隆浆细胞增殖AITL患者的诊疗经过,以提高对AITL的认识及诊疗水平,从而减少漏诊和误诊。

人类免疫缺陷病毒-1型负向调节因子多肽特异性CD4＋T淋巴细胞克隆的建立和筛选

目的 建立和筛选慢性HIV感染者体内HIV-1型负向调节因子（Nef）多肽特异性CD4＋T淋巴细胞克隆.方法 采集5例无症状期HIV感染者PBMC,Bulk培养,用Nef蛋白C末端的Nef末端多肽刺激,双荧光流式细胞术分析细胞表面CD4分子和细胞内γ干扰素表达.有限稀释法进行Nef末端多肽特异性CD4＋T淋巴细胞克隆,酶联免疫斑点法（ELISPOT）筛选特异性克隆,挑选生长最好的细胞扩大培养,完成克隆.结果 1例H1V感染者的PBMC中存在特异性CD4＋T淋巴细胞,成功建立T淋巴细胞克隆.经ELISPOT法确认为Nef末端多肽特异性CD4＋T淋巴细胞克隆.人白细胞抗原（HLA）-DRB1分型检测,提示该多肽表位可能为HLA-DRB1＊ 0406限制性.结论 成功建立Nef末端多肽特异性CD4＋T淋巴细胞克隆,发现并鉴定了Nef末端表位及其HLA限制性.

异常淋巴细胞克隆型高嗜酸细胞综合征的研究进展

异常淋巴细胞克隆型高嗜酸细胞综合征在临床上罕见，异常克隆的淋巴细胞在其发生、发展中起重要作用。近年来对异常淋巴细胞克隆型高嗜酸细胞综合征的研究较多，就此进行综述。

同种异体反应性淋巴细胞克隆疫苗回输诱导受体特异性免疫耐受的研究

目的 探讨同种异体移植抗原特异性免疫耐受诱导的新途径 ,以达到心肺移植长期存活的目的。方法 以同种异体反应性淋巴细胞克隆在体外培养条件下大量增殖后 ,作为自身独特性疫苗 ,体内注射免疫家兔 ,以混合淋巴细胞反应来观察免疫前和免疫后对供体淋巴细胞刺激指数 (SI)的变化。结果 同种异体反应性自身独特型淋巴细胞疫苗具有显著诱导特异性免疫应答移植现象 ,SI值显著降低 (P <0 .0 5) ,而对卡介苗诱导的特异性免疫应答并未因独特型淋巴细胞疫苗的应用而下降。结论 同种异体反应性自身独特型淋巴细胞疫苗有可能成为诱导抗原特异性免疫耐受的一种手段。

抗T淋巴细胞单克隆抗体治疗再生障碍性贫血27例临床观察

用抗T淋巴细胞单克隆抗体(McAb—T)治疗再生障碍性贫血(再障,AA)27例:其中急性型7例,慢性型20例,随访观察4～12个月,治疗后Hb、WBC、PLT均明显升高,总有效率为77.78％,T淋巴细胞亚群异常得到纠正。表明McAb—T治疗AA临床疗效显著,且副作用小。

从一例慢性嗜酸性粒细胞白血病发现克隆性增殖T淋巴细胞

利用TCRβV基因指纹图谱分析 1例慢性嗜酸粒细胞白血病 (CEL)患者的外周血T细胞克隆变化 ,了解与CEL疾病相关的T细胞受体 (TCR) β可变区主要接触抗原的CDR3序列特征。用RT PCR扩增CEL患者的外周血TCRβV 1- 2 4个家族的基因序列 ,在变性测序胶上电泳 ,形成TCRβV基因指纹图谱 ,切割克隆性增生的电泳条带进行测序分析。结果显示 :TCRβV基因指纹图谱在 βV13.2家族中的分子量较小处出现一条明显扩增的条带 ,切割此条带并测序证实为单克隆性T细胞增殖 ,其CDR3的氨基酸序列为 :SFSYEQY ,其中SFSY基序为特异性保守序列 ,其它家族无异常改变。结论 :该CEL患者TCRβV13.2家族中出现了单克隆性增殖的T淋巴细胞群 ,可能是针对CEL恶性肿瘤细胞反应性增生的T细胞克隆。

单克隆B淋巴细胞增多症和“原位”淋巴瘤

最新研究发现“单克隆B细胞群”并不能诊断为淋巴系统恶性肿瘤,其促使人们探索淋巴瘤的发生机制、B细胞前体转化成真正淋巴组织增殖性疾病的致病因子。单克隆B淋巴细胞扩增,最初在不同健康个体的外周血中发现,因此定义为单克隆B淋巴细胞增多症（monoclonalB-celllym-phocytosis,MBL）,同时分析显示许多患者与慢性淋巴细胞性白血病（chroniclymphocyticleukemia,CLL）具有相似的免疫表型。依据B细胞数量的不同,临床相关性也不同：高数量MBL被认为是肿瘤前期状态,且每年以1%-2%的比率进展成CLL;而低数量的MBL可存在多年。目前,临床上尚未显示与真正白血病相关。非CLL-样的MBL代表一小部分病例,其临床及生物学意义仍不清楚。原位滤泡淋巴瘤（follicularlymphoma,FL）和套细胞淋巴瘤（mantlecelllym-phoma,MCL）是以非典型淋巴样细胞的定位为特点,分别具有生发中心t（14;18）（q32;q21）或套区t（11;14）（q13;q32）易位,且有正常细胞对应体存在。生发中心或套区为这些携带致癌基因的细胞提供恰当的微环境,促进其生存或增殖。然而这些病变进展成真正淋巴瘤的机率较低,也许需要其他基因改变的蓄积。因此,这些淋巴组织增殖的患者应受到更多的关注。

注射用鼠抗人T淋巴细胞CD25抗原单克隆抗体在肾移植患者体内的药动学与药效学

目的研究注射用鼠抗人T淋巴细胞CD25抗原单克隆抗体(WuTac)在肾移植患者体内的药动学和药效学。方法 16名肾移植患者随机分配到低、高(0.2,0.1 mg.kg-1)2个剂量组,用酶联免疫吸附法检测受试者血清中WuTac和人抗鼠抗体(HAMA)的浓度,评估该药物的药动学行为特征;通过流式细胞仪,检测全血中T细胞表面CD25结合情况,评判其药效学。结果低、高2个剂量组的主要药动学参数:T1/2分别为(51.41±16.24)(,59.53±24.96)h;AUCss分别为(2.28±0.35)(,5.13±1.53)mg.d.L-1;AUC0-t分别为(8.63±1.87)(,19.16±9.01)mg.d.L-1;AUC0-∞分别为(9.11±2.28)(,21.03±10.88)mg.d.L-1;Cmax分别为(3.27±0.53)(,8.36±1.92)mg.L-1;Tmax分别为(2.50±0.76)(,2.47±1.06)h。2组多次恒速滴注停药后,均能饱和T细胞白介2受体(IL-2R)相应结合位点。结论本品在中国肾移植患者起效迅速,疗效持久。多次给药耐受性良好,WuTac在0.1～0.2 mg.kg-1内基本呈线性药动学特征。

分泌抗急性非淋巴细胞白血病M_2型单克隆抗体细胞株的建立及其特异性

应用细胞杂交瘤技术建立了分泌抗急性非淋巴细胞白血病M_2型单克隆抗体1D_1、1C_2和1D_6细胞株,连续传代11个月,稳定地分泌单克隆抗体。用间接免疫荧光方法检测,这三株细胞分泌的单克隆抗体与急性非淋巴细胞白血病M_2型病人的白血病细胞呈阳性反应;与急性非淋巴细胞白血病M_1、M_3、M_4、M_5型病人白血病细胞呈阴性反应;与慢性粒细胞白血病、慢粒急变,急性淋巴细胞白血病病人白血病细胞呈阴性反应;与正常人白细胞也呈阴性反应,说明建立的细胞株分泌的单克隆抗体具有型的特异性。

研制抗感染疫苗面临的障碍:淋巴细胞多克隆激活

本文综述了免疫系统对感染因子应答的特点,淋巴细胞多克隆激活是目前疫苗研制难以成功的重要原因。过去疫苗研制策略的重点是注重单克隆B、T细胞对寄生虫抗原的应答,忽视了寄生虫与宿主免疫系统之间相互作用的基本规律。非特异性多克隆淋巴细胞激活也是感染诱导免疫病理和免疫逃避的基础。

抗T淋巴细胞单克隆抗体对再生障碍性贫血患者细胞免疫功能的调节作用

为了探讨再生障碍性贫血(AA)的免疫发病机制及抗T淋巴细胞单克隆抗体(MdAb-T)的免疫调节治疗作用,采用酶联免疫法和放射免疫法,检测30例AA患者McAb-T治疗前后周围血T淋巴细胞亚群,血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素2(IL-2)水平及其中10例AA外周血单个核细胞(PBMNC)体外诱生TNF-α和IL-2水平的变化。结果表明:治疗前AA患者T淋巴细胞亚群CD4/CD8比值降低或倒置(P<0.001);淋巴细胞HLA-DR抗原表达增高(P<0.001);血清TNF-α水平显著增高(P<0.01);PBMNC诱生的TNF-α和IL-2水平均明显高于正常对照(P<0.01)。治疗后T淋巴细胞亚群比例恢复正常,血清TNF-α和PBMNC诱生的TNF-α和IL-2水平降低,与对照组比较无显著差异(P>0.05)。T淋巴细胞亚群比例失调和TNF-α与IL-2等造血调控因子异常分泌在AA发病机制中起重要作用。McAb-T能发挥特异性的免疫调节作用,解除T淋巴细胞及相关细胞因子对造血功能的直接或间接抑制作用。

正常人外周血淋巴细胞体外辐射敏感性的研究

本文利用PHA和白细胞介素2结合克隆的形成测定了人外周血新鲜淋巴细胞体外辐射敏感性。外周血淋巴细胞来自健康成年人,在体外照射x射线0～5Gy,并获得了剂量活存曲线,D-(10)值(杀伤90％细胞时所需剂量)约为3.5Gy。 另一种方法是用细胞松弛素B(CB)阻断细胞浆分裂,从体外受照淋巴细胞形成双核微核率的结果,得出双核微核形成率和受照剂量(0～3Gy)之间呈良好线性关系。

抗T细胞单克隆抗体对再生障碍性贫血患者TNF和IL-2水平的影响

为探讨抗Ｔ淋巴细胞单克隆抗体（ＭｃＡｂ－Ｔ）对再生障碍性贫血（ＡＡ）患者免疫功能的调节作用，采用放射免疫法检测２５例ＡＡ患者ＭｃＡｂ－Ｔ治疗前后血清肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和白细胞介素－２（ＩＬ－２）水平及其中１０例周围血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）体外诱生ＴＮＦ和ＩＬ－２水平的变化。结果表明：有效组治疗前血清ＴＮＦ和ＰＢＭＮＣ诱生的ＴＮＦ和ＩＬ－２水平均明显高于正常对照（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）；治疗后均显著降低，与对照组比较无明显差异（Ｐ＞０．０５）。无效组血清和ＰＢＭＮＣ诱生的ＴＮＦ和ＩＬ－２水平治疗前后无显著差异（Ｐ＞０．０５）；但治疗前后ＰＢＭＮＣ诱生的ＴＮＦ和ＩＬ－２水平均明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。提示ＡＡ患者存在造血相关细胞因子分泌异常，ＭｃＡｂ－Ｔ对ＴＮＦ和ＩＬ－２等造血调控因子发挥特异性免疫调节作用。