T淋巴细胞内质网应激在脓毒症中的作用

T淋巴细胞凋亡在脓毒症发生、发展过程中起重要作用,与脓毒症免疫抑制密切有关,如何减少T淋巴细胞凋亡是影响脓毒症患者预后的重要因素。内质网(endoplasmic reticulum,ER)是重要的细胞器,负责促进蛋白质的折叠、组装,并参与多种生理活动。在应激和炎性条件下,内质网失去功能稳态,被称为内质网应激(ER stress)。在内质网应激期间,未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)被激活,使内质网功能恢复到正常的平衡。然而,一旦应激超过UPR的代偿能力或延长,就会引发细胞损伤、甚至凋亡。越来越多的证据表明,内质网应激是导致脓毒症T淋巴细胞凋亡的重要病理生理机制之一,本文就脓毒症中T淋巴细胞内质网应激和UPR信号通路的相关研究进展进行综述,讨论T淋巴细胞内质网应激作为脓毒症免疫治疗新靶点的临床意义和价值。

老年慢性心衰患者神经内分泌激活与淋巴细胞内离子含量变化的关系及意义

目的 探讨老年慢性心衰 (CHF)患者在不同心功能状态下神经内分泌与淋巴细胞内离子含量的关系。方法 采用高效液相及放免法测定 CHF患者血浆去甲肾上腺素 (NE)、血浆肾素活性 (PRA)、血管紧张素 (AT )含量及外周血淋巴细胞内 K+、Na+、Ca2 + 、Mg2 + 离子含量。结果 CHF时血浆 NE、PRA、AT 含量增高 ,尤其 NE、AT 含量增高与心衰严重程度伴行。CHF时 NE含量增加与淋巴细胞内 K+含量呈显著负相关 (r=- 0 584,P<0 0 1 ) ,PRA含量增加与淋巴细胞内 K+含量呈显著正相关 (r=0 698,P<0 0 1 )。结论 提示 CHF时交感神经系统与肾素 血管紧张素系统过度激活。 NE、PRA、AT 含量变化参与心衰的病理生理过程 ,推测NE、PRA含量变化是影响淋巴细胞内 K+、Na+含量变化的主要因素之一。

老年哮喘患者外周血淋巴细胞内IL-4与IFN-γ的变化及意义

目的:了解老年哮喘患者外周血淋巴细胞内IL-4、IFN-γ的变化及其在支气管哮喘发病中的意义。方法:选择老年哮喘患者分为急性发作期组和缓解期组,以健康老年人为对照组,应用流式细胞仪测定外周血淋巴细胞表达IL-4、IFN-γ的百分率,同时行肺功能检查。结果:CD4+淋巴细胞IL-4表达百分率3组各为(2.6±2.2)%、(1.3±0.9)%和(1.5±0.8)%,急性发作期组高于缓解期组(P<0.05)和对照组(P<0.05);IFN-γ表达百分率3组各为(10.5±4.6)%、(17.5±3.8)%和(18.4±5.9)%,急性发作期组低于缓解期组(P<0.05)和对照组(P<0.05);CD8+淋巴细胞IFN-γ表达百分率3组各为(26.4±10.3)%、(20.2±12.3)%和(21.3±10.4)%,急性发作期组显著高于缓解期组(P<0.05)和对照组(P<0.05)。1秒钟用力呼气容积占用力肺活量比值(FEV1%)与CD4+淋巴细胞IFN-γ表达百分率显著正相关(r=0.48,P<0.05),与CD4+淋巴细胞IL-4表达百分率及IL-4+/IFN-γ+比值呈负相关(r分别为-0.53和-0.65,P皆<0.01)。结论:Th1/Th2失衡,即Th1亚群的功能低下与Th2亚群的功能亢进,可能与老年哮喘患者病情发展有关。

大黄素和大黄多糖对小鼠脾淋巴细胞内游离钙浓度的影响

应用最新一代钙离子荧光指示剂Fura－2／AM测定小鼠脾淋巴细胞内游离钙浓度，探讨大黄有效成分蒽醌类中大黄素和大黄多糖对脾淋巴细胞内游离钙的影响。实验表明：大黄素（终浓度18．5μmol／L）对淋巴细胞外钙内流有明显促进作用（P＜0．01）；大黄多糖则有抑制内钙释放和外钙内流作用（P＜0．01），且抑制程度与剂量相关。本文为大黄双向调节作用提供理论依据。

脓毒症性急性肾损伤患者CD_4^+ T淋巴细胞内三磷酸腺苷水平变化及其与肾功能转归的关系

目的探讨CD_4^+T淋巴细胞内三磷酸腺苷(CD_4^+T cell-iATP)水平预测脓毒症并发急性肾损伤(AKI)患者预后的价值。方法前瞻性选择2013年7月—2014年12月于丽水市中心医院ICU、感染科及肾内科住院的脓毒症并发AKI患者69例为研究对象,分别于人组0、48、96h检测患者CD_4^+T cell-iATP水平。根据肾功能临床转归情况将患者分为肾功能完全恢复组(18例)、肾功能部分恢复组(38例)、依赖透析组(4例)和死亡组(9例)。结果各组eGFR、功能衰竭脏器数量、AKI分期及0、48h CD_4^+T cell-iATP水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多分类Logistic回归分析结果显示,相对于预后不良(依赖透析或死亡),eGFR、功能衰竭脏器数量和48h CD_4^+T cell-iATP水平为肾功能完全恢复、肾功能部分恢复的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,48h CD_4^+T cell-iATP水平预测脓毒症并发AKI患者预后的ROC曲线下面积为0.926(P<0.01),取48h CD_4^+T cell-iATP临界点为344.2μg/L时,灵敏度为92.3%,特异度为87.5%。结论 CD_4^+T cell-iATP水平低的脓毒症患者肾功能恢复良好,脓毒症患者早期CD_4^+T cell-iATP水平是肾功能转归的预测指标。

检测肾移植受者CD4^+T淋巴细胞内三磷腺苷的意义

目的探讨检测CD4+T淋巴细胞内三磷腺苷(ATP)水平用于评价肾移植受者细胞免疫功能的价值。方法采用植物血凝素刺激、单克隆抗体包被免疫磁珠分离CD4+T淋巴细胞,以荧光试剂标记,测定27例肾移植受者(研究组)的术前,术后3d、7d、14d、30d以及发生感染时的CD4+T淋巴细胞内ATP水平,并以14名健康人作对照(对照组)。研究组患者术后均采用抗人T细胞CD3鼠单抗(OKT3)诱导治疗,并予免疫抑制剂治疗,其中21例采用以环孢素(CsA)为基础的三联用药方案,6例采用以他克莫司(FK506)为基础的三联用药方案,比较采用不同用药方案患者的ATP水平,采用Pearson相关分析评估肾移植患者ATP水平与环孢素或他克莫司血药浓度的关系。结果肾移植受者术前CD4+T淋巴细胞内ATP水平为(382±187)ng/ml,明显低于正常成人的(496±116)ng/ml(P<0.05),术后7d降至最低,14d开始回升,30d时仍低于术前水平(P<0.01)。3例术后并发肺部感染者,其CD4+T淋巴细胞内ATP水平下降,病情加重时下降更加明显,感染控制后有所回升。采用环孢素三联方案治疗的患者各时点的ATP水平与采用他克莫司三联方案治疗的患者比较差异无统计学意义。肾移植受者的ATP水平与上述两药血药浓度变化无关。结论测定肾移植受者CD4+T淋巴细胞内ATP水平可反映患者的整体细胞免疫状态,指导临床制定个体化治疗方案。

CD4^+T淋巴细胞内ATP含量与肝癌肝移植术后肿瘤复发的关系

目的探讨CD4+T淋巴细胞内三磷腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量与原发性肝癌(肝癌)肝移植术后肿瘤复发的关系。方法 64例次肝癌肝移植,56名健康志愿者(对照组)纳入该研究。采集外周血标本,用ImmuKnowTM免疫细胞功能测定试剂盒检测CD4+T淋巴细胞内ATP值。根据样本采集时肝癌肝移植患者是否发生肝癌复发,将采集的64份全血标本分为非复发组(51份)和复发组(13份)。结果健康对照组、非复发组、复发组的CD4+T淋巴细胞内ATP含量分别为(459±121)ng/ml、(308±101)ng/ml、(138±97)ng/ml,复发组的ATP值明显低于非复发组和对照组。ATP值降低(<147ng/ml)时肝癌复发的风险明显增加,与肝癌复发存在良好的相关性。结论 CD4+T淋巴细胞内ATP含量与肝癌肝移植术后肿瘤复发具有良好相关性,监测肝癌肝移植术后患者的上述指标对评估其免疫状态、制定个体化治疗方案具有实用价值。

急性髓系白血病患者T淋巴细胞内细胞因子表达特性

T淋巴细胞在抗肿瘤的免疫反应中起着重要作用,而大部分肿瘤患者往往存在免疫功能低下。本研究通过对急性髓系白血病(AML)患者T淋巴细胞胞内细胞因子特性的研究,以了解AML患者在不同状态下T淋巴细胞的功能。18例不同状态下初诊AML患者和10例健康成人外周血中的T淋巴细胞在莫能霉素存在的情况下,体外经PMA和离子霉素(ionomycin)刺激后,分别进行CD4-FITC、CD8-FITC荧光单克隆抗体染色和IFNγ-PE、IL4-PE荧光单克隆体胞内染色,最后进行流式细胞仪分析。结果表明:初诊AML患者中CD4+和CD8+T淋巴细胞胞内IFNγ分泌水平均明显低于健康成人外周血T淋巴细胞,CD4+和CD8+T细胞胞内IL-4分泌水平与成人外周血细胞无显著差异。处于临床缓解状态的AML患者,CD8+T淋巴细胞刺激后胞内产生IFNγ的量明显高于初诊AML患者(p<0.05),但与健康成人无显著差异(p>0.05)。复发的AML患者外周血中CD4+T细胞和CD8+T细胞刺激后胞内产生IFNγ量明显低于健康成人外周血T淋巴细胞以及处于完全缓解状态的AML患者CD8+T淋巴细胞(p<0.05),而IL-4的量明显高于健康成人和初诊AML患者CD4+T细胞和CD8+T细胞(p<0.05)。结论:处于不同状态下的AML患者T细胞亚群分泌的细胞因子发生了改变,与之相应的是,初次诊断的AML患者外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞刺激后Th1/Tc1细胞反应低下,Th2/Tc2细胞反应与健康成人T淋巴细胞无差异;完全缓解状态的AML患者T细胞Th1反应虽然仍低下,但Tc1反应明显增强,与健康成人无差异;复发的AML患者CD4+和CD8+T细胞Th2/Tc2样反应较Th1/Tc1样反应明显增强。

淋巴细胞内DNA氧化损伤与Alzheimer病的关系

目的 评价淋巴细胞内 DNA氧化损伤与 Alzheimer病 (AD)的关系。方法 应用高效液相色谱法(HPL C)对 AD患者和健康老年人的淋巴细胞内的 8-羟基脱氧鸟苷 (8-OH-d G)基础含量进行了测定 ,并对部分受试者氧化应激反应前后的 8-OH-d G进行了对照研究。结果 AD患者淋巴细胞内 8-OH-d G的平均基础含量较对照组显著增高 (86.4± 12 .9fm ol/μg DNA / 58.7± 10 .2 fmol/μg DNA,P<0 .0 1) ,急性氧化应激反应后淋巴细胞内的 8-OH-d G含量的改变在两组间无显著差异。结论 AD不仅在脑内而且在外周的细胞 ,均可受氧化应激的影响 ;氧化应激可能参与了

血清、淋巴细胞内钙镁与心功能关系的探讨

该文以火焰原子吸收光度法检测了60名心功能不全患者和30名心功能正常者的血清及淋巴细胞内钙、镁的含量。结果发现，心功能不全患者血清钙、淋巴细胞内钙明显高于正常对照组；心功能不全组淋巴细胞内镁明显低于正常对照组；心衰Ⅲ级患者较心衰Ⅰ级者血清钙及淋巴细胞内钙明显增高；心衰Ⅲ级患者血清镁及淋巴细胞内镁较心衰Ⅰ组者降低更为明显；各种不同病因组引起的心衰，淋巴细胞内钙均高于正常对照组，而风心病组升高更为明显，各种不同病因组淋巴细胞内镁均低于对照组，而风心病组降低更为显著。该研究表明血清及淋巴细胞内钙、镁的含量变化与心功能不全的程度有一定关系。

创伤小鼠淋巴细胞内环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷的变化

用小鼠闭合伤、截肢伤及烧伤模型，观察创伤后４６小鼠脾细胞、胸腺细胞、肠系膜淋巴结细胞内环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）、环磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）的变化．结果显示：创伤后三种类型的淋巴细胞在静息状态或经ＣｏｎＡ刺激时的ｃＡＭＰ水平增高，ｃＧＭＰ水平下降，ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ比值增加．创伤后血清、巨噬细胞、Ｔｓ细胞在体外可明显提高正常小鼠脾细胞内ｃＡＭＰ水平，降低其ｃＧＭＰ水平．去除创伤小鼠脾细胞中的巨噬细胞、Ｔｓ细胞可使其ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量恢复至接近正常水平，提示：创伤可导致淋巴细胞内ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量发生改变，这一变化同创伤后血清、巨噬细胞、Ｔｓ细胞的作用有关．

流式细胞术检测单个淋巴细胞内细胞因子表达及其临床应用

目的 寻找一种准确、敏感的检测 T淋巴细胞内细胞因子水平的方法 ,为研究 T细胞极化状态在疾病发生发展过程中的作用提供可靠的手段。 方法 用 PMA、 ionomycin作刺激剂 ,刺激全血中淋巴细胞表达细胞因子 ,以 mon-ensin阻断细胞因子分泌至胞外 ,应用两种免疫荧光抗体同时标记淋巴细胞的膜表面特异的分子和表达并被阻滞在胞内的细胞因子 ,然后用流式细胞仪进行检测和分析。 结果 本方法检测 1 8例正常人淋巴细胞的分泌细胞因子水平 ,其中CD4 + T淋巴细胞中 Th1占 1 9.5 1 %± 4 .96% ,Th2占 1 5 .66%± 3.95 % ;CD8+ T淋巴细胞中 Tc1占 1 6.2 2 %± 1 .78% ,Tc2占 9.2 0 %± 1 .96% ;而 1 2例妊高征孕妇的 Th1、Tc1百分比例明显高于正常人 ( P<0 .0 1 ) ,Th2的比例显著低于正常人( P<0 .0 1 )。 结论 双抗体标记流式细胞仪检测法可以客观、准确地检测淋巴细胞表达细胞因子的水平 ,判断 T淋巴细胞的极化状态。妊高征患者与正常人相比存在 T淋巴细胞的极化水平异常 。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇与玉米赤霉烯酮联合暴露对体外培养鸡脾脏淋巴细胞内环境稳态的影响

本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)与玉米赤霉烯酮与(ZEA)联合暴露对体外培养鸡脾脏淋巴细胞内环境稳态的影响。分别以0.012 50μg/mL DON+0.006 25μg/mL ZEA、0.050μg/mL DON+0.025μg/mL ZEA、0.2μg/mL DON+0.1μg/mL ZEA、0.8μg/mL DON+0.4μg/mL ZEA对体外培养鸡脾脏淋巴细胞进行联合暴露培养,48 h后测定细胞膜ATP酶(Ca^(2+)-ATP酶、Na^+/K^+-ATP酶)活性以及细胞内pH、Ca^(2+)水平和钙调蛋白(CaM)的mRNA表达水平。同时设不添加毒素的空白对照组。结果表明:添加毒素的各试验组间,细胞内Ca^(2+)水平、CaM mRNA表达水平随毒素浓度的升高而增加,且添加毒素的各试验组均显著或极显著高于空白对照组(P<0.05或P<0.01)。细胞内pH以及细胞膜Ca^(2+)-ATP酶与Na^+/K^+-ATP酶活性均随毒素浓度的升高而降低,且添加毒素的各试验组均显著或极显著低于空白对照组(P<0.05或P<0.01)。由此得出,DON、ZEA联合暴露导致体外培养鸡脾脏淋巴细胞内酸化、离子平衡失调等一系列细胞内环境稳态失衡,且呈剂量依赖性。

(一)蝙蝠葛苏林碱对兔淋巴细胞内钙含量的影响

采用钙荧光指示剂Fura—2/Am定量测试法检测了静息淋巴细胞胞浆内游离钙浓度,并以Ca^(2+)载体A23187作为阳性对照.观察了(一)蝙蝠葛苏林碱(8701)对兔淋巴细胞胞浆内Ca^(2+)浓度的影响。结果表明:8701的各种实验浓度均可显著地促进淋巴细胞内Ca^(2+)浓度增加,在浓度为10^(-4)mol·L^(-1)时,增加细胞内Ca^(2+)浓度的作用显著高于Ca^(2+)载体A23187的作用(P<0.01),提示该药有可能作为淋巴细胞的刺激剂或在高浓度时可能造成淋巴细胞的Ca^(2+)中毒作用。

大承气汤对实验性不完全肠梗阻大鼠脾淋巴细胞内游离钙浓度的影响

应用钙离子荧光指示剂 Fura-2的乙酰羟甲酯(Fura-2/AM),观察大承气汤对实验性不完全肠梗阻大鼠脾淋巴细胞内游离钙浓度([Ca^(2+)]i)的影响。结果表明:在静息状态下,经大承气汤治疗24h、48h、96h(n=5)的脾淋巴细胞内[Ca^(2+)]i 明显降低,与肠梗阻模型组比较有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。在细胞悬液中分别加入1mmol/L CaCl_2后,与模型组相比较,大承气汤治疗组脾淋巴细胞[Ca^(2+)]i 亦有所降低,尤以24h 和96h 组钙浓度降低更为显著(P<0.01)。实验说明大承气汤对脾淋巴细胞内 Ca^(2+)释放和外 Ca^(2+)内流具有抑制作用,从而为大承气汤治疗肠梗阻的作用机理提供了理论依据。

氟对牛脾淋巴细胞内抗氧化功能和NO代谢的影响

采用常规方法分离培养健康牛脾脏淋巴细胞,用不同浓度氟化钠(NaF)染毒24 h。检测牛脾淋巴细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活性及丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的含量。结果表明,与对照组相比,淋巴细胞内GSH-Px、SOD活性不同程度的降低,而其余各指标均不同程度的升高,且存在着剂量-效应关系。由此得出,氟能够导致体外培养牛脾淋巴细胞内抗氧化功能下降,脂质过氧化程度加重,自由基含量增多,对淋巴细胞造成损伤。

淋巴细胞内β-葡萄糖醛酸酶超微结构定位研究

应用低温包埋、紫外线照射、胶体金标记、免疫电镜技术，首次在透射电镜下确定Ｗｈｉｔｅ树脂包埋淋巴细胞内β－葡葡糖醛酸酶在超微结构水平的精确定位，观察到淋巴细胞的内质网、高尔基复合体、溶酶体内散在分布着标记β－葡萄糖醛酸酶的金颗粒，表明该酶主要分布于这几种细胞器内。

四色法流式细胞术测定淋巴细胞内细胞因子的方法学探讨

目的 建立流式细胞术测定淋巴细胞内细胞因子的方法。方法 正常人外周血在PMA、iono-mycin和BFA存在的条件下在体外短期培养,进行细胞膜表面抗原和细胞内细胞因子染色,再用流式细胞仪对淋巴细胞内细胞因子进行测定,并对分析方法中的一些测定条件进行了探讨。结果 刺激剂的刺激时间和不同的固定穿透剂对结果有较大的影响,但在最佳条件下,该方法的实验内变异比较小,平均CV在8％左右;实验间的变异稍大,平均CV在20％左右。结论 ①流式细胞术是单细胞水平检测细胞内细胞因子的理想方法,联用IFN-γ/IL-4/CD8/CD3四色荧光标记,可以在一支检测管中同时了解T细胞亚群中两类细胞因子的表达情况;②细胞内细胞因子检测的影响因素较多,分析时需注意选择适当的测定条件。

低剂量 X 射线全身照射诱导脾淋巴细胞内[ Ca^(2+) ]_i 及 C D71 表达的适应性反应

为 了观察低 剂量 Ｘ 射 线全身照 射诱导脾 淋巴细 胞内［ Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 及 Ｃ Ｄ７１ 表 达的 适应 性反应。采用 Ｆｕｒａ２ 负载，双 波长荧 光测定法 检测 细胞 内［ Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 浓 度。 采用 单克 隆 抗体 免 疫荧 光标记，流 式细胞术 检测淋巴 细胞 Ｃ Ｄ７ １ 表达。发现 ００７５ Ｇｙ 低 剂量 预照 射 能明 显减 轻 其后 ２０ Ｇｙ 攻击剂量 照射对 细 胞 内［ Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 及 Ｃ Ｄ７ １ 的 抑 制 作 用 。低 剂 量 辐 射 能诱 导 脾 淋 巴 细 胞［ Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 及 Ｃ Ｄ７ １ 表达的适 应性反 应。此变 化可能是 低剂量 辐射诱导 Ｔ 淋巴细胞 免疫适 应性反 应的 重要 机制之一。