治疗用抗人T淋巴细胞分化抗原单克隆抗体与人体组织反应性的体外研究

应用免疫组化酶染色法及免疫细胞荧光染色法体外检测了 WuT_3(抗 CD_3),WuT_4(抗CD_4),WuT_8(抗 CD_8),WuT_9(抗 CD_71 或 TfR),WuTac(抗 CD_(25)或 IL-2R)等5种临床治疗用小鼠抗人 T 淋巴细胞分化抗原单克隆抗体(简称单抗)与25种正常人体组织的反应性。结果显示,WuT_3与髓质胸腺细胞,淋巴结及扁桃体中 T 细胞区细胞,脾白髓中动脉周围淋巴鞘细胞及胃肠道粘膜层淋巴细胞呈阳性反应。WuT_4与皮质胸细胞及大多数髓质胸腺细胞呈阳性反应。WuT_8与皮质胸腺细胞及少数髓质胸腺细胞呈阳性反应。WuT_4 和 WuT_8阳性细胞在淋巴结、扁桃体、脾脏及胃肠道粘膜中的分布与 WuT_3 阳性细胞基本一致,但数量依次减少。淋巴结和扁桃体的生发中心以及脾脏的脾小结中散在分布有少数WuT_3,WuT4及 WuT_8阳性细胞。此外,睾丸中散在分布个别 WuT_8阳性淋巴细胞。WuT_9与26%的骨髓细胞及个别皮质胸腺细胞呈阳性反应。WuT_9 尚与小肠粘膜肠腺底部细胞呈较强染色。WuTac 仅与个别散在的髓质胸腺细胞呈阳性反应。上述5种单抗与其它非淋巴组织及细胞基本呈阴性反应。

胃癌患者免疫抑制性酸性蛋白和T淋巴细胞分化抗原检测

目的探讨胃癌患者免疫抑制性酸性蛋白(IAP)和T淋巴细胞分化抗原的变化及其临床意义。方法测定50例胃癌患者及50例健康对照者的IAP、CD8+、CD4+、CD4+/CD8+,观察胃癌患者淋巴结转移、肿瘤直径和细胞分化与IAP及T淋巴细胞分化抗原的关系。结果与健康对照组相比,胃癌组的IAP、CD8+较高,CD4+、CD4+/CD8+较低(P<0.01);胃癌患者中淋巴结转移者、肿瘤直径≥3cm者的IAP、CD8+较高,CD4+、CD4+/CD8+较低(P<0.01);细胞高中分化者与低未分化者相比,除CD4+(P<0.05)外,其余指标差异均无显著性(P>0.05)。结论血清IAP、CD8+随胃癌的淋巴结转移、肿瘤直径的增大而升高,CD4+、CD4+/CD8+随胃癌的淋巴结转移、肿瘤直径的增大而降低。

脐血与成人外周血中淋巴细胞分化抗原含量的比较

目的比较脐血、成人外周血淋巴细胞分化（CD）抗原含量的异同，分析进行脐血和成人外周血造血干细胞移植（HSCT）时的利弊，发生移植物抗宿主病（GVHD）和移植物抗白血病（GVL）效应强弱的可能原因。方法应用流式细胞术（FCM），双色、单色荧光素标记单克隆抗体（McAb）分别检测脐血、成人外周血中淋巴细胞分化抗原，并进行比较分析。结果成人外周血中相对成熟的总T淋巴细胞（CD3＋细胞）、细胞毒T细胞（CD3＋、CD8＋细胞）、NK细胞（CD16＋CD56＋细胞）的含量均明显高于脐血（P〈0．01），而B淋巴细胞（CD19＋细胞）的含量明显低于脐血（P〈0．001）。辅助性T淋巴细胞（CD3＋、CD4＋细胞）、CIM＋／CD8＋细胞比值脐血与外周血相比，两者比较差异无统计学意义（P〉0．05）。代表初始T细胞重要表型CD4＋、CD45RA＋淋巴细胞的含量脐血明显多于成人外周血（P〈0．01），而CD8＋、CD45RA＋淋巴细胞在脐血中的百分含量略高于外周血，两者比较差异无统计学意义（P〉0．05），代表记忆性T细胞重要表型CD45RO＋淋巴细胞的含量成人外周血明显多于脐血（P〈0．01）。结论脐血中部分淋巴细胞亚群分化抗原的表达能力与成人外周血存在不同程度的差异。脐血中相对成熟的总T淋巴细胞、细胞毒T细胞、NK细胞的含量均低于成人外周血，相对“初始化”淋巴细胞（CD45RA＋细胞）含量、B淋巴细胞、CD4＋／CD8＋细胞比值高于外周血，这些可能与脐血造血干细胞移植后急、慢性GVHD发生率低、强度弱，GVL效应好相关。

禽脑脊髓炎淋巴细胞及其亚群变化规律的研究

用禽脑脊髓炎病毒NH937毒株接种1日龄SPF雏鸡。分别在攻毒后5、10、15、20、25、30天取材大脑和小脑、固定、H.E染色、镜下观察,具有禽脑脊髓炎典型病变,表现为脑软膜血管扩张、充血、点状出血,镜下可见神经元中央染色质溶解、噬神经元现象、小胶质细胞增生、管套现象等。在攻毒后1、3、5、10、14、20、30天经流式细胞仪检测T、B淋巴细胞及其亚群的分化抗原等,结果为:血液中CD3+细胞下降和CD19+细胞提高均有显著变化(p<0.05),法氏囊的CD19+细胞提高显著(p<0.05);免疫组化法检测脑的管套中T淋巴细胞及其亚群的分化抗原变化,结果:管套中的细胞以CD3+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞为主,并有离开管套进入炎区的现象。

小鼠骨髓lin^-CD117^+造血干细胞定向分化成浆细胞样树突状细胞的研究

目的观察小鼠骨髓lin-CD117+造血干细胞大量增殖分化成浆细胞样树突状细胞(pDC)的方法。方法采用免疫磁珠法分离正常C57小鼠骨髓的lin-CD117+干细胞,加入干细胞因子(SCF)及白介素(IL)-3促进增殖。9天后,停用SCF和IL-3,加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和IL-10诱导发育成pDC,或加入肿瘤坏死因子(TNF)-α促进细胞成熟。光学显微镜和扫描电镜观察pDC形态,经流式细胞法检测免疫表型和吞噬功能。结果SCF和IL-3促进造血干细胞大量增殖;与成熟DC比较,pDC具有明显的未成熟DC形态特征,表型呈CD117和CD11c阳性,I-A/I-E低表达及CD40、CD80和CD86阴性,且吞噬功能较弱。结论小鼠骨髓lin-CD117+造血干细胞可经细胞因子诱导大量增殖,并向pDC转化。

CD20抗原模拟表位的筛选

目的:筛选CD20分子的模拟表位肽,构建针对CD20分子的治疗性疫苗,以期为淋巴瘤以及其它B细胞相关性疾病的治疗提供新的方向.方法:利用噬菌体随机呈现肽库筛选技术,以人淋巴细胞分化抗原CD20 mAb Rituximab为靶点,筛选CD20分子的模拟表位肽.通过ELISA方法检测筛选出的阳性噬菌体与Rituximab的特异性结合,并以竞争性结合实验检测筛选出的阳性噬菌体与Raji细胞表面的CD20分子竞争结合Rituximab的能力.最后以Sanger双脱氧链终止法测定DNA序列,推断其氨基酸序列.结果:成功筛选出针对CD20 mAb Rituximab的阳性噬菌体,获得了CD20分子的模拟表位肽QDKLTQWPKWLE.获得的阳性噬菌体能够与Rituximab特异性结合,并且表达该表位的噬菌体可以竞争性抑制Rituximab与天然CD20分子的结合.结论:CD20分子的抗原表位肽QDKLTQWPKWLE能够与mAb Rituximab特异性结合,与天然CD20分子竞争性结合mAb Rituximab,并具有潜在的应用价值.

猪CD3∈分子的cDNA克隆与序列分析

应用RT-PCR和3′RACE技术,本研究从猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增克隆了猪CD3ε基因并进行了序列分析。序列分析结果表明,猪CD3εcDNA序列长1241nt,其中5′非翻译区80nt,3′非翻译区570nt,开放阅读框591nt,该开放阅读框编码196个氨基酸残基的CD3ε前体蛋白(无糖基化位点);在猪CD3ε蛋白的胞外区,Cys49、Cys91、Cys108和Cys111为保守性氨基酸残基,它们与CD3ε免疫球蛋白样结构的形成有关。在猪CD3ε蛋白胞浆区,存在免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)、内质网潴留基序和1个SH3结合基序,其中ITAM基序含有2个SH2结合基序和2个潜在酪氨酸磷酸化位点Tyr177和Tyr188,这些基序是猪CD3分子参与T细胞活化信号转导和TCR-CD3复合体装配的结构基础。推导氨基酸序列分析结果表明,猪与人、鼠、狗、牛和绵羊CD3ε蛋白的氨基酸同源性分别为61.2%、58.7%、58.7%、65.1%和65.6%。

舍格伦综合征患者唾液腺中CD_(44H)、CD_(54)的表达及意义

目的 研究淋巴细胞共同分化抗原 (lymphocytecommonantigen - 4 4H ,CD44H)及细胞间粘附分子 - 1(intercellularadhesionmolecules- 1,CD54)在舍格伦综合征 (Sj gren’sSyndrome ,SS)患者唇腺组织中的表达 ,以探讨CD44H、CD54在SS炎性病变中的作用。方法 通过HE染色观察淋巴细胞的浸润 ,采用免疫组织化学法检测CD4 4H、CD5 4在患者唇腺组织上的表达 ,运用图像分析技术对结果进行定量分析。结果 CD44H、CD54均呈阳性表达于病变唇腺组织 ,在淋巴细胞、腺泡上皮细胞、导管上皮细胞、血管内皮细胞上其表达的数量及强度依次递减。结论 CD44H、CD54参与了SS的发病过程。