重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白质量控制方法与质量标准研究

研究建立重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白(rhLFA3-IgG1)质量控制方法和质量标准。采用针对Jurkat细胞表面CD2分子的竞争结合试验测定融合蛋白的体外活性,以分子筛和离子交换色谱分别确定制品纯度,将制品还原、羧甲基化后再以胰蛋白酶裂解并经反相高效液相色谱进行肽图分析,采用ELISA法分别测定蛋白A与CHO宿主细胞蛋白残留量。建立了重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白生物学活性、理化特性与残留杂质等质量控制方法和质量标准。所建立的质量控制方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白(rhLFA3-IgG1)的质量控制与产品检定。

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4诱导新鲜异体骨移植免疫耐受的实验研究

目的 利用外源性细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 ( cytotoxic T lymphocyte- associated antigen 4immuno globlin,CTL A4 - Ig)阻断T细胞反应的第2信号,诱导新鲜同种异体骨移植免疫耐受。 方法 采用近交系小鼠BAL B/C 6 6只作为骨移植的受体,进行异位肌袋一次及第2次骨移植。一次移植分为3组,每组18只,一组移植C5 7BL/6小鼠骨骼,注射L6 (对照品) ,为AL组;一组移植C5 7BL/6小鼠骨骼,注射CTL A4 - Ig,为AC组;一组移植同系BAL B/C小鼠骨骼,注射PBS缓冲液,为AB组。在第2、4及6周,进行血淋巴细胞亚群分析,血清抗体测定,供体细胞及抗原二次刺激实验及组织学观察。另取12只BAL B/C小鼠,进行第2次移植实验,供体为C5 7BL/6小鼠的骨骼,注射CTL A4 - Ig后2周,分别移植C5 7BL/6 ( BC组)和C3H( BH组)小鼠的骨骼,检测产生免疫耐受的特异性。 结果 AL组与AB组比较,产生了强烈的免疫排斥反应,移植后2、4及6周,CD4 T细胞的增殖明显增加( P<0 .0 5 ) ,血清抗体明显增多( P<0 .0 5 ) ,供体细胞及骨抗原二次刺激的细胞增殖也明显增加( P<0 .0 5 ) ;AC组免疫排斥反应较轻,在CD4 T细胞的增殖、血清抗体及二次刺激的细胞增殖方面均与AB组相似( P>0 .0 5 ) ;组织学观察也显示,异体骨周围的淋巴细胞浸润消失,软骨诱导及新骨形?

白蛋白结合型紫杉醇联合CTLA-4抑制剂治疗非小细胞肺癌的效果

目的研究白蛋白结合型紫杉醇联合细胞毒T淋巴细胞相关抗原(CTLA)-4抑制剂治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的效果。方法回顾性分析60例老年NSCLC患者,按照临床方案进行分组,单用白蛋白结合型紫杉醇患者为对照组(n=30),白蛋白结合型紫杉醇联合CTLA-4抑制剂患者为研究组(n=30)。观察两组一定疗程治疗后临床疗效、细胞免疫指标、肿瘤标志物指标、血清炎性因子水平及不良反应。结果研究组治疗总有效率明显高于对照组(P<0.05);用药前,两组免疫指标、肿瘤标志物指标、血清炎性因子水平差异均无统计学意义(P>0.05),用药后,两组上述指标水平均明显改善,且研究组改善更明显(均P<0.05);研究组毒副反应发生率低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合使用白蛋白结合型紫杉醇和CTLA-4抑制剂,对于NSCLC患者的治疗效果显著,总体疗效优异,具有较高安全性。

CTLA-4Ig融合蛋白对病毒性心肌炎小鼠Foxp3+调节性T细胞的影响

目的探讨细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)对柯萨奇B3病毒(CVB3)病毒性心肌炎(VMC)小鼠的病死率、心肌病理改变、病毒复制和心肌组织中Foxp3+调节性T细胞(Tregs)的影响。方法 106只4～6周龄健康雄性Balb/c小鼠,体质量为12～16 g,随机分为CTLA-4Ig组16只、病毒组40只、IgG组40只及正常对照组10只,CTLA-4Ig组、病毒组和IgG组小鼠腹腔注射半数组织细胞感染量(TCID50)为10-3/L的CVB3 0.15 ml,正常对照组小鼠接种0.15 ml不含病毒的Eagle液。CTLA-4Ig组、IgG组小鼠于接种病毒后6、72 h分别注射CTLA-4Ig(0.1 mg/kg)及IgG(0.1 mg/kg)。接种病毒后第7天处死所有小鼠在光镜下观察心肌病理变化并计算心肌组织病理积分;采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测心肌组织中CVB3 mRNA的表达;采用免疫组织化学法检测Foxp3分子在心肌组织中的表达,并计算Foxp3+Tregs所占浸润细胞数的百分率。结果与病毒对照组相比较,CTLA-4Ig组小鼠病死率降低(80%比50%,P<0.05),心肌组织病理积分下降(1.78±1.05比1.00±0.72,P<0.05),心肌CVB3 mRNA表达减少(3.48±2.89比0.81±1.06,P<0.05);CTLA-4Ig组小鼠心肌组织中Foxp3+Tregs所占浸润细胞数的百分率较病毒组明显增加(9.22±2.28)%比(5.42±1.59)%,(P<0.05)。结论 CTLA-4Ig可减轻VMC小鼠心肌炎症,降低心肌病毒复制及病死率,其机制可能与上调Foxp3+Tregs比、抑制T细胞活化有关。

胃癌抗原相关基因MPS-1的融合表达及兔抗GST-MPS-1抗体的制备

目的在大肠杆菌中表达GST-MPS-1融合蛋白并制备兔抗GST-MPS-1抗体。方法将MPS-1全长cDNA克隆至pGEX-5X载体内,转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导GST-MPS-1融合蛋白的表达。以分离纯化表达的蛋白免疫新西兰兔,制备抗GST-MPS-1抗体。用Western blot和细胞免疫荧光染色法,检测兔抗GST-MPS-1抗体的特异性。结果经测序和酶切鉴定确认,MPS-1基因以正确的方式插入到载体中。此重组表达载体经IPTG诱导后,可高效表达相对分子质量(Mr)为36000的GST-MPS-1融合蛋白。以融合蛋白免疫兔获得的抗血清,经ELISA检测效价达到1×105。Western blot和细胞免疫荧光染色证实,该多克隆抗体能与MPS-1蛋白特异性结合。结论兔抗MPS-1特异性抗体的获得,为进一步检测MPS-1蛋白的表达和功能分析奠定了基础。

胃癌抗原相关基因MPS-1的融合表达及兔抗GST-MPS-1抗体的制备

目的在大肠杆菌中表达GST-MPS-1融合蛋白并制备兔抗GST-MPS-1抗体。方法将MPS-1全长cDNA克隆笔pGEX-5X载体内,转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导GST-MPS-1融合蛋白的表达。以分离纯化表达的蛋白免疫新西兰兔,制备抗GST-MPS-1抗体。用Western blotting和细胞免疫荧光染色法,检测兔抗GST-MPS-1抗体的特异性。结果经测序和酶切鉴定确认,MPS-1基因以正确的方式插入到载体中。此重组表达载体经IPTG诱导后,可高效表达相对分子质量(Mr)为36000的GST-MPS-1融合蛋白。以融合蛋白免疫兔获得的抗血清,经ELISA检测效价达到1×105。Western blotting和细胞免疫荧光染色证实,该多克隆抗体能与MPS-1蛋白特异性结合。结论兔抗MPS-1特异性抗体的获得,为进一步检测MPS-1蛋白的表达和功能分析奠定了基础。

肺结核患者外周血T淋巴细胞CTLA4、TIM-3表达及临床意义

目的探究肺结核(PTB)患者外周血T淋巴细胞细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(TIM-3)表达及临床意义。方法选取2018年1月~2020年1月在全院各科室收治的肺结核患者78例作为研究对象(试验组),另选取同期在本院进行体检的健康者80例作为对照组。流式细胞仪检测受试者外周血T淋巴细胞CTLA4、TIM-3表达水平。二元Logistic回归分析菌阳肺结核存在的影响因素。受试者工作特征曲线(ROC)分析外周血T淋巴细胞CTLA4、TIM-3表达水平对肺结核的诊断价值。结果与对照组相比,试验组外周血T淋巴细胞CTLA4、TIM-3表达水平均升高(P<0.05)。二元Logistic回归分析显示,外周血T淋巴细胞CTLA4、TIM-3表达水平偏高与菌阳PTB的存在相关(P<0.05)。ROC分析显示,外周血T淋巴细胞CTLA4诊断发生肺结核的曲线下面积(AUC)为0.825(95%CI:0.753~0.897),外周血T淋巴细胞TIM-3诊断发生肺结核的AUC为0.837(95%CI:0.770~0.904),联合检测诊断发生肺结核的AUC为0.883(95%CI:0.823~0.943)。结论肺结核患者外周血T淋巴细胞CTLA4、TIM-3水平均升高,是发生肺结核的危险因素,对肺结核的发生具有一定诊断价值,可能作为潜在的诊断肺结核的生物标志物。

MAGE-D4a融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的:构建肿瘤相关抗原MAGE-D4a的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:PCR法从胶质瘤组织cDNA中扩增MAGE-D4a基因全长编码区,连接入原核表达载体pMAL-c2,筛选、鉴定阳性克隆并测序。将重组质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达,表达产物经AmyloseResin亲和层析分离纯化,并且对纯化的融合蛋白进行质谱鉴定。结果:成功扩增了MAGE-D4a基因;重组质粒在Rosetta大肠杆菌中诱导表达出MBP/MAGE-D4a融合蛋白;优化了MAGE-D4a原核表达体系的最适条件;蛋白质谱分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符。结论:获得了高效表达、可溶性的MAGE-D4a重组蛋白,为抗体的制备及血清学分析奠定了基础。

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4融合蛋白对鼠单纯疱疹性角膜基质炎抑制作用的研究

目的 研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原 4融合蛋白 (cytotoxicTlymphocyte associatedantigen 4immunoglobulin ,CTLA 4Ig)对鼠单纯疱疹性角膜基质炎 (herpeticstromalkeratitis ,HSK)的抑制作用。方法 用单纯疱疹病毒 1型 (herpessimplexvirustype 1,HSV 1)接种于BALB/c鼠角膜上建立HSK动物模型 ,采用CTLA 4Ig阻断B7:CD2 8/CTLA 4协同刺激途径 ,抑制T淋巴细胞增殖、分化为效应细胞 ;观察HSK的发病率、临床特征、角膜组织学改变、角膜病毒滴度、迟发型超敏反应及抗原刺激脾细胞分泌细胞因子的情况。结果 CTLA 4Ig可减少小鼠外周血中CD4+T淋巴细胞 ( 81 6 %)及CD8+T淋巴细胞 ( 6 7 9%) ,阻止鼠发生HSK、减轻角膜混浊程度及角膜内炎性细胞的浸润、损伤鼠的迟发型超敏反应能力 ,抑制鼠脾细胞分泌辅助性T淋巴细胞 1型 (T helper 1,Th1)细胞因子 ;但不影响角膜病毒滴度及小鼠死亡率。结论 用CTLA 4Ig阻断B7:CD2 8/CTLA 4协同刺激途径 ,能够抑制T淋巴细胞增殖并抑制CD4+Th1细胞的功能 ,阻止HSK发病 ,减轻HSK的严重程度。

CTLA4及其融合蛋白功能和应用的研究进展

细胞毒T淋巴细胞抗原4（CTLA4或CD152）是T细胞诱导外周免疫耐受的重要负性调节分子,主要表达于被激活的T细胞表面,是机体维持淋巴细胞稳态的关键因子。近期国内外均有文献显示CTLA4以其特异、低毒、高效的特点广泛应用于实验和临床治疗的各阶段。CTLA4融合蛋白作为CT-LA4的胞外结构域和人IgG1重链恒定区构建的重组融合蛋白,可以封闭抗原递呈细胞（APC）上的B7分子,阻断B7-

CTLA-4Ig对B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏Th17和Treg细胞表达的影响与其对小鼠狼疮样病征干预作用的相关性研究

目的:初步探讨B7阻断剂CD28与细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)对B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏Th17和调节性T细胞(Treg细胞)表达的影响与其对小鼠狼疮样病征干预作用之间的相关性。方法:将4个月龄大小雌性B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠16只,随机分为观察组(Ⅰ组)和对照组(Ⅱ组),分别静脉注射CTLA-4Ig及等量PBS,检测小鼠干预前后24 h尿蛋白、ANA抗体、ds-DNA抗体及干预结束2周后血清IL-17A、脾脏中Th17细胞和Treg细胞百分比。结果:末次干预2周后Ⅰ组的24 h尿蛋白、血清ANA及ds-DNA较Ⅱ组下降均有统计学意义(均P<0.05)。末次干预2周后Ⅰ组血清中IL-17A、脾脏Th17细胞比例均较Ⅱ组低,而脾脏的Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例高于Ⅱ组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:CTLA4-Ig具有减轻B6.MRL-Faslpr/J狼疮鼠狼疮样病征的作用;上调Treg细胞、下调Th17细胞可能是CTLA-4Ig减轻B6.MRL-Faslpr/J狼疮鼠狼疮样病征的重要机制之一。

SLE患者CTLA-4基因多态性与ANA、抗dsDNA抗体相关性研究

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4基因(CTLA-4)+49A/G多态性与SLE的相关性以及对ANA、抗dsDNA抗体的影响。方法采用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析92例SLE患者、60例健康对照的CTLA-4基因第一外显子+49基因型多态性,用间接免疫荧光法检测SLE患者ANA与抗dsDNA抗体。结果SLE患者中CTLA-4第一外显子+49 GG型显著高于对照组(P<0.05);92例SLE患者ANA阳性率87.0%,抗dsDNA阳性率为44.6%;ANA阳性组与阴性组的CTLA-4+49基因型分布无显著性差异(P>0.05),抗dsDNA阳性组与阴性组的CTLA-4+49基因型分布有显著性差异(P<0.05),抗dsDNA阳性SLE患者CTLA-4+49 GG型26例(63.4%),抗dsDNA阴性SLE患者,CTLA-4+49 GG型仅14例(27.5%),2组相差显著(P<0.01)。结论CTLA-4第一外显子+49A/G多态性与SLE显著相关,CTLA-4+49A/G多态性与SLE患者ANA无关联,与抗dsDNA抗体存在关联。

传染性单核细胞增多症患儿外周血B淋巴细胞中免疫抑制因子的表达及意义

目的观察4种免疫抑制因子〔程序性死亡受体-1(PD-1)、程序性死亡受体-1配体(PD-L1)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)、含T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白(TIGIT)〕在传染性单核细胞增多症(IM)B淋巴细胞上的表达水平及临床意义。方法以2017年4月—9月湖南省儿童医院收治的IM患者为研究对象(IM组),急性期59例,恢复期34例,20例健康体检儿童为正常对照组。采用流式细胞术分别检测PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT在各组B淋巴细胞上的表达水平及急性期表达量与血浆/血清EBV-DNA含量的相关性。结果与正常对照组比较,IM急性期组患者的PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT在B细胞上均显著升高〔PD-1:5.22(3.15)%比0.76(0.86)%,PD-L1:7.80(5.29)%比0.87(0.09)%,CTLA-4:4.23(6.21)%比0.52(0.28)%,TIGIT:9.78(5.72)%比2.23(1.05)%,均P<0.05〕。IM恢复期组PD-L1、TIGIT在B细胞上的表达较正常对照组明显升高〔PD-L1:4.43(6.27)%比0.87(0.09)%,TIGIT:6.03(5.46)%比2.23(1.05)%,均P<0.05〕,但其升高程度明显低于急性期组(均P<0.05)。对急性期59例患者抽血查EBV-DNA检测结果为(8.44±2.04)×10~5拷贝/mL。相关性分析显示,IM患者急性期TIGIT在B细胞上表达水平与EBV-DNA含量呈正相关(r=0.371,P=0.006);而其余3个指标则无相关性,PD-1:r=0.049,P=0.723;PD-L1:r=0.068,P=0.625;CTLA-4:r=0.662,P=0.659。结论PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT在IM急性期表达上调,随着疾病恢复而表达有所下降,提示在IM发病中有一定作用;同时急性期TIGIT表达水平与血浆/血清EBV-DNA含量高低有关。

银屑病患者外周血单个核细胞中CTLA4 mRNA及蛋白的表达

目的 了解细胞毒性T淋巴细胞相关抗原 4 (CTLA4、CD15 2 )mRNA及蛋白在银屑病患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达情况。方法 利用金葡菌肠毒素B(SEB)刺激PBMC体外增殖 ,采用原位杂交和ABC免疫组化方法检测寻常型银屑病患者PBMC中CTLA4的表达。结果 银屑病患者PBMC中CTLA4mRNA及蛋白的表达明显弱于正常人 ,其中进行期更弱于静止期。

导入细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白基因抑制大鼠移植肝组织中穿孔素mRNA的表达

研究表明，CD28-B7共刺激途径在T淋巴细胞活化中起主要作用，应用细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白（CTLA4Ig）分子阻断CD28-B7信号传导通路，导致T淋巴细胞对抗原的特异性免疫无反应性，从而抑制同种异体器官移植排斥反应。细胞毒性T淋巴细胞（CTL）是排斥反应过程中的主要效应细胞，其胞浆中所含的穿孔素和颗粒酶B是参与细胞作用的主要介质。本实验利用腺病毒为载体，将CTLA4lg基因导入受者体内，观察该基因对移植肝组织中穿孔素mRNA表达的影响。

细胞毒性淋巴细胞相关抗原4融合蛋白对大鼠肝移植急性排斥反应及CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞的影响

目的观察应用细胞毒性淋巴细胞相关抗原4融合蛋白（CTLA4Ig）对大鼠肝移植术后对CD4^＋、CD8^＋T细胞的影响。方法建立大鼠肝移植急性排斥反应模型，随机分为A组：对照组，B组：实验组，CTLA4Ig80μg腹腔注射。检测B7-1和B7-2mRNA的表达，检测CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞浸润，确定排斥反应。结果B组2、3、7dB7—1和B7—2表达均较A组降低（B7—1：0．166±0．012比0．353±0．043；0．375±0．022比0．503±0．058；0．475±0．023比0．799±0．135；P〈0．01；B，7-2：0．170±0．022比0．341±0．040；0．357±0．031比0．475±0．041；0．512±0．103比0．829±0．124；P〈0．01）。B组2、3、7dCD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞浸润均较A组降低（CD4^＋：12．7±3．7比21．0±4．4：15．5±3．8比28．2±5．2；18．6±4．0比35．0±7．0；P〈0．01；CD8^＋：9．3±1．5比16．9±2．9；12．1±2．2比19．9．4-5．3；17．1±3．7比29．0±5．4；P〈0．01）；B组2、3、7dRAI均较A组降低（1．3±0．2比1．9±0．3，P〈0．05；2．0±0．4比2．6±0．5，P〈0．05；2．5±0．7比4．6±1．1，P〈0．01）。B组大鼠的生存期较A组明显延长[（40．9±9．3）d比（9．2±2．1）d，P〈0．01]。结论应用CTLA41g可以诱导大鼠肝脏移植免疫耐受。

宫颈鳞状细胞癌中SMC4、CTLA4表达情况及其早期诊断价值

目的分析宫颈鳞状细胞癌中染色体结构维持蛋白4(SMC4)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)表达情况及其对预后分析、早期诊断的价值。方法选择2016年1月至2017年1月于中国人民解放军空军军医大学唐都医院(以下简称该院)收治的早期宫颈鳞状细胞癌(国际妇产科联盟分期为ⅠA~ⅡB期)患者112例为观察组,选择同期140例怀疑宫颈疾病,并于该院进行病理检查排除宫颈癌的女性为对照组。采集两组受检者清晨空腹静脉血,采用罗氏Cobas 6000化学发光分析仪检测糖类抗原(CA)125、CA199、癌胚抗原(CEA)、人附睾蛋白-4(HE4)水平。采用免疫组化法检测两组病理组织SMC4、CTLA4表达情况,比较两组受检者临床资料及各项检测指标。采用多因素Logistic回归分析影响宫颈鳞状细胞癌发生的危险因素,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同SMC4、CTLA4表达情况宫颈鳞状细胞癌患者的预后。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析SMC4、CTLA4诊断宫颈鳞状细胞癌的效能。结果与对照组比较,观察组宫颈组织SMC4及CTLA4表达评分、CA125、HE4、CA199、CEA水平明显升高,同时观察组有流产史、已绝经女性、首次性交年龄<20岁、首次生育年龄<20岁、孕次>5次、有妇科疾病史患者比例均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析发现,SMC4高表达、CTLA4高表达、有流产史、已绝经、首次性交年龄<20岁、首次生育年龄<20岁、孕次>5次、有妇科疾病史,以及CA125、HE4、CA199、CEA水平升高均为宫颈鳞状细胞癌发生的危险因素(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,SMC4高表达患者(61.54%)和CTLA4高表达患者(60.71%)的总生存率分别明显低于SMC4低表达患者(80.00%)和CTLA4低表达患者(82.14%),差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,SMC4、CTLA4诊断宫颈鳞状细胞癌的曲线下面积(AUC)分别为0.715、0.752,SMC4+CTLA4诊断宫颈鳞状细胞癌的AUC为0.875,二者联合诊断宫颈鳞状细胞癌的AUC大于单独检测(Z=5.714、3.075,P<0.05)。结论SMC4、CTLA4在宫颈鳞状细胞癌中表达明显上调,可能参与宫颈鳞状细胞癌的发生及发展过程,可作为宫颈鳞状细胞癌的早期诊断生物学标志物,二者水平升高可能预示着预后不良。

颗粒蛋白前体通过CTLA4调控调节性T细胞的发育和功能

目的探讨颗粒蛋白前体(PGRN)对调节性T细胞发育和功能的影响及分子机制。方法在野生型和PGRN敲除小鼠模型中,采用流式细胞术检测小鼠中枢及外周各淋巴器官中T细胞各亚群的比例及调节性T细胞比例及其功能相关分子的表达;采用RT-PCR检测调节性T细胞中CTLA4的表达;最后采用调节性T细胞体外抑制试验验证其功能变化。结果与野生型小鼠相比,PGRN敲除小鼠脾脏、胸腺和淋巴结中调节性T细胞的比例均升高,特别发现在脾脏调节性T细胞中CTLA4在基因和蛋白表达水平均显著升高。体外功能试验发现PGRN敲除小鼠的脾脏调节性T细胞的抑制功能也较野生型增强。结论 PGRN在调节性T细胞的发育和功能中扮演重要角色,其机制可能涉及CTLA4。

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4胞外区蛋白阻断小鼠变应性鼻炎的研究

目的探讨变应性鼻炎免疫治疗的新方法。方法构建细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyteassoc iated antigen4,CTLA4)胞外区蛋白的酵母表达系统,以获取具有生物学活性的CTLA4胞外区蛋白;采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏和激发诱导小鼠变应性鼻炎。CTLA4胞外区蛋白组在每次激发前予以CTLA4胞外区蛋白200μg/只腹腔注射,观察小鼠变应性鼻炎相关症状和鼻黏膜形态学改变。结果通过CTLA4胞外区蛋白的酵母表达系统可获得相对分子质量为28000、经蛋白免疫印迹(Westernblot)鉴定的CTLA4胞外区蛋白。该纯化蛋白能显著抑制混合淋巴细胞反应中T细胞的增殖,抑制率为95.4%。变应性鼻炎组小鼠在OVA激发后出现流涕、喷嚏等症状;鼻黏膜出现组织水肿、充血、炎性细胞渗出等形态学改变。CTLA4胞外区蛋白组小鼠鼻部症状不明显,鼻黏膜无明显形态学改变。结论CTLA4胞外区蛋白可阻断小鼠变应性鼻炎的发生,其作用机理可能与其抑制T细胞活化有关。

系膜增生型原发性肾病综合征患儿细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4基因多态性、蛋白表达及外周血淋巴细胞凋亡的研究

系膜增生型（mesangial proliferative glomerulonephritis，MsPGN）原发性肾病综合征（idiopathic nephrotic children，INS）（INS-MsPGN）是我国儿童INS常见的病理类型之一，临床多表现为糖皮质激素（glucocorticoid，GC）不敏感或耐药，是难治性INS中最常见的一种病理类型，其发病机制和GC耐药机制至今尚不清楚。我们于2004年3月-2005年2月进行细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（cytotoxic Tlymphocyte associated antigen 4，CTLA-4，CD152）外显子1＋49位点A／G双态性研究，同时探讨地塞米松（Dex）对外周淋巴细胞凋亡和CTLA-4蛋白表达的影响。