淡紫灰链霉菌X33发酵产物的毒性试验评价

利用小白鼠进行急性和亚急性经口毒性试验,研究抑制柑橘绿霉病菌的淡紫灰链霉菌菌株X33无菌发酵液对小鼠的毒性,并测定小白鼠血常规指标,观测小鼠主要脏器。结果表明,菌株X33无菌发酵液的小鼠LD50>10.0 g/kg,受试物属于无毒级物质;小白鼠经28 d喂养,各试验组小白鼠生长发育良好,体质量、食物利用率及血常规与对照组之间无显著差异;对小白鼠肝、肾、脾、胃、肠、十二指肠、睾丸(或卵巢)等主要脏器进行组织解剖,均未见病变。淡紫灰链霉菌菌株X33无菌发酵液对小鼠安全、无毒。

淡紫灰链霉菌X33水溶性抗真菌产物高产菌株的诱变选育

以淡紫灰链霉菌X33(Streptomyces lavendulae X33)野生菌为出发菌株,柑橘致病菌指状青霉(Penicillium digitatum)为指示菌,诱变选育对柑橘采后致病青霉具有显著抑制作用的水溶性抗真菌产物的高产菌株。经自然分离选育后,采用紫外线、亚硝基胍、五溴尿嘧啶与二氨基嘌呤混合三轮系列诱变处理,筛选获得一株性能稳定的高产诱变菌株BP39,其相对抑菌效价较出发菌株X33提高了279%。表明传统的物理、化学诱变选育方法,可大幅提高野生菌株活性产物产量,是一种简便、快速的育种手段。

淡紫灰链霉菌X33发酵提取物对采后柑橘绿霉病菌的抑制作用

为了揭示淡紫灰链霉菌X33发酵提取物(SLFE)对柑橘采后绿霉病菌——指状青霉Pd165的抑制作用,以SLFE处理的菌株Pd165为研究对象,测定病原菌菌株Pd165细胞完整性及相关细胞内容物的变化。采用扫描电镜、拉曼光谱、荧光光谱和荧光定量PCR,探究SLFE处理对菌丝形态、细胞应答和DNA的影响。结果表明:1.2 mg/mL SLFE处理导致菌株Pd165菌丝干瘪、扭曲折叠,分生孢子梗与分生孢子畸形,且产孢抑制率高达94.86%。SLFE诱导菌丝细胞完整性受损严重,导致胞外上清液中代表脂肪酸、核酸和蛋白质的特征峰增强(1 129,1 330,1 565 cm-1),胞内糖类、可溶性蛋白和丙酮酸含量下降。SLFE处理破坏了菌株Pd165基因组DNA构象和结构,上调了与细胞完整性、产孢、代谢和氧化应激相关的基因表达水平(cej60377.1、oko99898.1、crl18986.1和kzn90160.1)。结论:SLFE处理导致菌株Pd165细胞完整性受损,扰乱细胞内原有的稳态,并严重破坏DNA构象及菌丝体形态。

Streptomyces lavendulae X33遗传转化体系的建立及其内源性启动子活性的比较

【目的】通过对生防菌淡紫灰链霉菌X33(Streptomyces lavendulae X33)建立稳定高效的遗传转化体系、评估启动子permE与内源性启动子启动活性,为菌株X33活性产物的生物合成机制研究、构建高产基因工程菌奠定基础。【方法】以携带整合型质粒pIB139的大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)为供体菌、菌株X33为受体菌进行接合转移;对影响接合转移效率的关键因素(接合转移培养基、热激温度、预萌发时间、供受体比例及抗生素覆盖时间等)进行优化;以质粒pIB139为骨架、β-葡萄糖苷酶(GUS)为报告基因构建启动子活性检测载体,分析4个内源性启动子及permE的启动活性。【结果】通过接合转移方法成功建立了菌株X33的遗传转化体系,其最佳接合转移条件为:孢子于55℃热激10 min,预萌发1 h,供、受体比例为10∶1,以高氏一号为接合转移培养基,混合培养12 h后覆盖抗生素,接合转移效率可达5.8×10^(-5);启动子活性分析表明:链霉菌常用启动子permE的启动活性远高于4个内源性启动子P116、P4565、P5092、P5500。【结论】建立及优化了菌株X33的遗传转化体系,确定了启动子permE在菌株X33中的启动活性。