淡紫紫孢菌引起角膜溃疡1例

患者,男,24岁,2022年9月16日因“右眼畏光、痒、视物不清”1个月余,门诊就诊,右眼有人工晶体的植入,此次受外伤后结膜混合充血,角膜中央溃疡,上皮大疱样改变。角膜溃疡组织标本分离培养出丝状真菌,经质谱鉴定为淡紫紫孢菌,并经rDNA ITS序列测定证实。予伏立康唑抗真菌治疗有效,病情好转,予以出院。

淡紫紫孢菌PLHN与甲氨基阿维菌素苯甲酸盐减量复配防治象耳豆根结线虫

象耳豆根结线虫Meloidogyne enterolobii严重威胁热带农业生产,迫切需要寻求一种兼具生物防治和化学农药减施高效双重优势的绿色防治方法。本研究通过杀线剂毒力测定和生防菌耐药测定,设计系列药菌复配组合并筛选出对象耳豆根结线虫活性好的复配方案。结果表明:3%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(甲维盐)微乳剂对淡紫紫孢菌Purpureocillium lilacinum PLHN的菌丝生长、产孢量及孢子萌发的影响均较小,且对象耳豆根结线虫的LC50为0.107 mg/L,LC99为0.792 mg/L,绝对致死浓度为0.8 mg/L。复配组合中甲维盐0.4 mg/L(减量50%)+75%PLHN和甲维盐0.6 mg/L(减量25%)+50%PLHN对根结线虫2龄幼虫和卵的抑杀作用均优于其他组合。盆栽防效表明:0.6 mg/L甲维盐(减量25%)+50%PLHN复配组合的防效最好,对根结形成有一定的抑制作用,防治效果与全量甲维盐相当,并能促进番茄植株的生长;0.6 mg/L甲维盐+25%PLHN和0.4 mg/L甲维盐+75%PLHN次之。甲维盐和淡紫紫孢菌PLHN的复配使用,不仅甲维盐能减量25%~50%,还能弥补生物防治稳定性较弱、持效期不长等不足,是植物线虫病防治的可选策略之一。

蔬菜根结线虫生防菌淡紫紫孢菌研究进展

根结线虫病已成为我国蔬菜产业健康可持续发展的瓶颈问题。淡紫紫孢菌是多种植物线虫及病原菌的重要天敌,是极具推广潜力的生防菌。简要介绍了根结线虫的危害,着重阐述了淡紫紫孢菌对根结线虫的致病机制,并对其抵御其他病原菌和虫害、定殖影响因子、发酵工艺等研究进行了综述,最后对淡紫紫孢菌的分子机制、次级代谢产物及核心微生物组等研究提出了展望,以期为破解蔬菜根结线虫防治技术壁垒提供一定的思路。

以beta-tubulin基因为选择标记的淡紫紫孢菌遗传转化

[目的]建立稳定的食线虫真菌淡紫紫孢菌遗传转化体系,并获得插入突变体。[方法]介导的方法,以淡紫紫孢菌20-7的分生孢子为受体,将新构建的携带beta tubulin基因的质粒转化进入淡紫紫孢菌的细胞中,通过优化诱导乙酰丁香酮(AS)的浓度、诱导培养时间、农杆菌终浓度OD660值、共培养AS的浓度、共培养时间和共培养温度等因子,建立高效遗传转化体系,获得致病力不同的突变体。[结果]共培养过程中使用萌发孢子是成功建立淡紫紫孢菌遗传转化体系的必要条件;淡紫紫孢菌萌发的孢子与农杆菌EHA105在25℃共振荡培养48 h时,且在共培养阶段当乙酰丁香酮浓度为200μg·mL^(−1)(pH5.5)时转化效率最高,转化效率为1200~3200个转化子/106分生孢子,阳性抗性转化子比率为96%;转化子PCR表明,T-DNA已整合到淡紫紫孢菌的基因组中;Southern杂交验证表明,83.3%的转化子为T-DNA单拷贝插入;成功建立了可靠的淡紫紫孢菌的遗传转化体系,并从20个转化子中筛选到16个致病力变异的突变体。[结论]本研究成功构建了农杆菌介导的、以beta-tubulin基因为选择标记的淡紫紫孢菌高效遗传转化体系,并获得致病力变异的插入突变体,为淡紫紫孢菌的基因功能、致病机制研究及优良菌株选育奠定了基础。

一株淡紫紫孢菌对聚乙烯地膜降解能力的研究

为得到能够高效降解聚乙烯地膜的菌种资源,以青海大学农林科学院植保所提供的一株有降解聚乙烯潜力的菌株M2为研究对象,探究其对不同颜色(白色透明、黑色)聚乙烯地膜的降解能力。经形态学观察和ITS测序,确定菌株M2属于淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum)。以不接菌为对照,在30℃、150 r·min^(-1)摇床培养条件下,分别于培养30、60 d各取样一次,利用高分辨场发射扫描电子显微镜、水接触仪和傅里叶变换红外光谱仪分析该菌株对不同颜色聚乙烯地膜的降解效果。扫描电镜观察发现,经过30 d的降解,两种地膜均出现微小的破碎现象;经过60 d的降解,两种地膜都出现明显的孔洞,表面粗糙度显著增加,黑色地膜被降解的程度更高。通过测定地膜失重率发现,M2对白色透明地膜降解率为7.27%,对黑色地膜的降解率可达8.45%;降解30 d后,黑色地膜疏水性较白色透明地膜显著降低5.51%,降解60 d后,黑色地膜疏水性较白色透明地膜显著降低21.35%。经傅里叶变换红外光谱仪分析,M2向白色透明膜片稳定的化学结构中引入醚键,黑色膜片则被引入羟基和醚键,黑色膜片的吸收峰强度大于白色地膜。研究初步认定,菌株M2对黑色聚乙烯地膜有较好的降解能力。

淡紫紫孢菌YES和粉红螺旋聚孢霉67-1组合对黄瓜根结线虫病的防效评价

为了提高生防菌的防病效果及其稳定性,本研究以黄瓜根结线虫病为靶标病害,对淡紫紫孢菌(原名为淡紫拟青霉)YES与粉红螺旋聚孢霉67-1混和使用的防病效果进行了评价。平板对峙实验表明两菌株相容性较好,在马铃薯和黄瓜根际分泌物培养基上无拮抗作用;通过测定两菌株对根结线虫的卵寄生性及其无菌发酵滤液对2龄幼虫致死作用,确定YES菌株孢子悬浮液(2×106孢子/m L)对根结线虫的卵寄生作用(51.0%)显著高于菌株67-1(44.0%);而菌株67-1代谢产物48 h后对根结线虫2龄幼虫的致死率(100%)高于菌株YES(77.4%)。土壤中2龄幼虫接种量为1000线虫/100 g土时,将菌剂YES和67-1单独或混和加入育苗基质中(终浓度为106孢子/g基质)并在移栽时穴施50 g菌剂(106孢子/g),结果表明两菌株单独使用和混和使用的防治效果接近,在20%~30%左右;根据blissing independence模型,两菌株之间表现为拮抗作用。土壤中线虫卵密度为398卵/100 g干土时,菌剂YES和67-1混和使用可显著抑制黄瓜根系上根结的形成,防病效果为63.7%,显著高于两菌剂单独使用的防效33.0%和41.3%。两菌株之间表现为累加效应。上述结果表明,两个主要作用机理不同的生防菌混和使用可以延缓根结线虫的侵染,提高防病效果。但土壤中线虫虫态和密度影响依据blissing independence模型判定生防菌之间的相容性。该结果对杀线虫复合生防菌剂的研制及使用技术改进具借鉴意义。

淡紫紫孢菌菌株的分离、鉴定及其对柑橘木虱的致病性

从柑橘木虱中分离出一株对柑橘木虱具强致病性的菌株ZJPL08,观察该菌株的培养特征和形态特征,克隆并分析其rDNA ITS序列,并测定该菌株不同浓度的分生孢子悬浮液对柑橘木虱的致病性。结果表明：ZJPL08的菌落在PDA培养基上呈淡紫色至深紫色,富生粉质状分生孢子;3~5个轮生瓶梗,大小为（7.5~9.0）μm×（1.8~3.0）μm;分生孢子卵形或纺锤形,大小为（1.5~2.8）μm×（1.3~2.5）μm。该菌株的rDNA ITS序列与GenBank中多个淡紫紫孢菌菌株的对应序列相似性达100%,因此,菌株ZJPL08鉴定为淡紫紫孢菌。在相同浓度条件下,接种后培养时间越长,柑橘木虱的死亡率越高;培养时间相同时,孢子悬浮液浓度越高,柑橘木虱的死亡率越高。

淡紫紫孢菌对黄瓜根结线虫的防治效果

根结线虫(Meloidogyne spp.)是一类严重危害经济农作物并广泛分布于世界各地的重要的植物病原线虫。淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum)能够寄生于根结线虫和孢囊线虫卵,对根结线虫有很强的抑制作用。为了检验淡紫紫孢菌对黄瓜根结线虫的防治作用,测定了淡紫紫孢菌pt361对黄瓜根结线虫卵的寄生率、幼虫致死率,并分析了淡紫紫孢菌的代谢产物白灰制菌素,同时测定了其在土壤中的存活状态。结果表明,淡紫紫孢菌pt361菌株对线虫卵寄生率为72.6%。其菌株混合发酵液对黄瓜根结线虫幼虫致死率达95.2%。对pt361菌株代谢产物进行检测,发现有白灰制菌素A和B,其浓度分别为98.9%和71.2%,这可能与淡紫紫孢菌防治根结线虫的机制有关。综上所述,淡紫紫孢菌能有效防治黄瓜根结线虫。

淡紫紫孢菌不同菌株天然V_A和V_E产力检测

试验比较了不同来源的淡紫紫孢菌菌株产天然VA和VE的能力。结果表明:11株淡紫紫孢菌菌株中,3株产VE,7株产VA。其中,VE含量最高的菌株为PL07,含量为287.25μg/g菌丝鲜重;VA含量最高的菌株为PL02,含量为2.68μg/g菌丝鲜重。不同菌株间产VA和VE的差别较大,菌株产VA和VE的能力与菌株来源没有相关性。

淡紫紫孢菌防治采后番茄果实灰霉病

本文通过孢子萌发检测、平板生长抑制法和果实病害防治试验,测定了淡紫紫孢菌Purpureocillium lilacinus PL36-1防治储藏期番茄果实灰霉病的效果。结果表明,菌株PL36-1发酵滤液不仅能够抑制灰葡萄孢分生孢子萌发和芽管伸长,而且可以抑制灰葡萄孢菌丝生长。对峙培养的菌株PL36-1显著抑制灰葡萄孢的菌丝生长,菌丝生长抑制率可达到74.45%,菌株PL36-1产生的挥发性物质也对灰葡萄孢菌丝生长有一定的抑制作用。菌株PL36-1发酵液处理樱桃番茄果实后,能有效控制番茄果实灰霉病的发生,含有2×10~8孢子/m L的发酵液10 d的防治效果达70.64%。

淡紫紫孢菌的筛选、鉴定及产壳聚糖酶固体发酵条件优化

目的:从全国各地土样中分离纯化出一株产壳聚糖酶活性较高的真菌M7a,并优化其固体发酵产酶条件。方法:综合形态学观察和18S rDNA序列测定进行鉴定,采用单因素和响应面设计确定其最佳固体发酵产壳聚糖酶条件。结果:菌株M7a被鉴定为淡紫紫孢菌,其最佳固体发酵产壳聚糖酶条件为:10 g/L胶体壳聚糖+5 g/L葡萄糖,10 g/L蛋白胨,豆粕麸皮质量比7∶5,初始pH值为6.0,发酵温度33℃及发酵时间5.5 d。产壳聚糖酶优化后达到16.80 U/mL,是初始条件的5.1倍。SDS-PAGE和酶谱分析发现该菌株产胞外分子质量为40.0 ku的壳聚糖酶,且无同工酶。结论:本研究筛选鉴定出一株新颖且产壳聚糖酶活力较高的淡紫紫孢菌M7a,优化了固体发酵条件,提高了产酶水平,为淡紫紫孢菌壳聚糖酶的分离纯化和应用提供了理论基础。

淡紫紫孢菌微菌核防治黄瓜根结线虫病及土壤环境对其定殖的影响

微菌核是丝状真菌产生的一种休眠结构,由菌丝特化形成。实验室前期研究发现,淡紫紫孢菌在特定的培养条件下可以产生微菌核,并具有较强的抗逆性和稳定性。本研究通过实验室生测和温室盆栽试验,研究了淡紫紫孢菌微菌核对根结线虫的寄生作用和对黄瓜根结线虫病的防治效果,以及不同土壤条件对生防菌定殖的影响。结果表明,微菌核对根结线虫卵的寄生率随着接种浓度的提高而增加,当浓度为300MS/m L时寄生率超过50%。黄瓜移栽时接种淡紫紫孢菌微菌核,用量为300个/100 g土时对根结线虫防效为44.7%,在育苗基质中提前接入微菌核可防效提高36.0%。土壤水分、温度和p H值对淡紫紫孢菌微菌核的定殖均有显著影响(P<0.05),含水量过高或过低不利于生防菌增殖,含水量为10%~15%,20 d时淡紫紫孢菌种群数量提高6~9倍。本研究为淡紫紫孢菌微菌核制剂的研发和应用提供了理论指导。

淡紫紫孢菌亲环蛋白PlCYP6互作蛋白的筛选

以淡紫紫孢菌中参与盐胁迫响应的亲环蛋白PlCYP6为研究对象,采用免疫沉淀联合质谱分析及酵母双杂交等技术筛选淡紫紫孢菌中与PlCYP6互作的蛋白。结果显示,受PlCYP6特异钓取的482个蛋白的功能主要涉及细胞代谢。其中,乙醇脱氢酶1(alcohol dehydrogenase I,ADH1)与PlCYP6直接互作,且PlCYP6的WD40 repeat结构域为二者间互作的关键区域。同时,PlCYP6和ADH1均受NaCl胁迫诱导表达。上述研究结果表明,ADH1为PlCYP6的候选互作蛋白,这为进一步解析淡紫紫孢菌响应盐胁迫机制奠定了基础。

淡紫紫孢菌微菌核发酵滤液生防活性及代谢组学分析

淡紫紫孢菌是一种重要的生防真菌,在特定培养条件下可产生抗逆结构—微菌核。本文通过室内生测和温室盆栽试验,研究了淡紫紫孢菌微菌核发酵滤液对植物病原菌和根结线虫的抑制作用。结果表明,微菌核发酵滤液具有较强的杀线抑菌活性,其中对核盘菌生长抑制率达到70.5%,并显著降低菌核数量,滤液稀释10倍后对根结线虫二龄幼虫的致死率达到50%以上。用量为10m L/株时对根结线虫病防效达到44.9%,黄瓜株高和茎粗分别增加21.6%和38.4%。同时,基于LC-MS构建了淡紫紫孢菌微菌核培养代谢组。分析表明,微菌核形成过程中芥酸、胡椒酚和泛酸等抑菌物质以及丁酸、咪唑乙酸等杀线化合物相对含量显著增加。本研究为揭示淡紫紫孢菌生防机制奠定了基础,为微菌核制剂的研发提供了理论依据。

一株淡紫紫孢菌的分离、鉴定及生物学特性研究

【目的】探究一株分离自柑橘粉虱座壳孢子座的淡紫紫孢菌在不同培养条件下的生长量、产蛋白酶和几丁质酶的活性,为淡紫紫孢菌作为生物防治剂提供理论基础。【方法】采用组织分离法将来自红江橙叶片粉虱座壳孢子座上的菌株进行分离纯化,结合形态学特性和分子生物学方法进行鉴定,并采用Folin-酚法和DNS法测定其蛋白酶和几丁质酶的活性。【结果】菌株ZJPL1812经形态学观察和ITS序列分析鉴定为淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum),菌株最佳培养温度为30℃、适宜pH值为5.0~9.0;以磷酸二氢铵为氮源、麦芽糖为碳源时最有利于菌丝生长,以蛋白胨为氮源、蔗糖为碳源时产蛋白酶活性最高,以硝酸铵为氮源、可溶性淀粉为碳源时几丁质酶活性最高。【结论】该菌株可以利用多种不同氮源、碳源,具有广泛的酸碱适应能力和较强的环境适应性,所产蛋白酶和几丁质酶活性较高,表明其具有一定的生物防治潜力。

一株淡紫紫孢菌12ID-1的分离及其对埃及吹绵蚧的致病性

从埃及吹绵蚧虫(Icerya aegyptiaca)体中分离出一株虫生真菌菌株12ID-1,对其进行了形态观察和r DNA ITS序列分析,同时优化了该菌株的产孢条件和测定了其不同浓度的孢子悬浮液对埃及吹绵蚧2龄若虫的致病性。结果表明:根据形态特征和分子鉴定结果,该菌株12ID-1为淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum);菌株12ID-1在SMAY培养基、28℃和光暗交替(14 L:10 D)的条件下产孢能力最强;致病性结果表明,当孢子浓度高于1×10^6孢子/m L时,随着12ID-1孢子浓度的增加,埃及吹绵蚧的校正死亡率越高,LT50值递减,在孢子浓度为1×10^8孢子/m L时,第7天校正死亡率接近100%,LT50为3.99 d;随着接种后时间的延续,LC50值递减,在接种后7 d,LC50值为1.3×10^6孢子/m L。可见淡紫紫孢菌12ID-1对埃及吹绵蚧具有较强的毒力,在埃及吹绵蚧生物防治中具有广阔的应用前景。

阿维菌素与淡紫紫孢菌复配防治设施黄瓜根结线虫田间药效试验

随着设施蔬菜的发展,复种指数增加,根结线虫的发生面积扩大并且周年发病,导致蔬菜减产严重。为筛选出防治设施黄瓜根结线虫的药剂,开展了生物杀线剂复配防治设施黄瓜根结线虫的田间药效试验。结果表明,5%阿维菌素减量25%(4500 g/hm^2)复配淡紫紫孢菌减量50%(3000 g/hm^2)与单用5%阿维菌素6000 g/hm^2、单用淡紫紫孢菌6000 g/hm^2防效相当,定植60 d后防效仍能达到60%以上,淡紫紫孢菌与阿维菌素复配可延缓根结线虫对阿维菌素抗性的产生,又可弥补生防菌单独使用稳定性不好的缺点,有推广前景。

淡紫紫孢菌在萝卜上的应用效果

近几年设施蔬菜栽培中,根结线虫发生频率越来越高,危害程度逐年加大,已经成为制约蔬菜生产一大难题。淡紫紫孢菌是高科技生物技术研制开发而成的微生物,属于新型纯微生物活孢子制剂,内寄生性真菌,是一些植物寄生线虫的重要天敌,能够寄生于卵,也能侵染幼虫和雌虫,可明显减轻多种作物根结线虫、胞囊线虫、茎线虫等植物线虫病的危害。2019年饶阳县农业农村局农技人员开展了淡紫紫孢菌生物防治根结线虫试验示范。

生防菌淡紫紫孢菌与低剂量杀线虫剂复配防治蔬菜根结线虫的研究

根结线虫是一种重要植物病原线虫,常用杀线虫剂噻唑膦、阿维菌素等进行防治。研究生防真菌淡紫紫孢菌颗粒剂与低剂量杀线虫剂复配对根结线虫的防治效果,结果显示当浓度低于100μg·mL^(-1)时,噻唑膦对淡紫紫孢菌的菌落生长和孢子萌发无显著影响;且低剂量噻唑膦与淡紫紫孢菌复配对线虫二龄幼虫的致死率高于单独使用噻唑膦或淡紫紫孢菌的。盆栽及大棚试验都表明阿维菌素减量25%、或噻唑膦减量25%、或噻唑膦减量50%后分别与淡紫紫孢菌颗粒剂复配,对根结线虫的防效与单独使用阿维菌素、噻唑膦或淡紫紫孢菌相当。因此,噻唑膦及阿维菌素与淡紫紫孢菌复配,可减少农药使用量,并弥补生物防治稳定性不强等缺点,是可选的植物线虫病害防治策略之一。

乙酸对淡紫紫孢菌生长发育及杀线虫能力的影响

为探究乙酸对淡紫紫孢菌生长发育及杀线虫能力的影响,比较了不同乙酸浓度下淡紫紫孢菌的生长速率、孢子萌发率、菌落形态及产孢量的变化。在0~200μg·mL^(-1)的浓度范围内,乙酸对淡紫紫孢菌的生长发育无抑制作用;淡紫紫孢菌在PDB中培养3 d后,发酵液中乙酸含量为146μg·mL^(-1),随着培养时间的增加,养分不断消耗,发酵液中乙酸产量逐渐减少;当碳源匮乏时,无乙酸产生。在碳源匮乏时,淡紫紫孢菌能够将乙酸根作为碳源利用,在3~10 mg·mL^(-1)的乙酸根浓度范围内,淡紫紫孢菌表现出较好的生长态势。此外,乙酸能够增强淡紫紫孢菌的杀线虫效果,随着乙酸浓度的增加,抑制根结线虫卵孵化和杀二龄幼虫(J2)的效果呈上升趋势。