西藏淡红蜡伞菌多糖的提取及单糖组成研究

采用正交试验优化西藏淡红蜡伞菌粗多糖提取工艺条件,通过蒽酮-硫酸法比色测定提取粗多糖中的总糖含量,并应用气相色谱法对淡红蜡伞菌多糖中单糖的组成进行分析。结果表明,西藏淡红蜡伞菌多糖最佳提取条件是提取时间4h,温度80℃,料水比1:10,乙醇沉淀浓度85%,多糖得率为6.52%;比色测定粗多糖中的多糖含量在49.17%～69.86%。色谱分析得出该多糖是由5种单糖组成的杂多糖。

硫磺菌原变种与淡红变种培养特性的研究

对采自中国长白山不同海拔高度、不同森林垂直分布带内、不同寄主上的硫磺菌原变种及淡红变种进行了培养特性的比较研究,二者在培养特性的宏观方面存在着差异。

淡红蜡伞子实体水溶性粗多糖提取方法探索

以多糖得率为指标,对淡红蜡伞[Hygrophorus russula(Fr.)Qu啨l.]子实体预处理方式和提取次数进行了比较,并采用正交试验,进一步优化淡红蜡伞多糖提取的条件,结果表明淡红蜡伞干燥子实体提取粗多糖较佳的方法是:干燥子实体粉碎过60目筛,以蒸馏水为提取剂,提取2次可得到约4.3%的粗多糖;正交试验表明,各因素对淡红蜡伞多糖得率的影响程度依次为乙醇沉淀浓度、料水比、提取温度和提取时间,最佳提取条件是提取时间4h,温度80℃,料水比1∶10,乙醇沉淀浓度85%,在此条件下多糖得率为6.52%。

天蓝淡红链霉菌SIPI 1482及其突变株的研究 Ⅱ.钠离子对突变株SIPI 1482-NS-4恢复合成柔红霉素的调节作用

:SIPI1482 - NS- 4是柔红霉素产生菌天蓝淡红链霉菌 SIPI1482经紫外诱变获得的阻断突变株 ,没有合成柔红霉素的能力。但在 GM培养基中添加 2 % Na Cl后 ,该突变株的菌体生长量虽有所减少 ,却能恢复合成柔红霉素2 2 %～ 2 4% (以亲株为对照 )。研究还发现使突变株恢复合成柔红霉素起主要作用的是 Na+ ,而非高渗透压、Cl- 或整个 Na

天蓝淡红链霉菌SIPI 1482及其突变株的研究I.发酵过程中细胞结构的变化

用光学显微镜和透射电子显微镜 ,研究天蓝淡红链霉菌 SIPI1482及其突变株 SIPI1482 - NS- 4在发酵过程中细胞形态和超微结构的变化。发现两者最大的不同在于 :亲株能合成柔红霉素 ,产抗期细胞内含物丰富 ,但脂肪颗粒较少 ;突变株不能合成柔红霉素 ,细胞中含有丰富的脂肪颗粒。由于柔红霉素的生物合成与脂肪酸的合成密切相关 。

天兰淡红链霉菌(S.coeruleorubidus)原生质体再生株激光辐照的研究

本文首次报导天兰淡红链霉菌（Ｓ．ｃｏｅｒｕｌｅｏｒｕｂｉｄｕｓ）原生质体再生株铜蒸气激光辐照的研究结果，从中得到生产罐中柔红霉素发酵单位比其出发株提高１２．９％的高产株Ｃ８２，其最高发酵单位达国内最好水平，已在国内应用。

连续稀释法研究淡红忍冬体外抑菌作用

目的探讨淡红忍冬的体外抑菌作用。方法采用连续稀释法测定不同浓度淡红忍冬水煎剂对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎球菌、卡他球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、福氏志贺菌、鼠伤寒沙门菌的抑制作用。结果淡红忍冬水煎剂对除溶血性链球菌和肺炎球菌外的其他6种致病菌的抑制作用都较强。结论淡红忍冬在体外对多种致病菌有明显的抑制作用。

天蓝淡红链霉菌SIPI-1482中酮还原酶基因dnrU的阻断突变研究

目的:研究柔红霉素产生菌天蓝淡红链霉菌SIPI-1482中酮还原酶基因dnrU阻断后的产物(13s)-13-二氢柔红霉素及其他发酵产物的变化。方法:利用同源重组的原理,以大肠杆菌质粒pUC18为基础构建了dnrU基因交换质粒,通过在SIPI-1482染色体上的dnrU基因中插入安普霉素抗性基因来筛选dnrU的阻断突变株。结果和结论:PCR验证表明成功地阻断了dnrU基因。dnrU基因敲除后,重组菌发酵产物中(13s)-13-二氢柔红霉素消失,而其他发酵中间产物也有一定变化。

天蓝淡红链霉菌SIPI1482菌株graORF1同源基因的克隆

将含有ａｃｔⅢ基因的质粒ｐＩＪ２３４６及其带有ｇｒａＯＲＦ１～４质粒ｐＩＪ５２０５～５２０８作探针与天蓝淡红链霉菌ＳＩＰＩ１４８２菌种的染色体ＤＮＡ杂交。ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ显示ｐＩＪ２３４６能与２．１ｋｂ的ＢａｍＨⅠ片段杂交；ｇｒａＯＲＦ１能与约６．０ｋｂ和约１０ｋｂＢａｍＨⅠ以及约２０ｋｂＢｃｌⅠ片段杂交。除２．１ｋｂＢａｍＨⅠ片段外，其余的同源片段克隆到质粒ｐＵＣ１８形成几个克隆子，并经ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ确认这些同源片段的存在。含有约１０ｋｂ同源ＤＮＡ片段的ｐＹＧ２５，当转化加利利链霉茵３１６１７时，发现能大大地促进该菌株色素的分泌，表明约１０ｋｂＢａｍＨⅠ同源片段含有某种调节基因。当将质粒ｐＹＧ１１的约６ｋｂＢａｍＨⅠ同源片段克隆到ｐＩＪ６８０构成杂合质粒ｐＹＧ２６并导入变青链霉菌ＴＫ６４，发现同源基因的导入能引起变青链霉菌ＴＫ６４表型的显著变化，表明约６ｋｂ同源基因编码了某些与分化有关的基因。

淡红舌与病性证素相关性的研究

目的:探讨淡红舌与病性证素的相关性,促进中医诊断规范化的发展。方法:对7680例当代名医医案、1018例临床病例中淡红舌与病性证素的关系进行研究,并用双层频权剪叉算法计算出淡红舌对病性证素的诊断权值。结果:气虚、气滞、湿、痰等病性证素不仅在淡红舌病例中出现频率较高,而且淡红舌对它们的诊断权值也较高。结论:病性证素中,淡红舌与气虚、气滞、湿、痰的关系较为密切。

Na^+调节天蓝淡红链霉菌突变株SIPI1482-NS-4合成柔红霉素的机制研究

SIPI 1482 - NS- 4是柔红霉素的产生菌天蓝淡红链霉菌 SIPI 1482的阻断突变株 ,不能合成柔红霉素。研究发现 Na+对 SIPI1482 - NS- 4恢复合成柔红霉素具有调节作用。在 GM培养基中添加 2 % Na Cl后 ,虽然突变株的菌体生长量降低 ,细胞脂肪含量下降 ,电镜还观察到细胞中脂肪颗粒显著减少 ,但不产抗生素的负突变株 SIPI 1482 - NS- 4却恢复合成柔红霉素 ,推测 Na+的这种调节作用可能同初级代谢与次级代谢之间的代谢流向有关。检测突变株 SIPI 1482 - NS- 4在 GM培养基和 GM+2 % Na Cl培养基中 ,催化柔红霉素前体丙酰 Co A合成的甲基丙二酰 Co A羧基转移酶 (MCT)和甲基丙二酰 Co A脱羧酶 (MDC)的活力变化 ,结果发现在 GM培养基中 MCT酶和 MDC酶的活力很低 ,但添加了 2 % Na Cl后 ,伴随着柔红霉素的恢复合成 ,MDC酶活力迅速提高。说明 SIPI 1482 - NS- 4的阻断突变与前体丙酰 Co A有关 ,Na+诱导了 MDC酶 ,从而前体丙酰 Co A重新合成 ,突变株恢复合成柔红霉素。亲株 SIPI 1482在 GM培养基中 ,MDC酶的活力很低 ,但 MCT酶的活力和柔红霉素的生物合成有一定的相关性 ;培养基添加 2 % Na Cl后 ,MDC酶的活力上升 ,柔红霉素产量提高。说明在 SIPI1482中 ,柔红霉素前体丙酰 Co A主要是通过 MCT酶途径催化而生成的 。

应用原生质体技术选育天兰淡红链霉菌

本文报道柔红霉素产生菌——天兰淡红链霉菌原生质体的制备和再生方法，并从再生菌落中筛选得到摇瓶发酵单位提高５％的高产菌株３０＃。将再生高产株经铜蒸气激光辐照，得到在生产罐中发酵水平比对照出发菌株提高１２．９％的高产菌株８２＃。

天蓝淡红链霉菌SIPI1482中柔红霉素C-14羟化酶基因的克隆和序列分析

根据 Gen Bank中公布的两种柔红霉素 C- 14羟化酶基因 (dox A)的序列 ,设计引物并通过 PCR扩增方法从天蓝淡红链霉菌 SIPI14 82中扩增出约 1.4 kb的目的片段 ,其中包括了长度为 12 6 9bp的 dox A全长序列 ,而同时从波赛链霉菌 SIPI4 0 14 1中没有扩增出基因片段。将扩增出的 dox A基因和载体质粒 p Blue-script KS连接后构建了质粒 p YG5 10 ,通过 PCR扩增、酶切鉴别及测序分析发现 ,天蓝淡红链霉菌 SIPI14 82来源的 dox A基因和链霉菌 C5来源的序列完全相同。

一种淡红侧耳多糖的制备工艺

研究了淡红侧耳多糖的提取工艺条件,并对其进行脱色脱蛋白处理。以单因素实验为基础,采用响应曲面法优化多糖的提取条件;选用大孔阴离子交换树脂D315脱色、Sevage法脱蛋白。建立的淡红侧耳多糖较佳提取工艺条件为提取温度95℃,提取时间3.9 h,固液比(g∶m L)1∶30.6,在此条件下淡红侧耳多糖的平均得率为13.44%;D315的脱色率为81.37%,多糖保留率为82.21%;Sevage法蛋白脱除率为61.39%,多糖保留率为93.29%。经响应面优化及脱色脱蛋白处理,可获得得率高且色素蛋白含量低的淡红侧耳多糖。

天蓝淡红链霉菌SIPI-1482的dauW基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

柔红霉素产生菌—天蓝淡红链霉菌(Streptomyces coeruleorubidus)SIPI-1482位于基因组上dnrX和drrB之间的基因被克隆和测序,它与dnrW有较高的同源性,将其命名为dauW,并提交GenBank获得登录号EF523565,根据保守域推测dauW所编码的蛋白属于FAD依赖的氧化还原酶类。将dauW分别克隆至表达载体pET-28a(+)、pET-32a(+),转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达。初步实验结果表明dauW在BL21(DE3)中的表达能增加宿主对柔红霉素的抗性,推测该基因可能与天蓝淡红链霉菌对柔红霉素的自身抗性有关。

天兰淡红链霉菌(S.coeruleorubidus)激光高产株的选育

本文首次报导铜蒸气激光选育天兰淡红链霉菌（S．coeruleorubidus）的研究结果，曾得到生产罐中抗生素发酵单位比其对照株提高14．7％的高产株，最高发酵单位曾达国内最好水平，已在国内应用。

淡红侧耳子实体多糖的分离纯化及结构探析

以淡红侧耳子实体为原料,采用水提醇沉法进行提取,大孔阴离子交换树脂D315脱色,Sevage法脱蛋白,得到淡红侧耳子实体粗多糖;利用DEAE-纤维素-52和Sephadex G-150对粗多糖进行纯化;采用高效凝胶过滤色谱法和柱前衍生高效液相色谱法进行分子质量测定和单糖组成分析;通过紫外光谱扫描、红外光谱扫描及刚果红实验对其结构进行初步测定;并对其理化性质进行研究。结果表明,经纯化后得到3种组分PDP-1-1、PDP-2-1和PDP-3-1;相对分子质量分别为12. 9、10. 6和2 753. 7 k Da; PDP-1-1由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和岩藻糖5种单糖组成,PDP-2-1由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖6种单糖组成,PDP-3-1由甘露糖、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖4种单糖组成;紫外扫描三组分均不含蛋白质和核酸,红外扫描均显示具有多糖特征吸收峰; PDP-1-1和PDP-3-1具有三股螺旋结构。

淡红忍冬的生药学初研

目的:对滇产忍冬属植物淡红忍冬Lonicera acuminate Wall.的生药学初步研究。方法:采用来源鉴别、性状鉴别、显微鉴别以及理化鉴别的方法对淡红忍冬进行生药学初研并与正品忍冬进行性状和显微特征比较。结果:淡红忍冬生药学特征明显,与忍冬Lonicera japonica Thunb.的药材性状和显微特征有明显差异,所含主要成分与忍冬大体一致。结论:为扩大金银花类的药用品种、鉴别、临床应用及制定其质量标准提供基础性研究资料。

用近紫外线和氯化锂复合选育柔红霉素产生菌——天蓝淡红链霉菌(S. Coeruleorubidus)高产株的研究

本文首次报道了用近紫外线(NUV)与LiCl复合选育柔红霉素产生菌——天蓝淡红链霉菌(S.Coeruleorubidus)的实验结果。实验获得一株柔红霉素高产突变株,在发酵罐上应用,柔红霉素产率比出发菌株高10%。

家蚕淡红卵突变体rep-1基因的精细定位

家蚕为卵滞育的鳞翅目昆虫,正常家蚕滞育卵刚产下时为浅黄色,随后逐渐转变为淡红色,并最终转变为深褐色。淡红卵突变体(rep-1)是在家蚕品种C1(H)中发现的一种新的卵色突变体,所产卵在36 h左右逐渐转变为淡红色后基本保持不变,不再继续转化为深褐色。遗传分析表明rep-1突变体由一对常染色体上的隐性基因控制。通过图位克隆技术将淡红卵突变体rep-1基因定位到第5连锁群,介于S2674-N4和S2674-N53两个分子标记之间,物理距离大约88 kb,其中包括3个候选基因,分别为BGIBMGA003693、BGIBMGA003501和BGIBMGA003500。分析3个基因的结构,其CDS没有发生变化,但BGIBMGA003501和BGIBMGA003693的基因组序列之间出现52 bp缺失。对BGIBMGA003501和BGIBMGA003693的卵期表达谱分析表明其在产卵后24~48 h蚕卵转色期均上调表达,在野生型与突变型之间出现显著表达差异。以上结果可为进一步解析淡红卵突变体rep-1的形成机制奠定了前期基础。