2019年陕西省三带喙库蚊中淡色库蚊浓核病毒的分离与鉴定

目的本研究对2019年陕西省三带喙库蚊标本中分离的病毒(SX1943)进行病毒学和分子生物学鉴定。方法蚊虫研磨液接种组织培养细胞,对分离物进行病毒学和病毒分子遗传学分析。结果在2019年于陕西省采集的三带喙库蚊标本中获得1株病毒分离物(SX1943),将该病毒接种至C6/36细胞后第3天发生明显细胞病变,表现为细胞圆缩、聚集和脱落等,分离物可稳定传代。然而,该批标本在BHK-21细胞连续传代3次均未发现显著细胞病变。SX1943病毒接种至C6/36细胞后经电子显微镜(负染)观察,可见大量圆形病毒颗粒,直径约25 nm。SX1943病毒基因组扩增与测序结果显示,该病毒基因组序列全长为3594 nt,共编码3种蛋白,分别为非结构蛋白(NS1和NS2)和衣壳蛋白(VP),3种蛋白的基因长度分别为2376 nt、1098 nt和1136 nt。经病毒分子遗传进化分析发现,SX1943病毒与浓核病毒亚科Brevidensovirus病毒属中的淡色库蚊浓核病毒(Culex pipiens pallens Densovirus,CppDNV)处于同一进化分支,上述结果提示SX1943病毒为CppDNV。结论陕西省三带喙库蚊中分离到CppDNV。

云南省德宏州2007年和2010年蚊虫及蚊媒病毒调查

目的：调查云南省德宏州蚊虫和蚊媒病毒分布特点。方法2007年和2010年的7月在德宏州5个县市利用诱蚊灯采集蚊虫标本，采用C6/36和BHK-21细胞分离病毒，RT-PCR和序列分析方法鉴定病毒分离物。结果共采集到6属29种43634只蚊虫，其中三带喙库蚊构成比高达78.69%，中华按蚊构成比为14.77%，其他蚊种数量较少。从蚊虫中分离到6株病毒，经RT-PCR和进化分析表明，其中3株为基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒（JEV），均分离自三带喙库蚊；1株盖塔病毒（GETV）分离自三带喙库蚊；2株淡色库蚊浓核病毒（CppDNV）分别分离自三带喙库蚊和迷糊按蚊。结论三带喙库蚊是德宏州优势蚊种和蚊媒病毒主要传播媒介，当地存在基因Ⅰ型JEV、GETV和CppDNV的流行，并与以往云南省及我国其他地区的分离株有较近亲缘关系。

云南省弥勒县2009年蚊媒病毒分离和鉴定

目的了解云南省红河州弥勒县蚊虫中虫媒病毒的分布特点,为虫媒病毒病防治提供科学依据。方法 2009年7月在弥勒县采集蚊虫标本,用细胞培养法分离病毒,对病毒分离物进行分子生物学鉴定。结果从采集到的三带喙库蚊4400只和中华按蚊2200只中分离到9株阳性分离物,经分子生物学鉴定,7株分离物为流行性乙型脑炎(乙脑)病毒(JEV),均分离自三带喙库蚊;2株分离物为淡色库蚊浓核病毒(CppDNV),分离自三带喙库蚊和中华按蚊。结论首次在红河州弥勒县分离到乙脑病毒,从病原学证实弥勒县是乙脑流行区。流行株同源性和分子遗传进化分析证实为基因Ⅰ型乙脑病毒,为滇东南地区首次分离。

云南省西部边境新分离蚊媒病毒分子生物学特征分析

目的分析云南中缅边境地区新分离蚊媒病毒的分子生物学特征，以分析其遗传进化特征。方法2010年1—12月在云南省德宏州芒市和瑞丽市监测点每月一次用诱蚊器采集蚊虫，用BHK-21和C6／36细胞分离病毒，阳性分离物用RT—PCR法进行鉴定及序列测定和分析。结果从采获的7属42种69209只蚊虫中分离到13株流行性乙型脑炎病毒（Japaneseencephalitisvirus，JEV），4株盖塔病毒（Getahvirus，GETV），1株西藏环状病毒（Tibetorbivims，TIBOV），7株淡色库蚊浓核病毒（Culexpipienspallensdensovirus，CppDNV）。JEVE基因进化分析证实，新分离的13株JEV均属基因I型，与云南其它地区和邻近省份流行株亲缘关系较近，且抗原和毒力位点未发生明显改变。4株GETVE2基因与云南其它地区分离株同源性高，亲缘关系近。新分离环状病毒的VPl基因与TIBOV亲缘关系最近，而与云南环状病毒（Yunnanorbivirus）存在明显差异。7株CppDNV的NSl基因与以往云南及其他省区流行株具有较高的同源性和亲缘关系。结论首次证实该地区存在基因I型JEV、GETV、TIBOV和CppDNV流行，这些流行株均具有较为稳定的遗传特征和地域特征。