淫羊藿苷预处理增强人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的影响

背景:人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞促炎功能有一定抑制作用,具有抗炎等药理活性的淫羊藿苷是否能增强人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的抑制作用尚不明确。目的:探究淫羊藿苷预处理人牙周膜干细胞后对M1型巨噬细胞的影响。方法:分离培养原代人牙周膜干细胞,并进行鉴定。对THP-1细胞进行诱导,采用免疫荧光染色及PCR进行M1型巨噬细胞鉴定。用含浓度10^(-7),10^(-6),10^(-5),10^(-4)mol/L淫羊藿苷的α-MEM完全培养基培养人牙周膜干细胞1,3,5,7 d,采用CCK-8法筛选合适的淫羊藿苷浓度进行实验。将α-MEM完全培养基、未处理的人牙周膜干细胞α-MEM条件培养基及淫羊藿苷预处理24 h的人牙周膜干细胞α-MEM条件培养基与RPMI-1640完全培养基以1∶1的比例对M1型巨噬细胞进行条件培养,分别为对照组、未处理组及预处理组,24 h后RT-PCR法检测M1型巨噬细胞炎症因子的mRNA表达情况;ELISA法检测M1型巨噬细胞炎症因子的蛋白表达情况;Western blot检测M1/M2型巨噬细胞表面标记物及核转录因子κB通路相关蛋白的表达。结果与结论:(1)CCK-8检测结果显示,10^(-7),10^(-6),10^(-5),10^(-4)mol/L淫羊藿苷对人牙周膜干细胞均无细胞毒性,且从第5天起,各浓度都提高了细胞活力,促进细胞增殖,选择10^(-4)mol/L淫羊藿苷进行后续实验。(2)RT-PCR法及ELISA检测结果显示,与对照组相比,未处理组及预处理组均降低了M1型巨噬细胞白细胞介素1β、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α的表达与分泌(P<0.05),且预处理组低于未处理组(P<0.05)。(3)Western blot检测结果显示,与未处理组相比,预处理组CD86的表达明显降低(P<0.05);与对照组相比,未处理组和预处理组M2型巨噬细胞表面标志物CD206的表达均升高(P<0.01),且预处理组明显高于未处理组(P<0.01);M1型巨噬细胞经24 h条件培养后,与对照组相比,核转录因子κB/P65的表达在未处理组和预处理组均有降低(P<0.01),p-IκBα的表达仅在预处理组降低(P<0.01);与未处理组相比,预处理组核转录因子κB/P65和p-IκBα的表达均显著降低(P<0.05),而IκBα在3组中的表达差异无显著性意义。(4)上述结果证实,淫羊藿苷增强了人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的抑制作用,此作用可能与抑制了巨噬细胞的核转录因子κB信号通路相关。

淫羊藿苷含药血清促进3种细胞共培养体系中软骨细胞增殖和干细胞成软骨分化

背景:关节软骨损伤修复能力十分有限,组织工程技术为修复受损软骨提供了新的治疗方案,其中软骨细胞、骨髓间充质干细胞和滑膜间充质干细胞之间的相互影响和诱导作用是自体软骨损伤愈合的基础。目的:构建软骨细胞-骨髓间充质干细胞-滑膜间充质干细胞共培养体系用以模拟软骨细胞体内微环境,并探究其最佳细胞接种比例,同时观察淫羊藿苷含药血清对该体系中软骨细胞增殖和干细胞成软骨分化的影响。方法:提取、培养、鉴定大鼠膝关节软骨细胞、骨髓间充质干细胞和滑膜间充质干细胞,按不同细胞接种比例构建软骨细胞-骨髓间充质干细胞-滑膜间充质干细胞非接触共培养体系,共培养72 h后观察软骨细胞增殖活性和表型能力,选择综合效应最佳的共培养体系;用淫羊藿苷溶液(0.25 mg/m L)灌胃新西兰大白兔制备淫羊藿苷含药血清,对照组共培养体系用含体积分数为10%胎牛血清、1%双抗的高糖DMEM培养液培养,实验组共培养体系在此基础之上加入体积分数为10%淫羊藿苷含药血清进行干预,24,48 h后检测两组软骨细胞增殖活性和Ⅱ型胶原表达,14 d后采用免疫荧光染色检测骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞成软骨分化情况。结果与结论:(1)3种细胞以不同比例共培养时均可正常贴壁生长,当软骨细胞、骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞接种比例为2∶1∶1时,共培养体系中软骨细胞表现出最佳增殖活性和表型能力;(2)与对照组相比,实验组培养24 h后软骨细胞增殖活性和Ⅱ型胶原表达显著升高(P<0.01),48 h后两组仍有差异(P<0.05),培养14 d后两组骨髓间充质干细胞和滑膜间充质干细胞出现明显的软骨分化,部分细胞呈现圆形或椭圆形,胞浆Ⅱ型胶原免疫荧光染色为阳性,实验组荧光强度明显高于对照组(P<0.01);(3)结果表明,以非接触共培养方法可以成功建立软骨细胞-骨髓间充质干细胞-滑膜间充质干细胞共培养体系且细胞比例为2∶1∶1时软骨细胞增殖活性和表型能力最佳;同时淫羊藿苷含药血清具有促进该体系中软骨细胞增殖及骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞成软骨分化的作用。

淫羊藿苷对抑郁症模型小胶质细胞表型转化的调控作用

探索淫羊藿苷抗抑郁的作用机制,将SPF级KM小鼠分为空白组、模型组、盐酸氟西汀组(10 mg/kg)、淫羊藿苷高(50 mg/kg)、低(25 mg/kg)剂量组。除空白组外,其余各组小鼠采用56 d慢性不可预知温和应激建立抑郁症模型。造模第1 d开始灌胃给予各组小鼠相应药物,连续56 d。于给药后第53~56 d,进行行为学测试。末次给药后,取材。酶联免疫吸附剂实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测脑组织匀浆白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、五羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、多巴胺(dopamine,DA)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)水平;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)检测脑组织中IL-6、IL-10、诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、分化簇206(cluster of differentiation 206,CD206)mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)检测脑组织iNOS、CD206蛋白表达。体外培养小鼠小胶质细胞(BV-2),采用细胞增殖与毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测淫羊藿苷的细胞毒性。BV-2细胞暴露于100μg/mL脂多糖及15μg/mL、25μg/mL的淫羊藿苷24 h后,收集细胞。免疫荧光技术检测细胞iNOS、CD206蛋白表达。研究结果表明,慢性不可预知温和应激致抑郁症模型制备成功,淫羊藿苷可降低抑郁症小鼠脑组织IL-6水平及IL-6、iNOS mRNA表达,升高脑组织IL-10、5-HT、DA、NE水平及IL-10、CD206 mRNA表达;降低脑组织iNOS蛋白,升高CD206蛋白表达;改善模型小鼠抑郁症样行为。淫羊藿苷可降低LPS刺激的BV-2细胞iNOS蛋白表达,升高CD206蛋白表达。结果表明,淫羊藿苷抑制小胶质细胞M1表型转化,促进M2表型转化,从而改善模型小鼠抑郁样行为。

淫羊藿苷调控mTOR/Akt/CREB通路对高糖诱导的足细胞自噬及凋亡的影响

目的 探讨淫羊藿苷对高糖诱导的足细胞自噬、凋亡及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路的影响。方法 将小鼠足细胞MPC5分为5组:正常对照组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)、高糖组(30 mmol·L^(-1)葡萄糖)、淫羊藿苷组(30 mmol·L^(-1)葡萄糖+5μmol·L^(-1)淫羊藿苷)、GDC-0349组(30 mmol·L^(-1)葡萄糖+50μmol·L^(-1)GDC-0349)、淫羊藿苷+GDC-0349组(30 mmol·L^(-1)葡萄糖+5μmol·L^(-1)淫羊藿苷+50μmol·L^(-1)GDC-0349)。培养48 h后,噻唑蓝法检测MPC5细胞活力;吖啶橙染色观察MPC5细胞自噬情况;流式细胞术检测MPC5细胞凋亡;蛋白印迹法检测MPC5细胞自噬[微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ、自噬相关蛋白(Beclin-1)]、凋亡[Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)]和mTOR/Akt/CREB通路相关蛋白的表达。结果 与正常对照组比较,高糖组MPC5细胞活力、Bcl-2、磷酸化mTOR(p-mTOR)/mTOR、磷酸化Akt(p-Akt)/Akt、磷酸化CREB(p-CREB)/CREB蛋白表达水平显著降低(P<0.05),自噬能力增强,自噬体表现出橙色荧光,细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与高糖组比较,淫羊藿苷组MPC5细胞活力、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、Bcl-2、p-mTOR/mTOR、p-Akt/Akt、p-CREB/CREB蛋白表达水平显著升高,自噬能力进一步增强,自噬体数量增多,自噬体呈现出砖红色荧光(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05);GDC-0349组MPC5细胞活力、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、Bcl-2、p-mTOR/mTOR、p-Akt/Akt、p-CREB/CREB蛋白表达水平显著降低,自噬能力减弱,自噬体数量减少,自噬体表现出橙色荧光(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);淫羊藿苷+GDC-0349可逆转淫羊藿苷对高糖诱导MPC5细胞的作用效果(P<0.05)。结论 淫羊藿苷通过激活mTOR/Akt/CREB通路促进高糖诱导的足细胞自噬抑制细胞凋亡。

基于不同炮制方法的淫羊藿黄酮类成分含量研究

试验旨在寻求羊脂油炮制淫羊藿的内在机理,以甘肃产淫羊藿为研究对象,用羊脂油、牛脂油、猪脂油进行炮制,分别提取有效成分,利用紫外分光光度法和高效液相色谱法进行有效成分含量测定,比较不同炮制品和生品总黄酮、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ和朝藿定C的含量。结果显示:各炮制品总黄酮含量均显著低于生品(6.84%),其中羊脂油炙含量(5.69%)显著高于其他炮制品;生品和羊、牛脂油炙炮制品中淫羊藿苷含量无显著差异,羊脂油炙炮制品为0.77%,牛脂油炙炮制品为0.70%,生品为0.70%,猪脂油炙炮制品中淫羊藿苷含量为0.50%,较生品和其他炮制品显著降低;羊脂油炙、牛脂油炙淫羊藿中宝藿苷Ⅰ含量无显著性差异,分别为0.08%和0.07%,但显著高于生品(0.05%)和猪脂油炙淫羊藿(0.04%);羊、牛、猪脂油炙炮制品中朝藿定C含量分别为0.29%、0.27%和0.24%,均显著低于生品(0.57%)。得出结论:淫羊藿最佳炮制辅料为羊脂油,其次为牛脂油。

淫羊藿苷对前列腺癌原位移植瘤小鼠肿瘤生长及细胞周期的影响

目的探讨淫羊藿苷对前列腺癌原位移植瘤SCID小鼠肿瘤生长、细胞周期、磷酸酶及张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因表达的影响。方法40只雄性SCID小鼠,根据随机数字表法随机均分为模型对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组10只。采用SCID小鼠前列腺腺体背外侧包膜内注射人前列腺癌LNCaP细胞株悬液的方法构建前列腺癌原位移植瘤小鼠模型。造模2周后,模型对照组予以0.9%氯化钠注射液,低剂量组予以10 mg/kg淫羊藿苷,中剂量组予以40 mg/kg淫羊藿苷,高剂量组予以80 mg/kg淫羊藿苷。灌胃处理1次/d,治疗时间为5周。在灌胃给药治疗前及治疗5周后,分别取各组小鼠5只,对比各组肿瘤质量、肿瘤体积、肿瘤抑制率。采用流式细胞学方法检测LNCaP细胞周期,计算各周期比值。采用实时定量PCR检测前列腺肿瘤组织中PTEN mRNA相对含量。结果治疗后,模型对照组肿瘤质量、肿瘤体积较治疗前明显增加(P<0.05);中剂量组及高剂量组肿瘤质量、肿瘤体积较治疗前明显降低(P<0.05),且显著低于模型对照组(P<0.05)。中剂量组及高剂量组肿瘤抑制率显著高于低剂量组(P<0.05)。中剂量组及高剂量组肿瘤细胞S期较治疗前明显增加(P<0.05),且显著高于模型对照组(P<0.05);中剂量组及高剂量组肿瘤细胞G_(0)/G_(1)期较治疗前明显减少(P<0.05),且显著低于模型对照组(P<0.05)。中剂量组及高剂量组PTEN mRNA相对含量较治疗前明显增加(P<0.05),且显著高于模型对照组(P<0.05)。结论淫羊藿苷可能通过上调PTEN表达、改变细胞周期分布来抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,从而有效抑制前列腺癌原位移植瘤SCID小鼠肿瘤生长。

淫羊藿活性成分抗卵巢癌作用机制研究进展

卵巢癌是女性生殖系统三大癌症之一,其病死率位居妇科恶性肿瘤之首。淫羊藿具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效,临床常用于生殖系统疾病的治疗。本文通过综述国内外相关文献,发现淫羊藿主要活性成分淫羊藿苷、淫羊藿素和淫羊藿次苷Ⅱ,主要从促进细胞凋亡、影响细胞的侵袭和转移、阻滞细胞周期、诱导细胞自噬、促进细胞焦亡等5个方面发挥抗卵巢癌作用,可见淫羊藿可以通过多靶点、多途径治疗卵巢癌。

淫芎颗粒质量标准研究

目的建立淫芎颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法对制剂中川芎、白芍进行定性鉴别;采用高效液相色谱法同时测定制剂中芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、淫羊藿苷、甘草酸铵的含量,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相为乙腈-0.3%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为230 nm,柱温为30℃,进样量为10µL。结果薄层色谱斑点清晰,分离度良好,且阴性对照无干扰。芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、淫羊藿苷、甘草酸铵的质量浓度分别在8.886~222.156µg/mL、3.935~98.385µg/mL、3.805~95.118µg/mL、4.457~111.416µg/mL、4.574~114.360µg/mL、3.512~87.794µg/mL、4.274~106.850µg/mL范围内与各自峰面积线性关系良好(r≥0.9991,n=7);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于3.0%;平均加样回收率分别为99.68%,99.19%,100.31%,100.70%,99.74%,98.77%,98.99%,RSD分别为1.57%,1.89%,2.77%,1.52%,1.58%,1.27%,2.18%(n=9);平均含量分别为5.743,0.547,0.472,1.426,1.376,1.982,1.480µg/mL(n=2)。结论该方法操作方便、结果准确、专属性和重复性好,可用于淫芎颗粒的质量控制。

基于网络药理学与实验验证探讨淫羊藿苷抗急性溃疡性结肠炎的作用机制

目的基于网络药理学与实验验证探讨淫羊藿苷治疗急性溃疡性结肠炎的作用机制。方法通过TCMSP数据库评估淫羊藿苷药动学;采用STRING平台和Cytoscape软件构建淫羊藿苷-潜在靶点PPI网络,并对网络进行拓扑分析,获取淫羊藿苷治疗急性溃疡性结肠炎的核心靶点;对核心靶点进行GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析;使用AutoDock软件分子对接模拟淫羊藿苷与核心基因的结合活性,预测淫羊藿苷治疗急性溃疡性结肠炎的作用机制。通过小鼠和RAW264.7细胞实验对网络药理学研究结果进行验证,构建急性溃疡性结肠炎模型,并对富集分析筛选出的相关信号通路中关键蛋白的表达进行分析。结果网络药理学分析表明,淫羊藿苷治疗急性溃疡性结肠炎潜在核心基因为Akt1、ERK、TP53、HSP90AA1、BCL2L1、TNF、JNK、EGFR,并且可能与MAPK信号通路相关,且分子对接的结果显示淫羊藿苷与JNK、HSP90AA1、ERK、TP53具有较好的结合活性。体内体外实验结果表明,淫羊藿苷可通过抑制MAPK信号通路,降低TNF-α、IL-1β、iNOS等炎性因子的分泌,减弱肠道免疫反应。结论淫羊藿苷可能通过调节MAPK信号通路改善小鼠急性溃疡性结肠炎的症状,抑制小鼠炎症反应。

伏牛山阴坡和阳坡的野生淫羊藿不同部位的红外光谱特性

为实现淫羊藿部位的鉴别和质量控制,对伏牛山阴坡和阳坡的野生淫羊藿不同部位红外光谱的差异进行了分析比对。将采集的野生淫羊藿样品分为根、须根、茎、叶4部分,阴干,粉碎,过筛后,利用傅里叶变换红外光谱仪获得原始红外光谱,平滑降噪,基线校正,归一化处理后求导获得其二阶导数红外光谱。比对了阴坡和阳坡野生淫羊藿4个部位红外光谱的差异,并结合小气候特征分析差异形成的原因。结果显示:伏牛山野生淫羊藿4个部位的原始和二阶导数红外光谱均存在差异。对于二阶导数红外光谱,根在1466,1452 cm^(-1)以及须根在1466,1453 cm^(-1)处有双峰,根在938 cm^(-1)以及须根937 cm^(-1)处有单峰,可以与茎、叶进行区分;须根在1260 cm^(-1)处的吸收峰强而锐,可与根进行区分;茎在1648 cm^(-1)处有宽峰,可以与其他部位进行区分;叶在1440 cm^(-1)处有明显吸收峰,可以与其他部位进行区分。阳坡和阴坡野生淫羊藿所含化学成分整体相似,但也存在差异。阳坡淫羊藿物质积累量较阴坡的多,尤其是根和茎,可能与两个地区的光照时长和光照强度不同有关。

模拟微重力条件下淫羊藿苷通过LncBGSF/miR-194-3p/OGN轴促进骨形成和成骨细胞分化的实验研究

目的探讨淫羊藿苷(ICA)对模拟微重力诱导的骨代谢异常和成骨细胞分化功能障碍的保护作用机制。方法细胞旋转培养系统和小鼠后肢卸载方法模拟细胞与动物层面的微重力环境,并观察ICA的骨保护作用。RNA测序联合生物信息学分析筛选目标Lnc RNA;核质分离技术及FISH确定目标Lnc RNA的亚细胞定位;loss-and gain-实验以及荧光素酶报告验证其与mi R-194-3p靶向关系;之后在动物层面验证Lnc BGSF-mi R-194-3p/OGN轴调控模拟微重力诱导的骨丢失和成骨细胞分化功能障碍的作用机制;最后探讨ICA通过调控Lnc BGSF/mi R-194-3p/OGN轴在模拟微重力环境下发挥骨保护的作用机制。结果模拟微重力环境下,骨组织代谢以及成骨细胞分化功能均受到不同程度的抑制,ICA治疗后表现出骨保护作用;NONMMUT085049.1(课题组命名为Lnc BGSF)是骨正相关Lnc RNA,主要位于细胞质,其表达与微重力暴露时间呈依赖性下调,且作为mi R-194-3p的分子海绵,调控OGN的表达;此外,ICA可以促进Lnc BGSF表达且使其核质发生改变,进而调控OGN的表达水平。结论模拟微重力环境下,ICA可能通过Lnc BGSF/miR-194-3p/OGN轴调控骨代谢和成骨细胞分化进程。

基于网络药理学和分子对接技术探讨三七-淫羊藿治疗股骨头坏死的作用机制

目的运用网络药理学和分子对接技术探究三七-淫羊藿治疗股骨头坏死(ONFH)的作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台筛选三七-淫羊藿的活性成分及其作用靶点,利用GeneCards®数据库、OMIM®数据库筛选ONFH的相关靶点,取交集后获得三七-淫羊藿治疗ONFH的潜在作用靶点。通过Cytoscape软件构建药物-活性成分-作用靶点网络,筛选关键活性成分。通过STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白-蛋白相互作用网络,筛选核心靶点。使用DAVID数据库对潜在作用靶点进行功能富集分析和通路富集分析。最后,对关键活性成分与核心靶点蛋白进行分子对接验证。结果最终获得三七-淫羊藿活性成分30个及其作用靶点214个,ONFH的相关靶点2112个。取交集后得到三七-淫羊藿治疗ONFH的潜在作用靶点131个。槲皮素、木犀草素、山柰酚、脱水淫羊藿素为三七-淫羊藿治疗ONFH的关键活性成分,蛋白激酶B1、血管内皮生长因子A、原癌基因c-Jun、肿瘤蛋白p53、白细胞介素1β为三七-淫羊藿治疗ONFH的核心靶点。三七-淫羊藿治疗ONFH的潜在作用靶点主要涉及对脂多糖的反应、对外来刺激的反应、细胞缺氧反应等生物过程,以及白细胞介素17信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路、糖尿病并发症中的晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路等信号通路。分子对接结果显示,关键活性成分与核心靶点蛋白均具有较好的结合活性(结合能≤-5 kcal/mol)。结论三七-淫羊藿治疗ONFH的作用机制可能与调控免疫-炎症反应、调控破骨细胞与成骨细胞的凋亡和分化、改善血运等有关。

淫羊藿治疗骨质疏松骨折的网络药理学分析

目的利用网络药理学原理探讨淫羊藿治疗骨质疏松骨折的分子作用机制。方法利用中药系统药理学分析平台(TCMSP数据库)筛选淫羊藿的主要活性成分和作用靶点,应用GeneCards数据库、OMIM数据库、PharmGkb数据库、TTD数据库、DrugBank数据库预测骨质疏松骨折的相关靶点,制作维恩图获取淫羊藿与骨质疏松骨折的共同靶点,运用Cytoscape软件绘制中药-成分-疾病-靶点调控网络,利用STRING数据库进行蛋白相互作用网络的构建与分析。最后,使用R语言和Bioconductor平台进行基因本体富集分析(GO)和基因相互作用通路分析(KEGG)。结果淫羊藿主要是通过23种活性成分、121个作用靶点及155个生物学通路发挥作用治疗骨质疏松骨折。其中主要活性成分为槲皮素、山奈酚和木犀草素;主要核心靶点有AKT1、TP53、Jun、HSP90AA1和CASP3等;关键通路为脂质和动脉粥样硬化信号通路。结论通过网络药理学揭示了淫羊藿通过多成分、多靶点、多通路治疗骨质疏松骨折的作用特点,为进一步的研究和实验工作提供了基础。

淫羊藿总黄酮对去势大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b的影响及与骨密度的相关性

目的:探讨淫羊藿总黄酮(TFE)对去势大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)及骨密度的影响。方法:10月龄雌性SD大鼠去卵巢法建立大鼠模型,随机数字表法分为空白对照组(N)、模型对照组(O)、TFE低(T_(L))、中(T_(M))、高(T_(H))剂量组,β-雌二醇(E)组各10只,灌胃干预90d。用抗酒石酸酸性磷酸酶试剂盒测定TRACP-5b含量,用小动物分析软件测定活体全身骨密度。结果:(1)TRACP-5b水平O组明显高于N组,具有显著性差异(P<0.01),T_(L)、T_(M)、T_(H)和E组TRACP-5b水平明显低于O组,具有显著性差异(P<0.01)。(2)与N组比较,O、T_(L)、T_(M)、T_(H)和E组腰椎骨密度均下降,唯有O组呈显著性差异(P<0.05);与O组比较,T_(M)、T_(H)组腰椎骨密度升高、呈显著性差异(P<0.05),E组腰椎骨密度升高、具有显著性差异(P<0.01)。(3)与N组比较,O、T_(L)、T_(M)、T_(H)和E组全身骨密度均下降,唯有O组差异有统计学意义(P<0.05);与O组比较,T_(L)、T_(M)、T_(H)和E组全身骨密度均升高,唯有E组呈显著性差异(P<0.05)。结论:TFE可以降低去势大鼠血清中TRACP-5b的含量,并与去势大鼠腰椎骨密度、全身骨密度呈一定的量效关系。

淫羊藿中异戊烯基黄酮的鉴别和含量测定的综合实验设计

为加深学生对传统中药淫羊藿的药效成分异戊烯基黄酮的认识,设计了综合化学实验.将淫羊藿粉末经乙醇热回流提取,蒸馏浓缩得到总浸膏,再将总浸膏溶于水,依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,得到石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相.将三相的有机物分别用薄层色谱展开,在紫外灯下观察254 nm和365 nm荧光颜色和强度,同时用硫酸、氯化铁显色,表明各相均含有黄酮.以淫羊藿苷为标品,通过作标准曲线结合紫外光谱对其各相的异戊烯基黄酮含量进行平行测定,同时考察了方法的重复性和样品的稳定性.

巫山淫羊藿资源、人工种植及活性成分转化应用研究进展

巫山淫羊藿是《中华人民共和国药典》规定的淫羊藿属植物5个品种之一,其用药历史悠久、药效显著、活性成分含量高、种植面积大,是当前主流品种之一。但现代分析发现巫山淫羊藿的淫羊藿苷含量低,达不到《中华人民共和国药典》规定量,而被单列,致使其开发应用受限、种植面积有所缩减。综述我国巫山淫羊藿资源状况、形态与生长特征、人工种植、主要活性物质种类与功效及其转化、加工制备等新近研究文献,为促进巫山淫羊藿人工种植、加大其加工制备及其产品开发应用产业化提供参考。

淫羊藿提取物对老龄种公鸡精液品质、生殖内分泌激素及繁殖性能的影响

本试验旨在探究不同水平淫羊藿提取物对老龄种公鸡精液品质、生殖内分泌激素及繁殖性能的影响。选取72只体重[(2.94±0.01)kg]相近、健康的65周龄大午金凤父母代种公鸡,随机分成4组,每组6个重复,每个重复3只,单笼饲养。对照组饲喂基础饲粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在基础饲粮中添加0.05%、0.10%和0.15%的淫羊藿提取物。饲养试验持续7周。试验第4周(69周龄)和第7周(72周龄)收集精液,测定精液品质;试验第4周和第7周采集血液,测定血清生殖内分泌激素水平;试验最后2周收集合格种蛋以重复为单位入孵,用于测定繁殖性能指标。结果显示:与对照组相比,1)试验第4周时,各试验组种公鸡精子活力显著提高(P<0.05),精子畸形率显著降低(P<0.05);试验Ⅱ、Ⅲ组有效精子数显著增加(P<0.05);试验Ⅱ组精子密度显著提高(P<0.05)。试验第7周时,试验Ⅱ、Ⅲ组种公鸡精液量显著增加(P<0.05);试验Ⅲ组精子活力显著提高(P<0.05)。2)试验第4周时,试验Ⅱ、Ⅲ组精浆谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)活性显著降低(P<0.05);试验第7周时,试验Ⅲ组精浆GOT、GPT活性显著降低(P<0.05)。3)试验第4周时,各试验组精浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著提高(P<0.01);试验Ⅱ、Ⅲ组精浆总抗氧化能力(T-AOC)显著提高(P<0.05)。试验第7周时,各试验组精浆总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性显著提高(P<0.05);试验Ⅱ、Ⅲ组精浆丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05);试验Ⅱ组精浆T-AOC显著提高(P<0.05)。4)试验第4周时,各试验组血清促性腺激素释放激素(GnRH)水平显著降低(P<0.05),血清促黄体素(LH)和睾酮(T)水平显著提高(P<0.05);试验Ⅱ、Ⅲ组血清促卵泡素(FSH)水平显著提高(P<0.05)。试验第7周时,各试验组血清GnRH水平极显著降低(P<0.01);试验Ⅱ、Ⅲ组血清FSH、LH水平显著提高(P<0.05);试验Ⅲ组血清T水平显著提高(P<0.05)。5)试验Ⅱ、Ⅲ组受精率和入孵蛋孵化率显著提高(P<0.05);试验Ⅲ组受精蛋孵化率和入孵蛋健雏率显著提高(P<0.05),死胚率显著降低(P<0.05)。综上所述,淫羊藿提取物可以通过调控生殖内分泌激素,提高精浆抗氧化能力,减少精子损伤,从而改善精液品质,提高老龄种公鸡的繁殖性能,且其在饲粮中的适宜添加量为0.15%。

基于多组学与网络药理学探究淫羊藿对后备母猪发情的作用

旨在揭示淫羊藿对后备母猪发情的作用及其机理。本试验选择210~220日龄,体重(99.547±1.987)kg,发育成熟且符合配种条件的后备待配二元母猪32头,随机分为对照组和试验组,每组16头母猪,每个重复1头母猪。对照组饲喂基础日粮,试验组在饲喂基础日粮的基础上补充淫羊藿粗提物50 mg·d^(-1)。试验饲喂28 d。结果表明,试验组母猪发情提前,血清FSH、LH和E_2显著增加(P<0.05)。卵巢转录组结果表明,检测出477个上调差异mRNAs,754个下调差异mRNAs。GO富集分析发现,差异的mRNA主要富集在运输囊泡、脂肪细胞分化、节律行为、发情周期等过程;KEGG富集分析发现,差异的mRNA主要富集在紧密连接、碳水化合物代谢、刺猬信号通路、GnRH分泌和PI3K-AKT信号通路等信号通路。卵巢代谢组结果表明共有1616个代谢物上调,1254个代谢物下调。KEGG富集分析表明,差异代谢物主要富集在α-亚麻酸代谢、ATP转运蛋白、亚油酸代谢、β-丙氨酸代谢、氨基苯甲酸盐降解、生物素代谢等通路。网络药理学分析结果表明淫羊藿作用卵巢的潜在作用靶点共161个。PPI互作网络得到degree前10的蛋白作为核心靶点,根据得分依次为TP53、SRC、AKT1、CCND1、TNF、ESR1、EP300、ERBB2、JAK2、PARP1。GO分析结果表明,淫羊藿作用卵巢的靶点主要参与了蛋白磷酸化、MAPK级联反应的正调控、生物节律、基因表达的正调控、细胞凋亡过程的负调控、细胞内钙离子浓度的正调控、RNA聚合酶II启动子转录的正调控等生物学过程。KEGG分析结果显示,靶点蛋白信号通路富集在PI3K-Akt信号通路、细胞周期、细胞衰老、HIF-1信号通路、孕激素介导的卵母细胞成熟等途径。以上结果从活体、代谢、转录和分子层面揭示了淫羊藿对后备母猪发情的影响和作用途径,本研究发现饲喂淫羊藿能够改变后备母猪卵巢转录与代谢模式,显著提高FSH、LH和E_2水平,进而促进母猪发情,淫羊藿的主要成分能够与TP53、SRC、AKT1、CCND1、TNF、ESR1、EP300、ERBB2、JAK2、PARP1结合发挥调控作用。本研究为淫羊藿应用提高后备母猪发情利用率提供理论依据。

基于优化MaxEnt模型的我国淫羊藿潜在适生区预测研究

目的 预测当前气候条件下淫羊藿在我国的潜在适生区,为淫羊藿资源可持续利用及生产规划提供依据。方法 基于经筛选后的267个淫羊藿物种分布数据及8个环境因子,利用R语言kuenm包优化最大熵(MaxEnt)模型参数,分析影响淫羊藿分布的主要环境因子,并预测其潜在分布范围。结果 优化后模型运行结果遗漏率=0.044 8、Akaike信息量准则=6 409.884 5、曲线下面积=0.986,说明模型准确度较高。基于环境因子贡献率与刀切法表明,当前影响淫羊藿分布的关键环境因子主要有7月份平均降水量、2月份平均最高气温、9月份平均降水量、最冷季度降水量、降水量变异系数、温度季节性变化标准差及最暖季度降水量。模拟结果显示,当前气候条件下我国淫羊藿总适生区面积约221.14×10^(4)km^(2),集中分布在我国中部及中南部地区。其中高适生区面积约23.13×10^(4)km^(2),中适生区面积约73.78×10^(4)km^(2),低适生区面积约124.22×10^(4)km^(2)。结论 本研究可为淫羊藿资源人工栽培规划及可持续利用提供参考。

淫羊藿苷在炎症环境下对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响

背景:研究表明慢性根尖周炎是常见的炎症性骨破坏疾病之一,淫羊藿苷可以促进成骨分化、抑制骨吸收,可能对慢性根尖周炎引起的骨破坏起到保护作用。目的:探讨在脂多糖刺激的炎症环境下淫羊藿苷对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响。方法:应用脂多糖刺激MC3T3-E1细胞建立体外炎症环境,采用CCK-8检测脂多糖最佳作用质量浓度及作用时间;CCK-8检测在1μg/mL脂多糖刺激下淫羊藿苷的最佳作用质量浓度;碱性磷酸酶染色、Real-time PCR及Western blot检测炎症环境下淫羊藿苷对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响;Real-time PCR及Western blot检测炎症环境下淫羊藿苷对MC3T3-E1细胞炎症相关因子白细胞介素1β、白细胞介素6表达的影响。结果与结论:①CCK-8结果显示,淫羊藿苷的最佳作用质量浓度为0.1μg/mL;②在炎症环境下,淫羊藿苷增强了碱性磷酸酶的表达,促进了成骨细胞分化;③与脂多糖组相比,脂多糖+淫羊藿苷组成骨相关因子碱性磷酸酶、Runx2表达升高;④与脂多糖组相比,脂多糖+淫羊藿苷组炎症相关因子白细胞介素1β、白细胞介素6表达水平下降;⑤结果提示,脂多糖能导致MC3T3-E1细胞成骨分化能力减弱并加重炎症反应,淫羊藿苷对其具有保护作用。