淫羊藿多糖提取、分离纯化、结构特征和生物活性研究进展

淫羊藿为我国传统补益中药,具有补肝肾、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等功效。淫羊藿多糖是淫羊藿发挥临床功效的主要成分之一,具有增强机体免疫力、抗病毒、抗衰老、抗氧化、抗辐射等药理作用。本文对淫羊藿多糖提取分离纯化、生物活性以及结构特征等方面的研究进展进行综述,为淫羊藿多糖进一步研究与开发利用提供依据。

淫羊藿多糖的硫酸化修饰及其对IBDV感染细胞的影响

按正交试验设定氯磺酸-吡啶法的9种修饰条件,对淫羊藿多糖(EPS)进行硫酸化修饰,得到9种硫酸化淫羊藿多糖(sEPS),用MTT法比较了9种sEPS抵抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)感染鸡胚成纤维细胞(CEF)的作用。结果表明,硫酸化修饰后sEPS较未修饰的EPS显著提高了CEF抵抗IBDV感染的作用,以sEPS2和sEPS5的效果较好,且与sEPS的硫酸基取代度和糖含量有一定的相关性,反应温度80℃、氯磺酸与吡啶的配比1∶8、反应2h为最佳修饰条件。

淫羊藿多糖脂质体对鸡淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA表达的影响

为研究淫羊藿多糖脂质体(EPSL)增强免疫的作用机理,采用MTT法和实时荧光定量PCR法测定了EPSL对鸡外周血淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4和IFN-γmRNA表达的影响,以淫羊藿多糖(EPS)作为对照。结果表明,EPSL在体外可以显著促进淋巴细胞的增殖,其中在31.250和3.906μg·mL-1时,无论是单独作用还是协同PHA作用效果都显著优于EPS;EPSL可提高淋巴细胞IL-2、IL-4和IFN-γmRNA的表达,其中在62.500和31.250μg·mL-1时,EPSL对3种细胞因子的诱生作用显著强于EPS,EPSL在62.500μg·mL-1时的作用最强,在31.250μg·mL-1时次之,并与剂量呈正相关。EPS经过脂质体包封后其提高淋巴细胞增殖及细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γmRNA表达的作用明显增强。

黄芪多糖和淫羊藿多糖对培养细胞增殖和衰老的影响

将安全浓度范围内的黄芪多糖(astragaluspolysaccharide,APS)和淫羊藿多糖(epimediumpolysaccharide,EPS)分别加入到培养12h和24h的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,测定加药后CEF增殖率和成层率的动态变化。结果表明,2种多糖均能促进细胞增殖和延缓细胞衰老,EPS的作用强于APS,具有一定的量效、时效关系。

大孔吸附树脂法去除淫羊藿多糖中蛋白的研究

从4种大孔吸附树脂中筛选出ADS-7,考察了其对淫羊藿多糖中蛋白的去除作用,并讨论了pH值、鞣酸、上样量等对树脂去蛋白效率的影响.结果表明,该方法对淫羊藿粗多糖中的蛋白具有较高的去除效率,淫羊藿粗多糖中的蛋白含量由1.2%下降到0.035%.

硫酸化淫羊藿多糖对鸡外周血淋巴细胞IL-2和IFN-γ的mRNA表达的影响

促进淋巴细胞分泌抗病毒干扰素和白介素等细胞因子是生物活性多糖抗病毒和增强免疫的机制之一。为探明sEPS5和sEPS2抗病毒和增强免疫作用的机理,用Primer Premier软件设计了1对白介素-2(Interleukin-2,IL-2)引物和1对干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)引物,用荧光定量PCR方法测定sEPS2和sEPS5对鸡外周血T淋巴细胞IL-2、IFN-γ的mRNA表达的影响,以未修饰的EPS为对照。结果表明,在62.50μg/ml和31.25μg/ml时,sEPS5和sEPS2对2种细胞因子的诱生作用显著强于未修饰的EPS,其中sEPS5的作用最强,sEPS2次之,并与剂量呈正相关。这可能是硫酸化多糖抗病毒和增强免疫的分子机制之一。

淫羊藿多糖和甙的胸腺免疫药理作用

给小鼠sc淫羊藿多糖(EPS)和甙(Icarrin).对二者的胸腺免疫药理作用进行研究,结果发现:胸腺细胞产生IL-2和~3H-TdR的掺入能力增强。EPS使胸腺内L_3T_4^+和Lyt_z细胞数目减少.伴同胸腺细胞对ConA刺激的增殖反应降低。Icarrin对胸腺内上述两个细胞亚群无影响,但使胸腺细胞对ConA刺激的反应增高。故认为EPS和Icarrin对胸腺都有免疫激活作用。EPS可能有促进胸腺释放成熟细胞的作用。

淫羊藿多糖对雏鸡免疫器官及新城疫疫苗免疫效果的影响

疫苗免疫接种是预防和控制传染病的重要措施,而佐剂是疫苗研究的重要组成部分。选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力。本研究将50、100、150 g/L等不同浓度的淫羊藿多糖与灭活的鸡新城疫病毒乳化,制备疫苗免疫雏鸡,通过检测抗体效价和免疫器官指数,探讨淫羊藿多糖作为免疫佐剂对鸡免疫功能的影响。结果表明,100 g/L和150 g/L的淫羊藿多糖作为免疫佐剂均可促进抗体的产生,提高脾脏指数,但对法氏囊指数的促进作用不明显。

淫羊藿多糖对老年大鼠神经内分泌免疫调节作用的研究

采用自然衰老雄性大鼠，观察给予淫羊藿有效组分－多糖（ＥＰＳ）前后下丘脑和皮质β内啡肤（βＥｎｄ）含量、血促性腺激素（ＬＨ、ＦＳＨ）、睾酮（Ｔ）、雌二醇（Ｅ２）、白细胞介素２（ＩＬ２）、自然杀伤细胞（ＮＫＣ）活性。结果表明，与青年鼠比较，衰老大鼠上述各指标均有不同程度的降低。应用ＥＰＳ后，老年大鼠下丘脑和皮质βＥｎｄ含量和ＩＬ２、ＮＫＣ活性明显提高，提示淫羊藿多糖可明显增强机体免疫功能和神经肽含量。

淫羊藿多糖对甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的免疫佐剂作用

目的研究探讨淫羊藿多糖对甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的免疫佐剂活性。方法淫羊藿多糖G1和G4,生理盐水分别与流感病毒裂解疫苗配伍免疫小鼠,初次免疫后2周收集小鼠血清,ELISA法检测血清中抗体的滴度;MTT法测定脾淋巴细胞增殖反应;ELISA测定IFN-γ和IL-4的水平,流式细胞术测定脾淋巴细胞CD4+、CD8+、CD3+和CD19+亚群。结果初次免疫后,淫羊藿多糖G1和G4能显著提高免疫小鼠血清的抗体滴度;能明显增强脾T淋巴细胞的增殖反应,可以显著提高脾淋巴细胞CD4+、CD8+和CD3+的含量及CD3+/CD19+的比值,诱导分泌IFN-γ的水平升高。结论淫羊藿多糖可增强小鼠对H1N1的免疫应答,可以作为甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的一种新型免疫佐剂。

淫羊藿多糖的分离纯化及结构初步分析

从淫羊藿中提取多糖并鉴定其初步结构和单糖组成。采用超声-水提醇沉法提取粗多糖、Sevag法去蛋白、DEAE-52纤维素及Sephadex G-100柱层析法纯化得到淫羊藿多糖EPSⅠ-1和EPSⅡ-1。应用紫外光谱法和红外光谱法对其结构做初步分析。采用高效液相色谱法(HPLC)测定其单糖组成及摩尔比。均一的EPSⅠ-1和EPSⅡ-1多糖在紫外和红外中具有多糖的特征吸收峰,组成中含有吡喃环结构;EPSⅠ-1的单糖组成为鼠李糖和葡萄糖,摩尔比为1∶1.13;EPSⅡ-1的单糖组成为果糖、葡萄糖和一个不确定的糖,摩尔比为1∶1.91。有效地分离纯化了淫羊藿多糖,这为淫羊藿多糖的广泛应用奠定了实验基础。

不同干燥方法对淫羊藿多糖化学性质和抗氧化活性的影响

为研究不同干燥方法对淫羊藿多糖化学性质及抗氧化活性的影响,以粗毛淫羊藿为材料制备多糖。测定热风干燥多糖(EAP-H)、真空干燥多糖(EAP-V)和真空冷冻干燥多糖(EAP-F)的中性糖、糖醛酸和蛋白质含量,单糖组成及DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子的清除能力。结果表明:淫羊藿多糖为含有少量蛋白质的酸性多糖,不同干燥方法将会影响其单糖组成和糖醛酸含量;EAP-F糖醛酸含量最高并具有最强的DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子清除能力。因此,真空冷冻干燥是制备淫羊藿多糖的最佳干燥方法。

淫羊藿多糖硫酸化修饰条件的优化

目的优化淫羊藿多糖硫酸化修饰的最佳条件。方法采用氯磺酸-吡啶法。以硫酸基取代度和糖的质量分数为指标,采用L9(34)正交试验对反应温度、试剂配比和反应时间进行优选。结果反应温度对修饰的影响最大,适宜的修饰条件为反应温度80℃,氯磺酸与吡啶的体积比在1:8～1:10,反应时间2～3h。结论采用优化的条件对淫羊藿多糖进行硫酸化修饰可以获得理想的硫酸化淫羊藿多糖。

柱前衍生化高效液相色谱法分析淫羊藿多糖中单糖的组成

目的测定淫羊藿多糖(EPS)中单糖的组成及其摩尔比。方法将淫羊藿多糖样品用1 mol/L硫酸溶液降解成单糖后,用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生,通过简化衍生方法,优化分析条件,采用反相高效液相色谱250nm紫外检测和使用梯度洗脱,分离测定各单糖。结果淫羊藿多糖由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖6种单糖组成,其物质的量之比为0.60∶0.74∶1.00∶0.29∶2.29∶1.43。结论该改进后的衍生化方法以及优化的高效液相色谱法具有简单、快速、重现性好等特点,可用于淫羊藿多糖中单糖组成的测定。

淫羊藿多糖对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响

采用环磷酰胺所致免疫低下小鼠及荷瘤 (S180 )小鼠观察了淫羊藿多糖 (EPS)对免疫功能的影响 .结果表明 :腹腔注射环磷酰胺 80mg/kg ,可以使正常小鼠的胸腺指数、血清溶血素水平、空斑形成细胞溶血能力和外周血中WBC总数下降 .腹腔注射EPS 5 0、2 5mg/kg× 7,可使脾指数上升 ,但对胸腺指数无明显影响 ;5 0、2 5、12 5mg/kg× 7,使下降的溶血素值及空斑形成细胞的溶血能力回升 ;2 5、12 5mg/kg× 7,使下降的白细胞总数上升 .小鼠荷瘤后免疫功能低下 ,表现为胸腺指数下降、血清溶血素水平、空斑形成细胞的溶血能力及迟发性超敏反应能力降低 .皮下注射EPS5 0mg/kg× 8,可对抗荷瘤引起的胸腺指数下降 ;5 0、2 5mg/kg使荷瘤小鼠的脾指数升高 ;5 0、2 5mg/kg× 8,可以使荷瘤小鼠的血清溶血素、空斑形成细胞的溶血能力及迟发性超敏反应能力有所提高 .

淫羊藿多糖改善小鼠学习记忆障碍作用的实验研究

目的:探讨淫羊藿多糖改善小鼠学习记忆障碍的作用及其可能机制。方法:将昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、吡拉西坦阳性对照(30 mg/kg)组及淫羊藿多糖高(120 mg/kg)、低(60 mg/kg)剂量组,每组10只。灌胃给药,1次/d;连续给药15 d,末次给药结束30 min后,腹腔注射东莨菪碱2 mg/kg建立记忆障碍小鼠模型;考察淫羊藿多糖对学习记忆障碍小鼠学习能力、胆碱能神经递质、氧化应激水平、炎症因子及Cleaved Caspase-3、NF-κB p65蛋白表达的影响。结果:与模型组比较,淫羊藿多糖高、低剂量组小鼠5 min内错误次数显著减少,跳台潜伏期显著延长(P<0.05);与模型组比较,淫羊藿多糖高、低剂量组小鼠脑组织乙酰胆碱转移酶活性、CAT、SOD、IL-4、IL-10水平显著升高,乙酰胆碱酯酶活性、TNF-α、MDA含量及Cleaved Caspase-3、NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:淫羊藿多糖具有改善小鼠学习记忆障碍的作用,其机制与调节胆碱能神经递质活性、抗氧化应激、降低炎症反应及抑制凋亡有关。

淫羊藿多糖对鸡免疫功能及疫苗免疫效果的影响

为探讨淫羊藿多糖(EPS)对雏鸡免疫功能和禽流感-新城疫重组二联苗免疫效果的影响,将80只1日龄雏鸡随机分为4组,每组20只。分别于1日龄皮下注射生理盐水及12.5mg/mL、25mg/mL、50mg/mLEPS,连续7d,于7、14、21、28、35、42、49、56日龄采血,检测淋巴细胞转化率、中性粒细胞吞噬力、AI和ND抗体效价、红细胞免疫功能。结果表明:不同浓度EPS均能显著提高淋巴细胞转化率、中性粒细胞吞噬力、AI-HI和ND-HI抗体效价、红细胞-C3b花环率,降低红细胞-IC花环率,且中剂量效果较好。淫羊藿多糖作为免疫增强剂和疫苗佐剂,具有较好的研究价值与应用前景。

淫羊藿多糖脂质体制备条件的优选

目的:优选淫羊藿多糖脂质体(EPSL)制备的最佳条件。方法:采用薄膜分散超声法制备EPSL,以包封率和载药量为指标,以脂药比、膜材比、超声时间和载药温度为因素水平,用L9(34)正交试验对制备条件进行优选,并用鱼精蛋白法测定EPSL的包封率。结果:制备EPSL的最佳条件为:脂药比30∶1,膜材比4∶1,超声时间10 min,载药温度40℃。结论:采用最佳条件制备的EPSL,包封率和载药量较高。

黄芪多糖、淫羊藿多糖和淫羊藿总黄酮对NDV血凝性的影响

采用微量血凝法 ,测定了黄芪多糖 (APS)、淫羊藿多糖 (EPS)、淫羊藿总黄酮 (EF)对NDV血凝性的影响。结果表明 ,APS、EPS、EF能显著提高NDV的血凝效价 ,且与浓度有相关性 ,EPS并能延长NDV的血凝时间 ,将它们与混合病毒感作后 ,这种作用消失。

不同品种、产地淫羊藿多糖的含量测定

[目的]测定不同品种不同产地淫羊藿多糖的含量。[方法]采用苯酚 -硫酸法。[结果]不同品种淫羊藿多糖含量结果相差较大 ,其中朝鲜淫羊藿含多糖量稍高。