整合代谢组学和肠道菌群揭示补骨脂甲素联合淫羊藿次苷Ⅱ导致特异质肝损伤

仙灵骨葆口服制剂是我国治疗骨病的中药大品种,但近年来国家食品药品监督管理总局通报其易引起肝损伤。传统毒理学研究很难评价其肝损伤作用,我们前期发现仙灵骨葆肝损伤具有特异质属性,拆方研究发现补骨脂和淫羊藿是其导致特异质肝损伤的主要药味,且配伍后其特异质肝损伤加重,呈现七情配伍中“相反”的特点。进一步研究发现,TNF-α介导的免疫应激是其重要诱因,免疫促进成分和肝损伤易感成分存在是其另一重要诱因。然而,具体机制尚不清楚。本研究通过建立动物模型,考察了免疫促进淫羊藿次苷Ⅱ联合肝损伤易感成分补骨脂甲素对小鼠肝损伤的影响;借助非靶向代谢组学技术评价了两个成分联合对肝损伤代谢标志物的影响;利用16S r RNA测序技术探讨了肠道菌群的物种组成和相对丰度的变化。结果表明在TNF-α诱导的免疫应激小鼠模型上发现,单独给药补骨脂甲素能够引起明显肝损伤,而淫羊藿次苷Ⅱ组却无明显变化,但是淫羊藿次苷Ⅱ能够协同补骨脂甲素导致特异质肝损伤;同时代谢组学结果揭示补骨脂甲素联合淫羊藿次苷Ⅱ能够引起小鼠肝脏中甲基氨基甲酰PAF、吲哚-3-醋酸甲酯等代谢物的水平升高,而甘氨酸-酪氨酸(Gly-Tyr)、L-亮氨酰-L-甘氨酸(Leu-Gly)和L-色氨酸-L-丝氨酸(Trp-Ser)等代谢物的水平则下降。这些与肝损伤相关的差异表达代谢物主要富集在鞘脂代谢、鞘脂信号通路和坏死等代谢途径。值得注意的是,补骨脂甲素联合淫羊藿次苷Ⅱ可以诱导肝损伤小鼠肠道中的乳酸杆菌和脱硫弧菌科丰度显著增加。相关性分析结果表明,类杆菌科和脱硫弧菌科与甲基氨基甲酰基PAF和吲哚-3-醋酸甲酯呈正相关,而与Gly-Tyr、Leu-Gly和Trp-Ser呈负相关。本研究初步阐明了补骨脂配伍淫羊藿引起特异质型药物性肝损伤的物质基础和机制,为中成药临床合理使用提供了科学依据。

基于GABA能神经系统探究淫羊藿次苷Ⅱ的抗抑郁作用及机制

目的基于γ氨基丁酸(GABA)能神经系统研究淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)的抗抑郁作用及潜在机制。方法将雄性昆明小鼠分为对照组(C组,10只)和造模组(50只),造模组小鼠以慢性不可预知温和应激法复制抑郁模型。刺激21 d后,将造模组小鼠随机分为抑郁模型组(NS组)、阳性对照药组[ECS组,草酸艾司西酞普兰15 mg/(kg·d)]和ICSⅡ低、中、高剂量组[ICSⅡ-L、ICSⅡ-M、ICSⅡ-H组,ICSⅡ10、20、30 mg/(kg·d)],每组10只。各药物组小鼠灌胃相应药物,每天1次,连续14 d。检测各组小鼠的糖水偏爱率、运动总距离、悬尾实验和强迫游泳实验的静止不动时间,观察其海马CA3区神经元及尼氏体形态,检测海马组织中GABA、谷氨酸(Glu)含量、GABA/Glu比值及GABA能神经系统相关蛋白(GABA A受体α1、GABA B受体1、GABA囊泡转运体、谷氨酸脱羧酶67、GABA膜转运体3)的表达情况。结果与C组比较,NS组小鼠糖水偏爱率显著降低,运动总距离显著缩短,悬尾实验和强迫游泳实验的静止不动时间均显著延长(P<0.05);海马CA3区的神经元形态不规则且尼氏体减少,结构完整的神经元数量显著减少(P<0.05);海马组织中Glu含量显著升高,GABA含量、GABA/Glu比值和GABA能神经系统相关蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与NS组比较,各药物组大鼠的抑郁样行为均有所改善,上述指标普遍逆转(P<0.05)。结论ICSⅡ能够改善抑郁模型小鼠的抑郁样行为,其机制可能与调节GABA、Glu平衡,增加GABA的合成、转运、释放以及调节相关受体的表达进而改善GABA能神经系统功能有关。

淫羊藿次苷Ⅱ调控PI3K/Akt信号通路对阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力的影响

目的:研究淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习和记忆能力的影响及其分子机制。方法:将7月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、ICSⅡ组和阳性对照药组,每日灌胃给药1次,连续30 d。用Morris水迷宫与筑巢实验检测小鼠学习记忆和生活能力;用免疫荧光化学法检测脑内β淀粉样蛋白(Aβ)沉积与细胞凋亡情况;用蛋白质免疫印迹法(Western blot)探究其抗凋亡作用与磷脂腺肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的相关性。结果:与模型组比较,ICSⅡ组小鼠的学习记忆及生活能力都明显提高(P<0.01),其海马与皮层的Aβ荧光强度和裂解的半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)阳性细胞数均明显降低(P<0.05,P<0.01),说明ICSⅡ能抑制Aβ沉积、减少神经细胞凋亡,保护脑组织;同时ICSⅡ组小鼠海马PI3K蛋白质表达水平和p-Akt/Akt显著升高(P<0.05,P<0.01),而Bax/Bcl-2明显降低(P<0.01),说明ICSⅡ抗凋亡作用的机制与激活海马PI3K/Akt信号通路,降低促凋亡蛋白、提高抗凋亡蛋白的表达水平有关。结论:ICSⅡ对AD小鼠脑内神经细胞有明显的保护作用,能改善小鼠的认知功能,其机制可能与激活海马PI3K/Akt信号通路有关。

淫羊藿次苷Ⅱ调节海马tau蛋白磷酸化水平改善慢性脑低灌注大鼠的学习记忆功能障碍

目的:研究淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)抗慢性脑低灌注(CCH)诱导的大鼠学习记忆功能减退的作用及其可能的作用机制。方法:Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察海马神经元的形态,Nissl染色观察海马神经元的存活数量,Western blot检测海马tau蛋白在丝氨酸199位点磷酸化(p-Ser 199-tau)、丝氨酸396位点磷酸化(p-Ser 396-tau)、丝氨酸404位点磷酸化(p-Ser 404-tau)及苏氨酸231位点磷酸化(p-Thr 231-tau)的水平。结果:ICSⅡ(16 mg/kg)能改善CCH大鼠的学习记忆障碍,减轻海马CA1区神经元结构损伤,增加海马CA1区存活神经元数量,降低海马p-Ser 199-tau、p-Ser 396-tau、p-Ser 404-tau、p-Thr 231-tau的水平。结论:ICSⅡ具有改善CCH所致大鼠学习记忆功能减退及海马神经元损伤的作用,其机制可能与下调tau蛋白异常磷酸化水平有关。

淫羊藿活性成分抗卵巢癌作用机制研究进展

卵巢癌是女性生殖系统三大癌症之一,其病死率位居妇科恶性肿瘤之首。淫羊藿具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效,临床常用于生殖系统疾病的治疗。本文通过综述国内外相关文献,发现淫羊藿主要活性成分淫羊藿苷、淫羊藿素和淫羊藿次苷Ⅱ,主要从促进细胞凋亡、影响细胞的侵袭和转移、阻滞细胞周期、诱导细胞自噬、促进细胞焦亡等5个方面发挥抗卵巢癌作用,可见淫羊藿可以通过多靶点、多途径治疗卵巢癌。

基于RNA-Seq对淫羊藿次苷Ⅱ体内抗HBV时胰岛素信号通路基因的研究

目的利用转录组测序(RNA-Seq)技术筛选淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)作用于乙型肝炎病毒(HBV)复制型C57BL/6小鼠后肝脏的差异基因,探索ICSⅡ在抗HBV中对胰岛素通路相关基因的影响。方法用高压水动力法建立HBV复制型C57BL/6小鼠模型,建模后随机进行分组:模型(Model)组、生理盐水(NS)组、阳性药物恩替卡韦(ENT)对照组(0.5 mg/kg)和ICSⅡ组(20 mg/kg),每组5只,灌胃给药(10 mL/kg),1d 1次,连续给药20 d。采用荧光定量PCR技术检测血清样本中HBV DNA的拷贝量,确认ICSⅡ对HBV DNA有抑制作用后,用高通量Illumina HiSeq 2500测序平台对小鼠肝脏样本进行转录组测序。对测序结果进行GO富集和KEGG通路注释,通过KEGG通路注释分析筛选出多条与ICSⅡ抗HBV相关的通路,并使用荧光定量PCR对胰岛素通路相关基因Hras、Gck、Phka2、Prkacb、Akt2、Grb2进行验证分析。结果ICSⅡ能明显抑制HBV DNA的复制,差异基因分析显示,Model组和ICSⅡ组相比,982个基因上调,756个基因下调(P<0.05)。注释到GO数据库中的差异基因共有3675个,有493个差异基因被注释到226条通路中。荧光定量PCR结果显示,在HBV感染的小鼠肝脏中ICSⅡ下调胰岛素通路相关基因Hras、Gck、Phka2、Prkacb、Akt2、Grb2的转录水平(P<0.05),和测序结果一致。结论ICSⅡ可能通过下调胰岛素信号通路相关基因Hras、Gck、Phka2、Prkacb、Akt2、Grb2发挥抗HBV作用。

淫羊藿次苷Ⅱ改善APP/PS1双转基因小鼠认知功能的研究

目的研究淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)改善APP/PS1双转基因小鼠认知功能的作用。方法将30只7月龄APP/PS1小鼠随机分为模型对照组和ICSⅡ给药组,每组15只;另取15只同龄C57BL/6小鼠作为空白对照组。ICSⅡ给药组灌胃10 mg·kg^(-1)ICSⅡ,空白对照组和模型对照组给予等量羧甲基纤维素钠(CMC-Na),每天1次,连续28 d。给药第20天,采用筑巢实验检测小鼠日常生活能力,然后采用Morris水迷宫实验检测小鼠的认知功能;苏木素-伊红(H&E)染色法及尼氏(Nissl)染色法检测小鼠海马皮层、CA3区和DG区脑组织病理损伤情况;免疫荧光染色法检测小鼠皮层及海马区Aβ淀粉样蛋白沉积情况、星形胶质细胞和小胶质细胞激活情况:分别采用TBA法、羟胺法检测小鼠脑内的丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与模型组比较,ICSⅡ能明显改善APP/PS1小鼠日常生活能力和认知功能,减轻脑组织病理损伤、增加神经元细胞数量,减少Aβ淀粉样蛋白沉积,抑制星形胶质细胞和小胶质细胞的过度活化,提高脑内SOD活性,降低脑内MDA的水平。结论ICSⅡ能通过调节多种病理机制改善APP/PS1双转基因小鼠的认知功能。

基于正交试验优选炙淫羊藿动态逆流提取连续生产工艺

为充分利用炙淫羊藿药物疗效,践行中药连续生产新理论,对动态逆流提取连续生产工艺进行研究。基于L_(8)(2)^(7)正交试验优选中药材炙淫羊藿动态逆流提取连续生产工艺。动态逆流提取连续生产7天,生产开始、生产过程每天共取样8次,对炙淫羊藿药材、药渣的宝藿苷Ⅰ含量、总量含量,宝藿苷Ⅰ含量转移率,总量含量转移率,浸出物等进行检查。优选的动态逆流提取连续生产工艺为:粗碎粒径1~5mm、浸润时间30min、加料螺旋推进转速5r/min、提取溶媒加入流量75L/h、提取螺旋推进转速1~3r/min、提取时间90min、提取温度100℃,浸膏收率为19.37%、含量转移率检查宝藿苷Ⅰ含量转移率为46.14%、总量含量转移率为63.24%,浸出物为23.07%。优选炙淫羊藿动态逆流提取连续生产工艺重现性好,含量转移率高,操作简便。为中药动态逆流提取连续生产新的生产模式的应用提供了参考依据。

淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ通过BMP/Runx2/Osx信号通路促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究

目的观察淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化过程中BMP-2/Runx2/Osx信号通路的影响,探讨其可能的作用机制。方法贴壁筛选法体外培养BMSCs,随机分为空白对照组、阳性转化液组、抑制剂组、淫羊藿次苷Ⅰ组及淫羊藿次苷Ⅰ+抑制剂组、淫羊藿次苷Ⅱ组及淫羊藿次苷Ⅱ+抑制剂组。通过茜素红染色,对各组促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化作用进行药效学评价; ELISA法检测各组ALP活性、BGP、COL-Ⅰ、BMP2蛋白分泌量;RTReal-TimePCR法检测各组ALP、BGP、Osterix和Runx-2 mRNA基因表达。结果茜素红染色结果表明,淫羊藿次苷Ⅰ组及淫羊藿次苷Ⅱ组均可明显观察到大量的矿化结节的形成;ELISA实验结果表明,与空白对照组比较,淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ均能明显促进ALP细胞活性及BGP、COL-Ⅰ、BMP-2蛋白分泌量,并且差异具有统计学意义(P<0.05);两组药物作用强度均已达到阳性转化液组的80%以上。同时,淫羊藿次苷Ⅰ对ALP活性、 BGP蛋白表达均明显强于淫羊藿次苷Ⅱ,并且差异具有统计学意义(P<0.05);对COL-Ⅰ、BMP-2的蛋白表达量,两者差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR实验结果表明,与空白对照组相比,淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ均可显著上调成骨相关转录因子ALP、BGP、RunX2,并进一步调节其下游基因Osterix的转录表达,差异具有统计学意义(P<0.05);与阳性对照液组比较,淫羊藿次苷Ⅱ对ALP、Osterix的mRNA表达无明显差异(P>0.05);淫羊藿次苷Ⅰ与淫羊藿次苷Ⅱ组比较,淫羊藿次苷Ⅱ对Osterix mRNA的表达明显强于淫羊藿次苷Ⅰ,并且差异具有统计学意义(P<0.05)。对ALP、BGP、RunX2 mRNA的表达二者无显著性差异(P>0.05)。结论淫羊藿次苷Ⅰ和淫羊藿次苷Ⅱ均能促进BMSCs定向成骨转化,其作用机制可能与激活BMP/Runx2/Osx信号通路有关。淫羊藿次苷Ⅰ和淫羊藿次苷Ⅱ作用差异可能与淫羊藿次苷Ⅰ在体内生物转化为淫羊藿次苷Ⅱ有关。

淫羊藿次苷Ⅱ通过激活雌激素信号通路促进骨髓间充质干细胞的成骨性分化

目的研究淫羊藿次苷Ⅱ(icarisideⅡ,ICSⅡ)对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化过程中雌激素信号通路的影响。方法贴壁筛选法体外培养rBMSCs,采用1×10-5 mol.L-1的ICSⅡ进行药物干预,比较ICSⅡ组、ICI组(ICI 182.78)、ICSⅡ+ICI组、Estrogen组、Esreogen+ICI组和不加药的对照组之间雌激素通路相关因子(包括ERα、PR和PS-2)的表达量,同时对比各组之间的成骨性指标,包括碱性磷酸酶活性、骨钙素和Ⅰ型胶原分泌量及钙盐沉积量。提取TotalRNA,Real Time RT-PCR检测Runx-2、Osterix(OSX)、ERα、PR、及PS-2 mRNA的表达情况,同时提取总蛋白,Westernblot法检测Ⅰ型胶原蛋白、ERα、PR和PS-2的分泌量。结果 ICSⅡ可明显增强碱性磷酸酶(ALP)活性,促进骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的分泌和钙盐沉积,与成骨性分化相关的因子OSX和Runx-2的基因表达量也升高,但这些效应均可被雌激素通路的特异性阻断剂ICI 182.780所抑制。结论 ICSⅡ可促进rBMSCs的成骨性分化,但采用ICI 182.780阻断雌激素信号通路后,成骨性分化的指标随之降低,提示ICSⅡ是通过激活雌激素信号通路来促进rBMSCs成骨性分化的。

淫羊藿次苷Ⅰ与其原型药物淫羊藿苷对rBMSCs成骨性分化的影响比较

目的观察淫羊藿次苷Ⅰ(IcarisideⅠ)与其原型药物淫羊藿苷(Icariin,ICA)对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,r BMSCs)成骨分化过程中碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)蛋白表达量及ALP、BGP、Osterix和Runx-2 mRNA表达的影响。方法贴壁筛选法体外培养r BMSCs,以1×10-5mol/L的ICA和IcarisideⅠ对r BMSCs的成骨性分化进行药物干预。ELISA法检测ICA组、IcarisideⅠ组和空白对照组及转化液组之间ALP活性、BGP分泌量;RT Real-Time PCR法检测ALP、BGP、Osterix和Runx-2 mRNA基因表达。结果与空白对照组相比,IcarisideⅠ与其原型药物ICA均可显著增强r BMSCs的ALP活性,促进BGP的分泌,提高ALP、BGP、Osterix和Runx-2的mRNA水平(P<0.01)。IcarisideⅠ与ICA组比较,其ALP、BGP蛋白表达量及基因表达明显高于ICA组(P<0.01),Osterix和Runx-2的基因表达两组无显著性差异。结论 IcarisideⅠ也能促进r BMSCs成骨性分化,并且其活性高于原型药物ICA,也是淫羊藿发挥抗骨质疏松活性的主要成分。(2)提示补肾中药淫羊藿其补肾壮骨作用与促进ALP、BGP蛋白分泌量,上调ALP、BGP、Osterix和Runx-2的mRNA水平有关。

载淫羊藿苷和盐酸米诺环素明胶微球/骨水泥的构建及其性能研究

目的构建负载淫羊藿苷(ICA)和盐酸米诺环素(MH)的明胶微球/骨水泥(GMs/CPC)材料并对其性能进行研究,为种植体周围炎的治疗提供一种骨替代材料。方法制备GMs及负载ICA的GMs(ICA)、负载MH的GMs(MH)和同时负载两种药物的GMs(ICA+MH),将GMs(ICA+MH)与CPC复合构建CPC/GMs(ICA+MH)材料,将GMs(ICA)和GMs(MH)按照质量比1∶1的比例混合后与CPC复合构建CPC/GMs(ICA)+GMs(MH)材料。通过扫描电镜实验观察材料表面形态,X射线衍射实验分析材料物相。将各组材料浸提液作用于骨髓间充质干细胞(BMSCs),通过CCK-8实验检测材料浸提液对BMSCs增殖作用的影响,通过茜素红染色及钙含量定量分析实验检测材料浸提液及含浸提液的矿化液对BMSCs矿化作用的影响。结果扫描电镜观察显示,CPC/GMs、CPC/GMs(ICA+MH)和CPC/GMs(ICA)+GMs(MH)中的明胶微球被CPC基质包裹并随机散在分布于骨水泥中;X射线衍射分析结果显示以上3种材料中明胶微球与CPC结合后并未发生化学反应产生新的物质。CCK-8实验结果显示,BMSCs在材料浸提液中培养7 d后,CPC/GMs(ICA)+GMs(MH)组BMSCs的增殖率显著升高,与CPC/GMs组和CPC/GMs(ICA+MH)组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。BMSCs在材料浸提液及含浸提液的矿化液中培养21 d后,CPC/GMs(ICA)+GMs(MH)组矿化能力显著高于CPC/GMs组和CPC/GMs(ICA+MH)组(P<0.05)。结论CPC/GMs(ICA+MH)和CPC/GMs(ICA)+GMs(MH)材料对BMSCs的成骨分化均具有促进作用,其中CPC/GMs(ICA)+GMs(MH)的作用较强是一种优选的骨替代材料。

淫羊藿次苷Ⅰ在大鼠体内的药动学和组织分布研究

目的研究淫羊藿次苷Ⅰ在血液和各组织中的HPLC检测方法及在大鼠体内的药动学和组织分布。方法采用Dikma-C18色谱柱(4·6mm×250mm,5μm),流动相甲醇-0·2%磷酸(73:27),流速1·0mL·min-1,检测波长270nm,柱温20℃。大鼠按淫羊藿次苷Ⅰ单剂量10mg·kg-1尾静脉注射后,采用高效液相色谱法测定给药后不同时间的淫羊藿次苷Ⅰ血药浓度和各组织浓度,用3P97程序计算药动学参数。结果淫羊藿次苷Ⅰ的血药浓度-时间曲线符合二室模型,并在心脏和肌肉组织有一定程度的蓄积。结论此方法简便、准确、稳定,可用于淫羊藿次苷Ⅰ的药动学和组织分布研究。

Plackett-Burman试验设计联用星点设计-效应面法优化纤维素酶水解淫羊藿苷为宝藿苷Ⅰ的工艺

目的:运用Plackett-Burman试验设计联用星点设计(Central Composite Design,CCD)-效应面法,考察各影响因素显著性,筛选出用纤维素酶水解淫羊藿苷为宝藿苷Ⅰ的最佳工艺。方法:运用Plackett-Burman试验设计筛选影响酶反应的主要因素,选用CCD-效应面法优化纤维素酶水解淫羊藿苷为宝藿苷Ⅰ的最佳工艺。以底物浓度、缓冲液p H、反应时间为自变量,淫羊藿苷的转化率为因变量,利用星点设计模型进行二项式拟合,利用相应的三维曲面图直观分析纤维素酶水解淫羊藿苷为宝藿苷Ⅰ的最佳工艺,并进行验证试验及预测分析。结果:纤维素酶水解淫羊藿苷为宝藿苷Ⅰ的最佳工艺为:底物浓度为8.23 mg/m L,缓冲液p H为5.12,反应时间为35.34 h。结论:利用Plackett-Burman试验设计联用CCD-效应面法确定了纤维素酶水解淫羊藿苷为宝藿苷Ⅰ的最佳工艺,该方法简便、重现性好、预测性强。

HPLC法同时测定肿瘤Ⅰ号胶囊中丹参素与淫羊藿苷的含量

目的建立肿瘤I号胶囊中丹参素与淫羊藿苷的含量测定方法。方法采用HPLC法，以乙腈-体积分数为1％的冰醋酸溶液梯度洗脱，色谱柱为Kromasil C18（4．6mm ×200mm，5μm），流速为1．0mL·min^-1，柱温为35℃，检测波长为275nm。结果丹参素在儿．38～227．50mg·L^-1内，淫羊藿苷在2．0～40．0mg·L^-1内，与峰面积呈良好的线性关系，相关系数分别为0．9995和0．99960方法平均回收率分别为98．6％（RSD=1．9％）、96．0％（RSD=0．84％）。结论可作为肿瘤I号胶囊质量控制方法之一。

HPLC梯度洗脱法同时测定参茸延龄片中补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ含量

目的建立高效液相色谱法同时测定参茸延龄片中补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ含量的方法。方法采用Hypersil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流速：1.1 mL/min;流动相A为乙腈-甲醇（2∶1）,流动相B为0.1%冰醋酸溶液,梯度洗脱;检测波长分别为246 nm（补骨脂素和异补骨脂素）、270 nm（淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ）。结果补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ分别在0.033 2～0.664 0μg（r=0.999 8）、0.022 6～0.452 0μg（r=0.999 1）、0.029 4～0.588 0μg（r=0.999 5）、0.024 2～0.484 0μg（r=0.999 4）范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.48%、98.44%、99.13%、98.71%,RSD分别为0.92%、1.39%、1.17%、1.21%。结论本方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为参茸延龄片中补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的含量控制方法。

淫羊藿中朝藿苷A、B和C的酶转化及其稀有箭藿苷的制备

淫羊藿是一种草本药用植物,主要活性成分是黄酮类化合物,其中淫羊藿苷、朝藿苷A、B和C含量较高,稀有淫羊藿黄酮类化合物利用价值高却含量低。Aspergillis sp.y48菌所产生的淫羊藿黄酮苷酶,能水解朝藿苷A和C的7-O-Glc糖基,转化成箭藿苷A和C;能水解朝藿苷B的7-O-Glc糖基和3-O-糖基生成箭藿苷B、淫羊藿次苷II和淫羊藿苷元。该研究将朝藿苷A、C转化为纯度均为98%的箭藿苷A、C,其摩尔得率均为95%以上;将朝藿苷B转化为纯度83%的箭藿苷B;通过延长酶反应时间,将朝藿苷B制备为纯度98%的淫羊藿苷元,摩尔得率为93.8%。由此,把淫羊藿中含量较高的朝藿苷A、B和C,采用酶转化法成功地制备为箭藿苷等稀有淫羊藿黄酮类化合物。该方法流程简单、转化率高、成本低、产品纯度高,研究结果为淫羊藿黄酮类化合物的高效利用和稀有淫羊藿黄酮类化合物的生产提供了参考。

淫羊藿成分脱水淫羊藿素研究进展

脱水淫羊藿素(anhydroicaritin,AHI)是一种从小檗科多年生植物淫羊藿中提取分离的天然异戊烯基取代的黄酮类化合物,是淫羊藿苷类的一种。AHI具有较强的药理活性,如抗肿瘤、骨保护、抗病毒、抗炎、调血脂等,可以通过淫羊藿苷降解法(蜗牛酶解法、酸解-酶解法、酶解-酸解法及混酸法)及化学合成法制备得到。对近年来AHI的制备方法及药理活性研究进行回顾与整理,为AHI的进一步研究提供参考。

荧光光谱法研究淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ与牛血清白蛋白的相互作用(英文)

在模拟生理条件下应用荧光光谱学方法分别研究了淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ与牛血清白蛋白(BSA)间的结合作用.根据荧光强度数据,计算出了结合常数KA,结合位点数n和热力学参数(△G,△H和△S).实验结果表明,淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ都能显著猝灭BSA的内源荧光,猝灭机制均为形成基态复合物的单一静态猝灭过程.不同温度下(17℃,27℃,37℃)得到的KA和n值,表明淫羊藿次苷Ⅰ与BSA的结合强于淫羊藿苷.从得到的热力学参数判断,淫羊藿苷与BSA间的主要作用力是氢键作用和范德华力,而疏水作用和静电引力在淫羊藿次苷Ⅰ与BSA形成复合物过程中起主导作用.而且同步荧光光谱显示,淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ与BSA的结合导致BSA构象发生了变化.

淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ对骨髓基质细胞增殖及成骨能力的影响

目的:探讨补肾药有效成分淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ对实验犬骨髓基质细胞(BMSCs)增殖及其成骨能力的影响。方法:抽取犬BMSCs,诱导培养、传至第三代时于培养液中添加淫羊藿苷或黄芪苷Ⅰ使两种药物的终浓度为50 ng/m l。设BMP-2阳性对照和空白对照组,分别于第1至第8天每天测细胞的MTT值,绘制BMSCs生长曲线、观察其增殖情况;于第1、3、6、10、14天检测BMSCs的ALP和OD值,绘制该OD值变化曲线判断ALP的活性。结果:淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ预处理后BMSCs的MTT值从第1天至第7天均高于空白对照组;BMSCs分泌ALP的OD值也均高于空白对照组,二者差异有显著性(P<0.05)。结论:淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ能促进BMSCs增殖、促进BMSCs合成ALP从而增强其成骨能力。