D-半乳糖对小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤及淫羊藿素的改善作用研究

目的研究D-半乳糖(D-galactose,D-gal)对小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤以及淫羊藿素(icaritin,ICT)的改善作用机制。方法首先将TM4细胞分为正常对照组、不同浓度D-gal处理组,Western blot检测TM4细胞连接功能相关蛋白(ZO-1、Occludin、β-catenin和Cx43)以及ERα/FAK信号通路相关蛋白(ERα、FAK和pY397-FAK)表达水平的变化;随后MTT筛选ICT药物浓度,并将TM4细胞分为正常对照组、D-gal处理组、D-gal处理+不同浓度ICT组,Western blot检测上述蛋白表达水平变化;分子对接研究ERα与ICT之间的相互作用,并预测两者之间的亲和力;最后将TM4细胞分为正常对照组、D-gal处理组、ERα抑制剂组、D-gal+ICT组、ERα抑制剂+ICT组,Western blot检测上述蛋白表达水平的变化。结果D-gal可浓度依赖性下调连接功能相关蛋白(ZO-1、Occludin、β-catenin和Cx43)以及ERα/FAK信号通路相关蛋白(ERα、FAK和pY397-FAK)表达水平;给予ICT药物后,上述蛋白表达水平均明显上调;ERα和ICT分子对接结果显示,ERα的Asp351氨基酸残基与ICT之间形成2个距离为3.4Å和2.4Å的氢键,且两者之间的对接结合能小于-7 kcal·mol^(-1);ERα抑制剂处理TM4细胞后,上述蛋白表达水平均明显下调,给予ICT后,上述蛋白表达水平未有明显变化。结论D-gal可导致TM4细胞连接功能损伤,而ICT可改善其损伤,机制可能与上调ERα/FAK信号通路相关。

淫羊藿素联合吗啡对骨癌痛小鼠的镇痛效应研究

目的:探究淫羊藿素对骨癌痛(bone cancer pain,BCP)小鼠的镇痛效应,以及淫羊藿素与吗啡联合用药的镇痛效应;确定半效剂量淫羊藿素与吗啡联合用药,在达到吗啡最大镇痛效应时所减少的吗啡用量。方法:使用雄性C57BL/6J小鼠及路易斯(Lewis)肺癌细胞建立BCP小鼠模型。通过测定机械刺激缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT),冷刺激缩足潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)以及自发抬足次数和抬足保护时间以评估小鼠疼痛敏感度。结果:自造模后第7~14天起,BCP小鼠左侧(荷瘤侧)后爪MWT和PWL明显降低,自发抬足次数和抬足保护时间明显上升,并持续存在(P<0.05)。造模后第7~14天给予淫羊藿素,自第10~14天起淫羊藿素明显增加BCP小鼠左侧后爪的MWT和PWL,并减少自发抬足次数和抬足保护时间,停药后效应持续至造模后第18天(即停药后第4天)(P<0.05)。应用2倍EC50剂量淫羊藿素(200 mg/kg)与吗啡联合用药可明显延长停药后镇痛效应,停药后镇痛效应持续至造模后第21天(即停药后第7天)(P<0.05)。应用半效剂量淫羊藿素(100 mg/kg)与吗啡联合用药,达到吗啡最佳镇痛效应时最多可减少60%吗啡用量。结论:淫羊藿素对BCP小鼠有明显的镇痛效应,当与吗啡联合用药时,不仅明显延长了停药后的镇痛效应,还能够减少高达60%的吗啡用量。

基于网络药理学与体外实验探讨淫羊藿素抗非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药的分子机制

目的基于网络药理学与体外实验探讨淫羊藿素抗非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体-酪氨酸酶抑制剂(EGFR-TKIs)耐药的分子机制。方法利用PubChem和化合物靶点预测(Swiss Target Prediction)数据库下载淫羊藿素的简化分子线性输入规范(SMILES)号及作用靶点,通过人类基因(GeneCards)和在线人类孟德尔遗传(OMIM)数据库收集NSCLC耐药疾病靶点,将药物与疾病交集靶点导入STRING数据库分析蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)情况,运用Cytoscape 3.9.1软件内置插件计算节点拓扑参数值并筛选核心靶点,采用生物信息学分析平台(DAVID)数据库进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体(GO)富集分析,构建“淫羊藿素-关键靶点-疾病-通路”图。使用Pymol和Autodock Tools 1.5.7软件进行分子对接。体外实验选用NSCLC耐药株PC9OR研究淫羊藿素对细胞增殖、集落形成、迁移、侵袭和凋亡能力的影响,并对富集得到的核心靶点及关键通路进行验证。结果共筛选到淫羊藿素治疗NSCLC耐药的潜在作用靶点1952个。通过PPI网络节点拓扑参数值筛选得到13个核心靶点,涉及蛋白激酶B(AKT1)、雌激素受体α(ESR1)、B淋巴细胞瘤2(BCL2)、表皮生长因子受体(EGFR)等基因。KEGG通路富集分析显示,癌症相关通路、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-AKT)信号通路、EGFR-TKIs耐药通路等可能在淫羊藿素治疗NSCLC EGFR-TKIs耐药的过程中起关键作用。GO富集分析显示,细胞功能涉及信号传导、凋亡过程的负调控、DNA转录的正调控等。分子对接显示淫羊藿素与各核心靶点均具有较强的结合能力。细胞实验表明,淫羊藿素抑制耐药细胞的增殖、集落形成、迁移、侵袭及促进细胞凋亡,并下调ESR1、AKT1、EGFR等mRNA表达水平以及PI3K-AKT通路磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的关键蛋白水平。结论淫羊藿素可能通过多靶点调控PI3K-AKT通路抑制EGFR-TKIs耐药细胞的增殖、集落形成、迁移、侵袭及促进细胞凋亡,从而发挥抗NSCLC EGFR-TKIs耐药的作用。

淫羊藿素在Wnt/β-catenin通路介导的乳腺癌细胞上皮间质化过程中的作用机制

目的探讨淫羊藿素对乳腺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响及可能的作用机制。方法采用不同浓度淫羊藿素干预MDA-MB-231细胞,采用划痕实验、Transwell实验、qRT-PCR检测法依次检测细胞侵袭能力、miR-200c表达水平及相关蛋白表达变化。结果MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3细胞中miR-200c表达下降,其中以MDAMB-231细胞表达最低(P<0.05)。淫羊藿素可明显抑制MDA-MB-231细胞增殖,且随浓度增加对细胞抑制率明显增强。相较对照组、miR-200c NC组,miR-200c inhibitor组MDA-MB-231细胞迁移率升高,穿膜细胞数增加,β-catenin、Vimentin蛋白表达升高,miR-200c、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05);与对照组比较,淫羊藿素组细胞迁移率降低,穿膜细胞数减少,β-catenin、Vimentin蛋白表达降低,miR-200c、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与淫羊藿素组比较,淫羊藿素+miR-200c inhibitor组细胞迁移率升高,穿膜细胞数增加,β-catenin、Vimentin蛋白表达升高,miR-200c、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论淫羊藿素可阻断乳腺癌细胞的EMT过程,抑制肿瘤细胞的迁移、侵袭,其机制可能与上调miR-200c调控Wnt/β-catenin通路有关。

淫羊藿素通过调控IL-6/JAK2/STAT3途径抑制卵巢癌的发生与恶性生长

目的:探讨淫羊藿素通过调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路对卵巢癌A2780和SKOV3细胞增殖、凋亡和侵袭及对小鼠卵巢癌移植瘤模型的影响。方法:将人卵巢癌A2780和SKOV3细胞置于细胞培养箱中培养,设置空白对照组和淫羊藿素低、中、高剂量组(5.00、10.00、20.00μmol/L),药物干预48 h。采用克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭。Western blotting检测Ki67、PCNA、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、E-cadherin、N-cadherin、VEGF、IL-6、p-JAK2和p-STAT3蛋白相对表达量。建立裸鼠卵巢癌移植瘤模型,检测移植瘤质量和体积,采用Western blotting检测Ki67、cleaved Caspase-3、E-cadherin、N-cadherin、VEGF、IL-6、p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达量。结果:与空白对照组比较,淫羊藿素中剂量和高剂量治疗后,卵巢癌A2780和SKOV3细胞增殖、侵袭降低,凋亡增加,体内外Ki67、PCNA、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、N-cadherin、VEGF、IL-6、p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达量下调,E-cadherin蛋白的表达量上调。结论:淫羊藿素可抑制卵巢癌A2780和SKOV3细胞的增殖和侵袭,促进细胞凋亡,其机制与淫羊藿素影响IL-6、JAK2和STAT3的表达有关。

淫羊藿素和山柰酚对鸡等级前卵泡颗粒细胞发育的影响

为探究淫羊藿素和山柰酚对鸡卵泡发育的作用,试验通过MTT法分析不同浓度的淫羊藿素和山柰酚对鸡等级前颗粒细胞活性的影响并确定最佳浓度,通过实时荧光定量PCR检测淫羊藿素和山柰酚对鸡等级前颗粒细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、促卵泡素受体(FSHR)和雌激素受体α(ERα)mRNA表达的影响;通过卵巢组织离体培养,分析淫羊藿素和山柰酚对卵巢组织卵泡发育的影响。结果显示:淫羊藿素和山柰酚均在浓度为1×10^(-4)mol/L时可以显著促进颗粒细胞的增殖,同时可以促进颗粒细胞中PCNA、FSHR和ERαmRNA的表达(P<0.01);淫羊藿素和山柰酚作用的卵巢组织中的卵泡数量明显增多,且颗粒细胞由单层增殖至多层。研究表明,淫羊藿素和山柰酚能够促进等级前卵泡颗粒细胞的增殖,促进FSHR和ERαmRNA的表达,从而促进等级前卵泡向等级卵泡的发育。

淫羊藿素通过调控铁死亡增加鼻咽癌细胞的放射敏感性

目的探索淫羊藿素对鼻咽癌细胞放射增敏作用以及机制。方法通过MTT实验和克隆形成实验,观察淫羊藿素对鼻咽癌HONE1和HNE1细胞增殖能力的影响,筛选出给药剂量以及照射剂量。建立鼻咽癌细胞γ射线照射模型以及淫羊藿素给药模型,将细胞分为空白组、淫羊藿素组、照射组和淫羊藿素与照射联合组。通过流式细胞术检测4组细胞活性氧(ROS)的变化、周期分布以及细胞凋亡情况,通过Westernblot实验检测DNA损伤标志蛋白γ-H2AX、周期相关蛋白CDC25C、p-CDC25C、和CyclinB1以及铁死亡标志蛋白ACSL4和GXP4的表达情况。构建HONE1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察淫羊藿素与放射联合对肿瘤组织的生长情况的影响。结果淫羊藿素以剂量依赖性方式抑制鼻咽癌细胞活力,增强放射对鼻咽癌细胞增殖能力的抑制作用。流式细胞术及Westernblot实验显示,淫羊藿素与放射联合后促进鼻咽癌细胞ROS增多,γ-H2AX表达上调(P<0.001)。与单纯照射组相比,联合组会使鼻咽癌细胞发生G2期阻滞,CDC25C和CyclinB1表达下调,p-CDC25C表达上调(P<0.01)。联合组会促进鼻咽癌细胞发生细胞凋亡,铁死亡蛋白ACSL4表达上调而GXP4表达下调(P<0.001)。与空白组相比,其余3组的肿瘤生长速度明显减慢。与照射组相比,联合组肿瘤生长速度减慢,瘤体重量下降(P<0.001)。结论淫羊藿素可在体内、体外均增强鼻咽癌对放射的敏感性,可能主要是通过增强细胞活性氧促进鼻咽癌细胞发生铁死亡来达到放射增敏的作用。

镀膜工艺结合3D打印制备Mg-F膜/淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架的表征及成骨能力

背景:修饰生长因子的骨组织工程支架在骨修复材料中具有广阔的应用前景,但生长因子释放过快导致复合支架仅能在早期促进骨修复,镀膜工艺为解决该问题提供了新思路。目的:制备Mg-F膜/淫羊藿素/β-磷酸三钙支架,表征该支架的生物学特性。方法:应用3D打印技术制备β-磷酸三钙支架,通过低能电子束沉积技术制备淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架,再通过脉冲激光沉积技术制备Mg-F膜/淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架,检测支架的微观结构、孔隙直径、孔隙率、丝径、抗压强度及元素组成,并分析淫羊藿素的结合力和缓释性能。将兔骨髓间充质干细胞分别与β-磷酸三钙支架、淫羊藿素/β-磷酸三钙支架与Mg-F膜/淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架浸提液共培养,利用CCK8法检测细胞增殖;将兔骨髓间充质干细胞分别与上述3种支架共培养,加入成骨诱导培养基,利用茜素红染色观察成骨分化能力。结果与结论:(1)扫描电镜下可见,β-磷酸三钙支架结构较为规则,孔隙连通率好;淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架表面有较为致密的淫羊藿素膜覆盖原微观孔隙;Mg-F膜在淫羊藿素膜表面沉积,留下较为粗糙、疏松的表面,存在微观孔隙;3种支架的孔隙直径、孔隙率、丝径、抗压强度比较差异均无显著性意义(P>0.05);(2)Mg-F膜/淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架的淫羊藿素结合力优于淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架(P<0.05),且淫羊藿素缓释更持久;(3)CCK8检测结果显示,3种支架浸提液不影响骨髓间充质干细胞的生长;茜素红染色显示,成骨诱导21 d时,Mg-F膜/淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架组和淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架架组钙结节数及钙结节成熟度优于β-磷酸三钙支架组;(4)结果表明,Mg-F膜/淫羊藿素膜/β-磷酸三钙支架具有良好的细胞相容性、促成骨能力、药物结合力及缓释性能。

淫羊藿素通过阻断Notch信号通路抑制肝癌增殖

目的通过体外和体内实验,评价淫羊藿素对肝癌细胞和肿瘤小鼠模型的治疗作用,探讨淫羊藿素抑制肝癌增殖的作用机制。方法采用H22小鼠肝癌细胞株作为实验对象,应用CCK-8法检测不同浓度的淫羊藿素对肿瘤细胞增殖的影响。使用半数抑制浓度(IC50)的淫羊藿素作用于肿瘤细胞,通过western blot方法检测细胞中Notch信号通路受体Notch1、Notch2、Notch3的表达。使用BABL/C小鼠构建肝癌原位移植模型。模型小鼠随机分为对照组(生理盐水组)和治疗组(淫羊藿素组),治疗后观察和记录小鼠的体征变化以及生存时间。采用同样方法构建小鼠模型,治疗20 d后处死,收集肝脏和肿瘤组织,检测肝脏和肿瘤质量;通过免疫组化染色法,检测肝脏组织中肿瘤细胞增殖状况;应用western blot方法检测肿瘤组织内Notch信号通路受体表达情况。结果体外实验中,淫羊藿素阻断Notch信号通路受体表达,显著抑制肿瘤细胞增殖。体内实验中,淫羊藿素阻断Notch信号通路表达,显著抑制肿瘤生长,延长荷瘤小鼠的生存时间。结论淫羊藿素通过阻断Notch信号通路,抑制肝癌细胞体外和体内的增殖和生长,延长小鼠的生存时间。

淫羊藿素的药理作用及分子机制研究进展

淫羊藿素(icaritin)是中国传统中草药淫羊藿(Epimedium)的单体有效成分,具有免疫调节、心血管保护、骨保护、抗氧化等广泛的药理学活性,同时,淫羊藿素通过阻滞细胞周期、促进凋亡、抑制转移、免疫调节等多种途径对不同肿瘤均有抑制作用。综述有关淫羊藿素的化学成分及国内外在抗肿瘤和非抗肿瘤药理作用的最新研究进展,为淫羊藿素进一步开发和临床精准应用提供理论依据。

淫羊藿素抗炎作用的研究进展

慢性低度炎症性反应是许多慢性疾病的病理特征。甾体和非甾体抗炎药物是目前仅有的炎症性疾病治疗方法,但长期使用会产生严重不良反应。淫羊藿素(ICT)为传统中药淫羊藿中黄酮类活性成分的肠内代谢物,也是淫羊藿中淫羊藿苷的酶解产物。体内外研究均发现ICT具有良好的抗炎作用。本文综述了ICT抗炎作用研究进展,为ICT抗炎临床应用和药物研发提供依据。

淫羊藿成分脱水淫羊藿素研究进展

脱水淫羊藿素(anhydroicaritin,AHI)是一种从小檗科多年生植物淫羊藿中提取分离的天然异戊烯基取代的黄酮类化合物,是淫羊藿苷类的一种。AHI具有较强的药理活性,如抗肿瘤、骨保护、抗病毒、抗炎、调血脂等,可以通过淫羊藿苷降解法(蜗牛酶解法、酸解-酶解法、酶解-酸解法及混酸法)及化学合成法制备得到。对近年来AHI的制备方法及药理活性研究进行回顾与整理,为AHI的进一步研究提供参考。

淫羊藿素的化学合成和结构修饰研究进展

淫羊藿素是天然淫羊藿属植物主要活性成分淫羊藿苷的苷元,是淫羊藿苷在体内发挥疗效的主要形式,具有多种药理活性。目前,淫羊藿素在中国已上市,主要用于不适合或患者拒绝接受标准治疗,且既往未接受过全身系统性治疗、不可切除的肝细胞癌的治疗。由于天然来源的淫羊藿素含量低,限制了对淫羊藿素的研究。因此,研究人员发展了多种淫羊藿素的化学合成方法。此外,人们还针对淫羊藿素的低生物活性、低水溶性等缺点进行结构修饰,得到了多种活性较好的淫羊藿素衍生物。总结了关于淫羊藿素的化学合成方法及结构修饰的文献报道,期望对淫羊藿素的后续研究提供帮助。

淫羊藿素通过调控黏着斑激酶及下游细胞外信号调节激酶/细胞周期蛋白D1和蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素蛋白信号通路抑制肝癌细胞增殖的作用机制研究

目的探究淫羊藿素(icaritin,ICA)抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法以Huh7肝癌细胞为研究对象并在体外培养;设置200、100、50、20、10、5、2、1、0.5μmol/L不同浓度的ICA给药干预72小时之后,采用0.5%结晶紫染色分析ICA对Huh7肝癌细胞生存的影响;将Huh7肝癌细胞给与ICA高(10μmol/L)、中(5μmol/L)、低(2.5μmol/L)三个浓度,每个浓度设置三个复孔,通过克隆形成实验检测ICA对Huh7肝癌细胞增殖能力的影响;Huh7肝癌细胞给与ICA IC 50值浓度,对照孔及ICA给药孔分别在0、6、12、24小时在倒置显微镜下拍照,通过细胞划痕分析ICA对肝癌细胞迁移能力的影响;并且用流式细胞术对细胞周期进行分析。另外,通过蛋白印迹对增殖相关蛋白,如增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、磷酸化黏着斑激酶(phosphorylated focal adhesion kinase,p-FAK)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated protein kinase,p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)等蛋白的表达水平进行分析。结果ICA可以明显抑制肝癌细胞的增殖及迁移能力,并且使肝癌细胞的细胞周期在G1期发生阻滞(P<0.05)。另外,研究发现ICA可以下调p-FAK及其下游调节蛋白p-ERK、cyclin D1以及p-Akt、p-mTOR、p-S6的表达水平。结论ICA可能通过调控FAK及下游ERK/cyclin D1和Akt/mTOR信号通路从而抑制肝癌细胞的增殖生长。

淫羊藿素对人舌鳞癌细胞CAL-27增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的探索淫羊藿素对人舌鳞癌细胞CAL-27的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及可能作用机制。方法分别采用0、10、20、40μmol/L浓度的淫羊藿素干预人舌鳞癌细胞CAL-27。采用CCK-8法及克隆形成实验检测细胞增殖;采用划痕实验检测细胞迁移;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。采用分子对接预测淫羊藿素与舌鳞癌目的基因结合效果,采用逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)进行验证。结果淫羊藿素对CAL-27细胞作用24 h的半数抑制浓度(IC_(50))为33.37μmol/L,48 h IC_(50)为15.57μmol/L。与0μmol/L浓度淫羊藿素相比,40μmol/L浓度的CAL-27细胞克隆形成率降低,细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.001)。淫羊藿素浓度增加时,CAL-27的迁移、侵袭数呈淫羊藿素剂量依赖性抑制;细胞内AR、ESR1、PRKACA、PTGS2的相对表达量呈淫羊藿素剂量依赖性减少。结论淫羊藿素可抑制人舌鳞癌细胞CAL-27的增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与淫羊藿素影响细胞CAL-27的AR、ESR1、PRKACA的表达有关。

淫羊藿素、脱水淫羊藿素对T淋巴细胞的比较研究

通过分离制备小鼠淋巴细胞;CCK-8法检测脱水淫羊藿素(AHI)、淫羊藿素(ICA)对淋巴细胞的毒性;流式细胞术(FCM)结合双色免疫荧光染色技术检测AHI、ICA对con A刺激T淋巴细胞早期活化标志CD69,中期活化标志CD25的表达情况;利用活性染料CFSE,结合流式细胞术分析AHI、ICA对T淋巴细胞增殖的影响;流式细胞术分析AHI、ICA对T淋巴细胞周期的影响;流式细胞术实时分析AHI、ICA对T淋巴细胞钙离子内流的影响;使用流式蛋白定量检测技术(CBA)检测AHI、ICA对T淋巴细胞分泌细胞因子的影响.结果显示AHI与ICA对活化的小鼠T淋巴细胞具有明显的免疫抑制作用,特别是ICA,能明显抑制经con A刺激的T淋巴细胞早中期活化、增殖、钙离子内流,并阻滞细胞周期在G0/G1期,以及分泌IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF和IL-12p70细胞因子;ICA比AHI对活化的小鼠T淋巴细胞具有更明显的免疫抑制作用.

淫羊藿素通过抗氧化损伤延缓CCl_4诱导的大鼠肝硬化进程

目的探讨淫羊藿素延缓大鼠肝硬化进程的作用及可能机制。方法用不同浓度淫羊藿素处理经CCl4损伤的体外培养大鼠原代肝细胞,测定细胞培养液中ALT、AST和MDA浓度、细胞内SOD含量及凋亡细胞数量。建立CCl4诱导的大鼠肝硬化模型,用淫羊藿素处理后检测各组大鼠血清ALT、AST、ALB、GLB浓度,并观察大鼠肝组织病理学变化和胶原蛋白Ⅰ表达情况。结果 CCl4损伤可使原代大鼠肝细胞培养上清中ALT、AST活性和MDA含量以及细胞凋亡率升高,细胞内SOD活性降低。用淫羊藿素预处理后,其培养上清中ALT、AST活性和MDA含量以及细胞凋亡率均明显低于凋亡模型组和药物载体组,细胞内SOD活性则明显高于模型组和药物载体组,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。体内研究结果显示,与模型组比较,淫羊藿素处理可降低肝硬化模型大鼠血清ALT、AST水平,改善肝功能指标(P<0.05)并减少胶原蛋白Ⅰ沉积,减轻肝硬化程度。结论淫羊藿素可能通过抗氧化损伤延缓CCl4诱导的肝纤维化向肝硬化发展的进程。

淫羊藿素通过雌激素受体和骨形态发生蛋白信号诱导MC3T3-E1 subclone 14细胞分化

目的:观察淫羊藿素(ICT)对MC3T3-E1 subclone 14前体成骨细胞株增殖、分化的影响,以及雌激素受体(ER)和骨形态发生蛋白(BMP)信号在分化中的作用。方法:WST-8、BrdU法检测ICT对MC3T3-E1subclone 14细胞活力和增殖的影响;ICI182780阻断ER受体信号后,检测ICT和noggin对MC3T3-E1 subclone 14细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、I型胶原(Col I)和骨钙素(BGP)的影响;实时荧光PCR检测ICT对BMP-2、4、7 mR-NA表达的影响;Western blotting检测ER受体信号阻断后,ICT对Smad1/5/8蛋白磷酸化的影响。结果:ICT(0.1μmol/L、1μmol/L)可以提高MC3T3-E1 subclone 14细胞ALP、Col I、BGP和矿化结节数量(P<0.01或P<0.05),表明ICT有促分化的作用,但对细胞活力和增殖指数无明显影响;阻断ER受体信号后,ICT促分化作用明显下降(P<0.01);ICT可以提高BMP-2、4 mRNA的表达(P<0.01),但对BMP-7 mRNA无作用(P>0.01);阻断ER信号后,ICT促Smad1/5/8磷酸化明显减弱(P<0.01)。进一步阻断BMP/Smad信号可以抑制ICT促分化的作用(P<0.01)。结论:ICT可以通过ER受体激活BMP/Smad信号通路,进而促进MC3T3-E1 subclone 14细胞的分化。

淫羊藿素脂质体抗大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的探讨淫羊藿素脂质体对大鼠肝脏缺血再灌注(I/R)损伤的作用及其机制。方法建立大鼠70%肝脏I/R损伤模型。将120只雄性大鼠随机分成淫羊藿素脂质体+I/R损伤(ICT+I/R)组、空白脂质体+I/R损伤(LIP+I/R)组、单纯I/R损伤组和假手术(Sham)组,每组再随机分成2h和6h两个亚组。Sham组仅游离肝门,其余各组均行70%肝脏缺血60min。血流阻断前10min,ICT+I/R组、LIP+I/R组分别经门静脉注射淫羊藿素脂质体(1.5mg/kg)、空白脂质体(与淫羊藿素脂质体等体积),I/R组和Sham组不行任何预处理。经2、6h血流再灌注后,采集各组血液及肝脏组织标本,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平以及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)以及髓过氧化物酶(MPO)含量。采用H-E染色法观察肝脏组织形态,TUNEL染色法观察肝细胞凋亡情况并测定凋亡指数(AI)。结果再灌注2h,ICT+I/R组的ALT、MDA、MPO、AI较LIP+I/R组和I/R组下降,差异有统计学意义(P<0.01);再灌注6h,与LIP+I/R组和I/R组相比,ICT+I/R组的ALT、AST、MDA、AI下降,同时SOD、NO、NOS、eNOS升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论淫羊藿素脂质体能够通过增加SOD含量、减少MDA的生成,促进eNOS表达的升高、增加NO的含量以及抑制MPO的聚集、减少肝细胞凋亡等多途径发挥抗大鼠肝脏I/R损伤的保护作用。

淫羊藿素通过抑制Hedgehog信号通路保护终板软骨细胞退变

目的:探讨淫羊藿素药物在体外力学诱导终板软骨细胞退变中的作用机制。方法:应用FX-5000T flexcell细胞应力加载系统体外建立大鼠终板软骨细胞退变模型,实验分正常对照组(NC组)、力学刺激组(ICMT组)、力学刺激+药物处理组(ICT+ICMT组)。甲苯胺蓝及鬼笔环肽染色观察力学刺激后细胞形态变化,CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,Western blot及RT-q PCR分别检测软骨细胞相关基因及蛋白水平变化。结果:大鼠终板软骨细胞力学刺激后出现退变,细胞形态由多边形被拉成长梭形,ICMT组、ICT+ICMT组细胞增殖率均高于NC组,但ICMT组与ICT+ICMT组间细胞增殖率比较无统计学差异,ICT+ICMT组细胞凋亡率较ICMT组明显改善,加入淫羊藿素药物处理后终板软骨细胞因力学刺激导致的退变程度有所缓解,Hedgehog信号通路被抑制。结论:淫羊藿素药物可通过抑制Hedgehog信号通路活性起到保护因力学诱导而引起的终板软骨细胞退变作用。