补骨脂-淫羊藿药对抗绝经后骨质疏松症的网络药理学分析

目的:采用网络药理学方法分析补骨脂-淫羊藿药对抗绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)的作用机制。方法:利用TCMSP数据库,TCM Database@Taiwan数据库和BATAMAN-TCM数据库检索并筛选补骨脂和淫羊藿的有效成分,然后预测有效成分的靶蛋白,构建有效成分-靶蛋白网络。利用GeneCards数据库,OMIM数据库,GKB数据库和TTD数据库检索PMOP的相关蛋白和基因,找到补骨脂-淫羊藿药对治疗PMOP的相关靶点,进行富集分析。结果:补骨脂-淫羊藿药对共获得51个有效成分和292个靶蛋白,其中节点度>5的共有21个有效成分与26个靶蛋白相连,其中槲皮素,山柰酚,木犀草素,异补骨脂甲素和脱水淫羊藿素处于核心位置。对补骨脂-淫羊藿药对与PMOP共有的132个共同靶标分析显示,共同靶点主要富集在转录因子活性、类固醇激素受体活性、蛋白激酶结合和营养水平等,主要富集的信号通路有糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、癌症相关途径、流体剪切应力与动脉粥样硬化、内分泌耐药和PI3K-Akt信号通路。结论:补骨脂-淫羊藿药对可能通过AGE-RAGE信号通路、流体剪切应力、PI3K-Akt信号通路和调节内分泌系统多靶点、多途径治疗PMOP。

基于网络药理学的仙茅-淫羊藿药对治疗卵巢早衰机制研究

目的:研究仙茅-淫羊藿药对治疗卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)的主要活性成分及其靶点的作用机制。方法:检索人类基因组注释数据库GeneCards,Drugbank数据库获取POF靶点,借助中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)获得仙茅、淫羊藿的潜在活性成分及其对应靶点,使用Bioinformatics&Evolutionary Genomics平台筛选仙茅-淫羊藿药对的活性成分与POF的共有靶点,利用Cytoscape软件构建网络图;采用String数据库构建蛋白质相互作用网络;使用DAVID数据库进行基因本体论富集分析(gene ontology,GO)与KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。结果:通过筛选得到30个药物活性成分,共涉及靶点278个,与疾病靶点有关的活性成分26个,得到仙茅、淫羊藿药对-疾病共同靶点41个,主要富集于139个生物过程和60条信号通路,涉及PI3K-Akt、甲状腺激素、MAPK等信号通路。结论:仙茅-淫羊藿药对活性靶点主要通过PI3K-Akt、甲状腺激素、MAPK等信号通路调控卵巢细胞过程及代谢发挥治疗作用。

淫羊藿药渣总糖提取工艺、剩余黄酮含量测定与抗氧化活性研究

目的:了解淫羊藿药渣中总糖与黄酮的残留情况,为淫羊藿药渣的二次开发提供运用依据。方法:以水为提取剂,考察提取温度、提取时间和料液比对淫羊藿药渣总糖提取率的影响;在单因素试验获得最优淫羊藿药渣总糖提取工艺的基础上,采用正交试验确定淫羊藿药渣中总糖的最佳提取工艺,采用紫外-可见分光光度法,以芦丁为对照品,在270 nm处测定吸光度,计算总黄酮的含量并测定其抗氧化活性。结果:提取时间为3 h时淫羊藿药渣总糖提取率最大,2 h略小于3 h,当提取时间再增加时提取率反而有所下降,从时间成本等因素考虑,选择2 h为最佳提取时间;提取温度为90℃时淫羊藿药渣总糖提取率最大,当提取温度再增加,提取率下降,以90℃为最佳提取温度;料液比为1∶30时,淫羊藿药渣总糖提取率最大,以此料液比作为最佳提取条件;影响淫羊藿药渣总糖提取率的各因素主次顺序为提取温度(A)>料液比(C)>提取时间(B),提取温度为100℃,提取时间为3 h,料液比为1∶30时,淫羊藿药渣总糖的提取率为4.03%;淫羊藿药渣中36%左右的黄酮类物质对DPPH自由基有较好的清除作用。结论:选择最佳提取工艺可增加淫羊藿药渣中总糖的提取率,且淫羊藿药渣中一定量的黄酮类物质对DPPH自由基有较好的清除作用。

淫羊藿药渣总氨基酸水解液分析及其制备工艺优化

为了建立适用于淫羊藿药渣总氨基酸分析的快速定量方法,并提高其利用率,采用茚三酮显色法对其进行定量分析,同时以高效液相色谱法与凯氏定氮法测定值作为对比参照,通过响应面法优化淫羊藿药渣总氨基酸水解液制备工艺。结果表明,茚三酮显色法测得淫羊藿药渣中总氨基酸含量为6. 12%,介于其他2种方法测定值之间;淫羊藿药渣总氨基酸制备工艺优化条件如下:盐酸浓度为6. 0 mol/L,水解时间为23. 4 h,水解温度为115℃。由结果可以看出,茚三酮显色法适用于淫羊藿药渣中总氨基酸的快速定量分析,通过响应面法优化其制备工艺后,氨基酸提取率为6. 50%,有效提高了淫羊藿药渣资源的利用率。

利用淫羊藿药渣栽培金针菇试验

试验采用淫羊藿药渣为主料,以麸皮、玉米粉为变量,设计了4个不同配方,用来栽培金针菇,实验中选用两个金针菇菌株2304和968,采用常规方法进行金针菇栽培管理,通过观察菌丝生长速度、长势,统计子实体产量及商品性状,与对照组对比,结果证明用淫羊藿药渣作为主料栽培金针菇是可行的,且两个不同的金针菌株各适宜不同的配方。配方4适宜菌株2304,配方2适宜菌株968。

基于网络药理学探讨仙茅-淫羊藿药对治疗卵巢储备功能减退的作用机制

目的:基于网络药理学探讨仙茅-淫羊藿药对治疗卵巢储备功能减退(DOR)的作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)挖掘仙茅、淫羊藿的活性成分,采用UniProt数据库校正靶点的基因名称,通过人类基因注释数据库(GeneCards)、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)及疾病相关的基因与突变位点数据库(Dis GeNET)得到DOR的疾病靶点,并与仙茅-淫羊藿药对的作用靶点取交集,得到其治疗DOR的有效靶点。将上述靶点输入STRING 11.0数据库进行蛋白-蛋白交互(PPI)网络预测,最后利用Metascape进行GO富集分析和KEGG信号通路富集分析,揭示仙茅-淫羊藿药对治疗DOR的潜在信号通路。结果:共筛选出仙茅-淫羊藿药对29个活性成分和128个DOR疾病靶点。通过PPI网络分析,仙茅-淫羊藿药对治疗DOR可能与AKT1、IL-6、TP53、VEGFA、CASP3等蛋白有关。GO和KEGG分析结果显示,仙茅-淫羊藿药对治疗DOR的靶点富集于癌症途径、晚期糖基化产物-晚期糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)信号通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路、细胞凋亡通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、核因子-κB(NF-κB)信号通路等。结论:PI3K-AKT信号通路、细胞凋亡、HIF-1信号通路、NF-κB信号通路可能是仙茅-淫羊藿药对调整DOR患者卵泡发育情况的主要通路。

淫羊藿药渣中复合氨基酸水解液脱色工艺研究

为提高淫羊藿药渣中复合氨基酸的检测分析准确度,该试验对其复合氨基酸水解液进行脱色工艺优化。首先筛选最佳脱色剂,然后通过响应面法优化复合氨基酸水解液脱色工艺条件,使水解液脱色率和氨基酸回收率最佳。通过筛选,AB-8大孔树脂适合用于淫羊藿药渣复合氨基酸水解液脱色,响应面法优化得到的最佳脱色工艺条件为:树脂用量0.22g,脱色时间27min,脱色温度24℃,经验证,该条件下,水解液脱色率为79.05%,氨基酸回收率为90.88%。应用响应面法能优化脱色工艺条件,用以满足检测分析的精度要求。

淫羊藿药渣栽培平菇的对比研究

为探究淫羊藿药渣栽培平菇生长情况和改善贵州淫羊藿废弃药渣资源的再利用问题,采用重点实验室培养的平菇菌株,将不同比例的淫羊藿药渣添加到栽培料中,并与玉米杆栽培料进行对比,比较各处理条件下平菇菌丝性状、发育性状和产量性状等差异。结果表明:以淫羊藿药渣为主基质,配方为淫羊霍54%、玉米面3%、普钙10%、石灰3%、玉米芯15%、麸皮15%的T3处理栽培平菇其产量指标表现较好,生物学转化率较高。

淫羊藿苷含药血清促进3种细胞共培养体系中软骨细胞增殖和干细胞成软骨分化

背景:关节软骨损伤修复能力十分有限,组织工程技术为修复受损软骨提供了新的治疗方案,其中软骨细胞、骨髓间充质干细胞和滑膜间充质干细胞之间的相互影响和诱导作用是自体软骨损伤愈合的基础。目的:构建软骨细胞-骨髓间充质干细胞-滑膜间充质干细胞共培养体系用以模拟软骨细胞体内微环境,并探究其最佳细胞接种比例,同时观察淫羊藿苷含药血清对该体系中软骨细胞增殖和干细胞成软骨分化的影响。方法:提取、培养、鉴定大鼠膝关节软骨细胞、骨髓间充质干细胞和滑膜间充质干细胞,按不同细胞接种比例构建软骨细胞-骨髓间充质干细胞-滑膜间充质干细胞非接触共培养体系,共培养72 h后观察软骨细胞增殖活性和表型能力,选择综合效应最佳的共培养体系;用淫羊藿苷溶液(0.25 mg/m L)灌胃新西兰大白兔制备淫羊藿苷含药血清,对照组共培养体系用含体积分数为10%胎牛血清、1%双抗的高糖DMEM培养液培养,实验组共培养体系在此基础之上加入体积分数为10%淫羊藿苷含药血清进行干预,24,48 h后检测两组软骨细胞增殖活性和Ⅱ型胶原表达,14 d后采用免疫荧光染色检测骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞成软骨分化情况。结果与结论:(1)3种细胞以不同比例共培养时均可正常贴壁生长,当软骨细胞、骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞接种比例为2∶1∶1时,共培养体系中软骨细胞表现出最佳增殖活性和表型能力;(2)与对照组相比,实验组培养24 h后软骨细胞增殖活性和Ⅱ型胶原表达显著升高(P<0.01),48 h后两组仍有差异(P<0.05),培养14 d后两组骨髓间充质干细胞和滑膜间充质干细胞出现明显的软骨分化,部分细胞呈现圆形或椭圆形,胞浆Ⅱ型胶原免疫荧光染色为阳性,实验组荧光强度明显高于对照组(P<0.01);(3)结果表明,以非接触共培养方法可以成功建立软骨细胞-骨髓间充质干细胞-滑膜间充质干细胞共培养体系且细胞比例为2∶1∶1时软骨细胞增殖活性和表型能力最佳;同时淫羊藿苷含药血清具有促进该体系中软骨细胞增殖及骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞成软骨分化的作用。

内生菌Ilyonectria cyclaminicola固态发酵对淫羊藿药渣功效成分的影响

目的探究朝鲜淫羊藿内生菌Ilyonectria cyclaminicola对淫羊藿药渣的生物转化作用,为淫羊藿药渣的综合开发利用提供研究基础。方法培养朝鲜淫羊藿内生真菌Ilyonectria cyclaminicola,应用于固态发酵淫羊藿药渣,测定不同时期空白对照组和固态发酵组药渣中总黄酮及黄酮醇苷类成分含量,对比分析加入葡萄糖和营养素等对固体发酵物中有效成分转化积累的动态影响。结果淫羊藿药渣经Ilyonectria cyclaminicola固态发酵后,营养素药渣试验组发酵40 d时,总黄酮含量最高为16.923 mg/g,相比未发酵的药渣提高了15.32%;葡萄糖药渣试验组发酵40 d时,黄酮醇苷含量最高为7.639 mg/g,相比未发酵的药渣提高了167.19%。结论应用内生菌Ilyonectria cyclaminicola固态发酵淫羊藿药渣,可以提高其总黄酮及黄酮醇苷含量,如在发酵时加入葡萄糖和营养素可提供内生菌更充足的营养,生物转化的效果更佳。该研究成果为淫羊藿药渣的再利用,变废为宝和生态环境保护提供了科学依据。

补骨脂-淫羊藿药对对去卵巢骨质疏松型大鼠血清IL-10、TNF-α水平的影响

目的:观察补骨脂-淫羊藿药对对去卵巢骨质疏松型大鼠血清中IL-10、TNF-α水平的影响,探讨补骨脂-淫羊藿药对防治绝经后骨质疏松症的作用机制。方法:3月龄SD雌性大鼠40只,分为假手术组、模型组、壮骨止痛胶囊组、阳性对照组、补骨脂-淫羊藿药对组,采用去卵巢3个月制备绝经后骨质疏松大鼠模型,连续灌胃13周后检测比较各组大鼠血清IL-10、TNF-α水平。结果:与模型组比较,补骨脂-淫羊藿药对组能提高骨质疏松模型大鼠血清IL-10水平,但差异无统计学意义(P>0.05);补骨脂-淫羊藿药对组能显著降低模型大鼠血清TNF-α水平,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:补骨脂-淫羊藿药对可以抑制骨吸收,调节成骨细胞与破骨细胞的功能活动,使成骨细胞活动加剧,破骨细胞活动减弱,从而使骨吸收/骨形成代谢保持动态平衡。

基于网络药理学研究淫羊藿-女贞子药对抗骨质疏松作用机制

目的利用网络药理学探讨淫羊藿-女贞子药对抗骨质疏松的作用机制。方法采用中药系统药理学数据库(TCMSP)筛选淫羊藿-女贞子药对活性成分,预测活性成分对应的靶蛋白和相互作用蛋白,与来源于CTD和TTD数据库的骨质疏松靶蛋白和相互作用蛋白进行交集获取核心靶蛋白,利用cytoscape构建活性成分-靶蛋白网络,成分-靶点-疾病交互网络,利用DAVID数据库富集核心靶蛋白的相关信号通路。结果检索淫羊藿-女贞子药对活性成分19个,筛选53个核心靶蛋白,度值最高的核心靶蛋白为雌激素受体1(ESR1),获取32条相关信号通路。结论淫羊藿-女贞子药对可通过调节多个与成骨细胞、破骨细胞功能相关的信号途径而起到抗骨质疏松作用,靶蛋白ESR1及其相关信号通路可能较为重要。

淫羊藿-川芎药对HPLC指纹图谱建立与骨关节炎的谱效关系研究

目的建立淫羊藿-川芎药对HPLC指纹图谱,并分析它与骨关节炎的谱效关系。方法HPLC法建立22批药对的指纹图谱,Hulth法建立大鼠骨关节炎模型,酶免法检测大鼠血浆中MMP-13、MMP-3、IL-1β、NO、PGE_(2)水平,双变量相关分析、灰色关联度分析、遗传神经网络研究其谱效关系。结果指纹图谱中共确定20个共有峰,通过对照品比对指认出10个。给予淫羊藿-川芎药对后,大鼠血浆中MMP-13、MMP-3、IL-1β、NO、PGE_(2)水平降低(P<0.05,P<0.01)。药对中抑制MMPs表达贡献较大的有9个峰,为淫羊藿成分;抑制炎性因子贡献较大的有7个峰,为淫羊藿-川芎药对成分。结论淫羊藿既可调控MMPs表达,又具有抗炎作用,而川芎主要发挥抗炎作用。

乳增宁胶囊中淫羊藿苷含量测定方法改进

乳增宁胶囊是用艾叶、淫羊藿、柴胡、川楝子、天门冬和土贝母６味药材经适宜的加工而制成的胶囊。具有疏肝解郁，调理冲任功效，用于肝郁气滞型及冲任失调的乳腺增生等症。卫生部药品标准［１］中采用薄层刮板－紫外分光光度法测定其中淫羊藿苷的含量，方法繁琐，重现性较...

薄层扫描法测定昂勃振胶囊中淫羊藿苷的含量

采用单波长薄层扫描法测定昂勃振胶囊中淫羊藿苷的含量：硅胶Ｇ板，醋酸乙酯－丁酮－甲酸－水（１０：１：１：１）为展开剂，λ＝３４５ｎｍ，外标两点法定量，平均回收率９９． ７％， ＲＳＤ＝１． ３１％。

“淫羊藿-肉苁蓉”治疗乳腺癌骨转移的作用机制探讨

目的:"淫羊藿-肉苁蓉"药对是治疗乳腺癌骨转移常用补肾类药物,具有良好的临床疗效,但药理学机制尚未完全阐明,本研究应用网络药理学和生物信息学技术探讨"淫羊藿-肉苁蓉"药对治疗乳腺癌骨转移的作用机制。方法:利用TCMSP、TCM Database@Taiwan和TCMID等数据库筛选药物主要有效成分,利用Swiss Target Prediction和STITCH数据库检索淫羊藿和肉苁蓉潜在作用靶点,通过Genecards、OMIN和Drugbank数据库检索乳腺癌骨转移疾病基因,并将药物作用靶点和疾病基因进行映射,进行GO和KEGG信号通路分析,采用Cytoscape3.6.0软件构建"药物-成分-靶点-信号通路"的可视化网络,筛选出核心基因。结果:研究发现淫羊藿和肉苁蓉的主要有效成分有30种,潜在治疗靶点涉及544个基因,其中101个基因是淫羊藿和肉苁蓉治疗乳腺癌骨转移的潜在靶点;通过GO和KEGG通路分析发现作用机制涉及抗肿瘤、促进成骨细胞分化、诱导破骨细胞凋亡和调节骨微环境,如细胞凋亡、破骨细胞分化、PI3K-AKT、HIF-1信号通路、T细胞受体信号通路等。在蛋白互作网络分析中发现TP53、VEGFA、AKT1、EGFR、SRC、CCND1、MAPK3、ESR1可能是治疗乳腺癌骨转移的关键基因。结论:该研究通过网络药理学构建"药物-成分-靶向-信号通路"的网络,发现"淫羊藿-肉苁蓉"药对治疗乳腺癌骨转移作用机制涉及多靶点、多通路,有利于指导临床用药。

淫羊藿含药血清对骨质疏松大鼠骨髓基质干细胞成脂分化PPARγ mRNA表达的影响

目的探讨淫羊藿含药血清对绝经后骨质疏松症大鼠骨髓基质干细胞(MSCs)成脂分化PPARγ mRNA表达的干预作用。方法 15只SPF级SD雌性大鼠,无菌条件下分离培养骨髓间基质干细胞,传至3代。将所获的细胞随机分为模型组、成脂诱导组、西药组、成脂诱导西药组、中药组和成脂诱导中药高、中、低剂量组。使用小牛血清,淫羊藿高、中、低剂量含药血清以及尼尔雌醇含药血清配合成脂诱导剂分别对MSCs进行干预,观察各组干预后7 d PPARγ mRNA表达情况。结果与模型组比较,西药组、成脂诱导西药组、中药高剂量组PPARγ mRNA表达均有下降,差异显著(P<0.05),中药低剂量组明显降低(P<0.01);与成脂诱导组比较,成脂诱导中药低剂量组PPARγmRNA表达明显降低(P<0.01),成脂诱导中药高剂量组表达降低具有显著性差异(P<0.05);成脂诱导中药各组中,以低剂量组抑制PPARγ mRNA表达最为明显,中药高剂量组其次。结论通过7 d的干预,各组均有PPARγmRNA表达,其中以模型组表达最为明显;在抑制PPARγ mRNA表达方面以中药低、高剂量组为最优。

基于网络药理学的“淫羊藿-白芍”配伍治疗腰椎间盘突出症作用机制研究

基于网络药理学方法探讨"淫羊藿-白芍"药对治疗腰椎间盘突出症的关键靶点及作用机制。利用目前国内外公认的数据库平台和分析软件,从药物和疾病2个方面出发构建网络,利用TCMSP等数据库收集淫羊藿、白芍的化学成分,根据阈值筛选及结合文献报道确定其有效活性成分并预测作用靶点。通过GeneCards,OMIM,DisGeNET数据库收集腰椎间盘突出症疾病基因。将药物靶点与疾病靶点进行映射,并对关键靶点进行蛋白互作网络分析、GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析。最终分别确定淫羊藿和白芍有效活性成分23,13个,通过检索共获得药物靶点624个,经过标准化处理后获得214个药物靶点。通过GeneCards,OMIM和DisGeNET数据库分别收集腰椎间盘突出症的相关靶点306,2,5个,汇总去重后共获得293个疾病靶点。药物靶点与疾病靶点映射后获得44个共有靶点,PPI蛋白互作网络分析发现IL-6,TNF,AKT1,MAPK1,VEGFA等可能是"淫羊藿-白芍"治疗腰椎间盘突出症的核心靶点。GO富集分析确定了56个条目(P<0.05),其中生物过程主要包括免疫反应、细胞凋亡等;细胞成分主要包括细胞外空间、细胞外区域等;分子功能主要包括细胞因子活性、金属肽酶活性等。KEGG通路富集分析确定了91条相关信号通路,其中信号通路涉及炎症、代谢、衰老等方面,主要有IL-17信号通路、TNF信号通路等。"淫羊藿-白芍"药对治疗腰椎间盘突出症具有多途径、多靶点作用的特点。该研究初步探讨了其作用的关键靶点及涉及的生物学过程和信号通路,发现其可能是通过影响炎症、免疫调节等途径发挥治疗作用,为接下来进一步利用分子生物学进行实验验证奠定了基础。