镁硅酸盐纳米粘土介导的深绿木霉HB20111的遗传转化

【背景】木霉菌遗传转化方法的烦琐复杂限制了对其基因克隆、基因功能的研究。【目的】建立深绿木霉HB20111便捷、高效的遗传转化体系。【方法】利用镁硅酸盐纳米粘土作为载体吸附含有荧光蛋白基因gfp的丝状真菌表达载体pCAMBIA1303-gpdA-GFP-TrpC-Hygro,形成质粒-镁硅酸盐纳米粘土复合物,在超声条件下对深绿木霉HB20111分生孢子进行遗传转化。【结果】当分生孢子浓度为10^(6)CFU/mL、分生孢子悬液培养12h、镁硅酸盐纳米粘土浓度100mg/L和超声处理30 s(输出功率为100 W/cm^(2),发射频率为50 kHz)条件下对深绿木霉HB20111的转化效率最高,可以达到124个转化子/μg-DNA。【结论】使用镁硅酸盐纳米粘土作为载体可以实现对深绿木霉HB20111便捷、高效的遗传转化,转化子抗性基因和报告基因可以稳定遗传。

木霉共培养发酵对黄瓜枯萎病的防治效果

为明确深绿木霉HB20111和哈茨木霉TW21990共培养发酵对黄瓜枯萎病的防治作用,采用对峙培养法观察两菌株的亲和性,通过浸种抑菌萌发试验筛选共培养发酵的最佳条件,并在温室条件下验证其生防效果。结果表明:在PDA平板上25℃对峙培养5d,两株木霉亲和性较好。两菌株等量接种发酵培养基,25℃、130r/min振荡培养72h,共培养发酵液500倍稀释浸种处理,对黄瓜种子根长的促生效果显著(P<0.05)。温室条件下,共培养发酵液500倍稀释液浸种对黄瓜枯萎病的温室防治效果和黄瓜幼苗增重率分别达73.65%和35.64%,较单菌株HB20111、TW21990分别提高了6.76%、9.46%和11.54%、13.31%;同时共培养发酵液也显著降低了黄瓜根际土尖孢镰孢拷贝数(P<0.05)。HB20111和TW21990共培养具有协同增效作用,本文为高效生物农药的研发提供了新思路。

防治西洋参立枯病木霉菌株的筛选鉴定及其小区防治效果

利用平板对峙实验及小区试验,筛选高效防治西洋参立枯病的木霉菌株,并采用ITS(internal transcribed spacer)序列分析与形态学特征相结合的方法进行种类鉴定。结果表明,供试木霉菌株在PDA平板上对立枯丝核菌( R. solani )均有抑制作用,菌株HB20111效果最好,抑制率达99.33%;菌株HB20111对西洋参立枯病的小区效果显著,与其他处理间存在显著性差异( P <0.05);第1年拌种处理对西洋参立枯病的防治效果、单株参增重率及总参增重率分别达71.81%、 33.54%和92.75%;第2年蘸根处理对西洋参立枯病的防治效果、单株参增重率及总参增重率分别达91.04%、158.06%和1 369.34%;菌株HB20111的分生孢子梗为典型的单侧分枝,其他形态学特征同深绿木霉( T. atroviride )一致,ITS序列与 T. atroviride 同源性达 100.0%,将菌株HB20111鉴定为 T. atroviride 。HB20111生长速度快,产孢能力强,生防效果高,有望替代化学杀菌剂应用于西洋参种植中。

两株木霉共培养发酵提高对小麦苗期茎基腐病的防治效果

通过平板对峙培养法、孢子萌发法和温室盆栽法筛选高效防治小麦苗期茎基腐病的木霉共培养菌株。从17株供试菌株中,筛选出3株平板抑制率较高的木霉菌株:深绿木霉HB20111、哈茨木霉LTR-2和TW21990,并进行两两组合共培养发酵。孢子萌发试验表明,HB20111+TW21990共培养发酵滤液对假禾谷镰孢孢子萌发抑制率最高,达71.83%,较单菌株HB20111和TW21990分别提高了6.13%和19.53%(P<0.05)。温室条件下,HB20111+TW21990共培养发酵液500×稀释浸种效果最好,对小麦苗期茎基腐病防治效果和幼苗质量增长率分别达78.81%和130.80%,较单菌株HB20111和TW21990的分别提高了17.88%、30.46%和50.05%、61.22%(P<0.05);荧光定量检测结果表明,与单菌株相比,HB20111+TW21990共培养发酵显著降低假禾谷镰孢在小麦幼苗根围土、根际土、根系和茎基部中的拷贝数(P<0.05),且假禾谷镰孢拷贝数与病情指数呈正相关,与幼苗鲜质量呈负相关。本研究发现HB20111+TW21990共培养发酵具有增效作用,对小麦苗期茎基腐病的防治效果显著高于单菌株。