鸡传染性喉气管炎病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立

旨在建立检测鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus, ILTV)绝对定量方法。根据已发表的鸡ILTV的TK基因序列,针对其保守区域分别设计1对特异引物和1条探针,建立检测鸡ILTV的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法,并评价其特异性、敏感性和重复性。结果显示,建立方法的最佳引物浓度为20μmol/μL,最佳探针浓度为10μmol/μL,最佳退火温度为56℃。特异性检测结果显示,建立的方法只检出ILTV,没有检出其他病原株。敏感性检测结果显示,采用建立的方法定量检出ILTV重组质粒标准品的最低限为4.6拷贝/μL。对3个连续稀释的pMD18-ILTV重组质粒DNA进行检测,3次重复检测结果的变异系数均小于5%。对83份病鸡喉拭子、肺及脾组织样品进行检测,采用建立的ddPCR检出ILTV阳性样品10份,荧光定量PCR检出ILTV阳性样品9份,ddPCR的阳性检出率(12.05%)高于荧光定量PCR的阳性检出率(10.84%)。结果表明,建立的ddPCR方法定量检测ILTV特异性强、敏感性高、重复性好,为绝对定量检测ILTV提供更好的技术支撑。

鸡传染性支气管炎和禽衣原体病的多表位DNA疫苗构建及其免疫原性研究

试验旨在设计和构建基于鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白和鹦鹉热衣原体(Cps)主要外膜蛋白(MOMP)的抗原多表位DNA疫苗,并分析其免疫原性。研究利用免疫信息学方法筛选出IBV S1蛋白和Cps MOMP蛋白的优势抗原表位,设计多表位基因M,并利用多种生物信息学软件对其进行预测分析;将M基因、S1和MOMP串联基因分别连接至真核表达载体pEGFP-N1并转染至DF-1细胞,利用Western blot检测目标蛋白的表达情况。将上述重组质粒肌内注射7日龄雏鸡,四免后检测免疫鸡血清中特异性抗体IgG、细胞因子及T淋巴细胞含量。结果显示:构建的表位蛋白结构稳定、免疫原性较好且无副作用;重组质粒pEGFP-M和pEGFP-S1-MOMP与预期大小相符;与pEGFP-N1组和PBS组相比,四免后,pEGFP-M免疫组鸡血清中抗IBV IgG和抗Cps IgG抗体水平极显著升高(P<0.01),与pEGFP-S1-MOMP组相当;pEGFP-M组鸡血清中细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平,T淋巴细胞抗原CD3+、CD4+和CD8+含量均极显著高于pEGFP-N1组和PBS组(P<0.01)。结果表明,构建的多表位DNA疫苗pEGFP-M能够激发鸡的体液免疫和细胞免疫反应,为研制同时预防鸡传染性支气管炎和禽衣原体病的多表位疫苗奠定基础。

2020—2022年我国部分地区鸡传染性喉气管炎流行病学调查

为了解我国部分地区鸡传染性喉气管炎(ILT)的流行特点,2020-2022年对安徽、北京、福建等29个省级行政区部分养殖场(户)送检的47210份疑似鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染样品进行了PCR检测,并对检测结果进行了空间、时间、群间分布统计分析。结果显示:共检出413份ILTV阳性样品,阳性检出率为0.87%;2020-2022年ILTV阳性检出率分别为1.41%、0.72%和0.56%;每月均有ILTV检出,10月一次年5月阳性检出率较高;大多数省份均有ILTV阳性检出,养鸡密集省份的阳性率较高;4种品种鸡均易感,其中黄羽鸡(1.56%)和蛋鸡(1.11%)阳性率较高;>3~9以及>18~24周龄鸡群阳性率较高。结果说明:我国鸡群中ILTV流行范围较广,阳性检出率呈逐年下降趋势,低温季节和小周龄鸡群感染风险相对较高,建议加强鸡群的饲养管理,并持续开展ILT流行病学监测,以期为ILT防控策略调整-和研发新型疫苗奠定基础。

鸡传染性喉气管炎的临床症状及防治方法

鸡传染性喉气管炎(Avian Infectious laryngo Tracheitis,AILT)是由传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus,ILTV)引发的一种呼吸道疾病,主要在鸡群中流行,主要感染鸡的呼吸道,导致气管和喉部黏膜肿胀和水肿,进一步发展为糜烂和出血[1],临床特征为呼吸困难、持续咳嗽、咳出血样渗出物或黄色干酪状假膜等,影响鸡的正常生长和生产性能,如造成蛋鸡产蛋量显著降低。鸡传染性喉气管炎属于急性高度接触性传染病,病鸡、康复后的带毒鸡和无症状的带毒鸡是主要传染来源,主要通过直接接触传播给其他健康鸡,感染率可达90%~100%.

鸡传染性喉气管炎的诊治要点

鸡传染性喉气管炎是鸡只养殖过程中比较常见的一种传染性呼吸道疾病,鸡属于易感动物,在感染后会出现高度呼吸困难,气喘,咳嗽,并咳出带血分沁物等临床症状,若不及时治疗容易引起病鸡死亡。该疾病的流行较为广泛,发生后传播速度比加快,对养鸡场的影响非常严重。鸡只在感染后会出现急性或者慢性症状,通常会根据病鸡的临床表现情况进行初步诊断,再运用实验室诊断的方式进行疾病类型的进一步确诊,从而为后续疾病的治疗提供可靠依据。本文主要对鸡传染性喉气管炎的流行特征、临床症状以及诊治要点进行了分析,并提出了多种防控手段,望能够为养鸡场对该疾病的防控与治疗提供参考。

鸡传染性喉气管炎的中医疗法

鸡喉气管炎是由喉气管炎病毒引起的-种记性呼吸道传染病。临床上以发病急、传染快、呼吸困难、咳出血样渗出物为特征。本病尚无特效药物治疗。如采用中医治疗可取得较好疗效。

中西医结合防治鸡传染性喉气管炎

传染性喉气管炎是规模化鸡场常见的急性呼吸道传染病,临床上患病鸡主要表现为咳嗽、咳痰、喉喘鸣、声音嘶哑、呼吸困难等,会对鸡的生长发育产生极大的影响,若未及时治疗极易死亡,进而造成巨大的经济损失,阻碍养鸡场乃至养鸡业的健康稳定发展。中西兽医在鸡传染性喉气管炎防治中有着突出的作用,基于此,着重对鸡传染性喉气管炎的中西医结合防治方法展开深入讨论。

鸡传染性喉气管炎诊断及中西药防治措施

鸡传染性喉气管炎在鸡群中发病率较高,疾病发生的主要原因与病毒有关,鸡发病后主要临床表现为呼吸困难、咳嗽等,受侵害气管出现水肿、糜烂或者出血症状,严重情况下可能导致鸡死亡,给养殖户带来较大的经济损失。现阶段利用实验室诊断和临床症状诊断等方式对鸡传染性喉气管炎进行诊断,通过养殖管理、免疫接种等方式实现对疾病的防治,降低鸡传染性喉气管炎发病率和死亡率,提高养殖户的经济效益。

鸡传染性喉气管炎的发病特点及诊治措施

鸡传染性喉气管炎在全球范围内广泛分布,死亡率10%以上,给养殖业造成了严重的经济损失,需要在生产中对该病予以关注和重视。预防和控制鸡传染性喉气管炎的主要方法是疫苗接种、加强饲养管理、定期消毒等,只有减少该病的发生才能避免遭受损失。一、病原简介鸡传染性喉气管炎(Infectious laryngotracheitis,ILT)的病原是鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV),其属于疱疹病毒科(Herpesviridae),亚科为疱疹病毒亚科(Alphaherpesvirinae),属于伪病毒亚科(Mardivirus)。

鸡传染性喉气管炎诊断和防控措施

鸡传染性喉气管炎是鸡养殖业过程中的容易出现的接触性传染性疾病,传播速度快和传播范围广,对鸡只健康产生较大危害,严重影响着养殖户的经济效益。因此,相关的工作部门应该加强对该病的防控,引导养殖户提高防控意识。笔者通过对该病发病原因、病理变化、临床特征及诊断与预防措施进行了综述,以期为鸡养殖过程中该病的防治提供参考。

鸡传染性喉气管炎的中兽医治疗措施

1发病原因鸡传染性喉气管炎是由传染性喉气管病毒引发的高传染性急性呼吸道传染病,病死率极高,四季均可发病,但多发于秋冬。养殖中,如果管理不当,养殖场通风条件差,养殖密度较高,发病的概率会明显增加。另外,养殖中鸡群维生素补充不足或出现寄生虫感染时,鸡群也会发病。鸡传染性喉气管炎传播速度快,传播率超过90%,死亡率较高。养殖中一旦出现,极易造成鸡蛋产量与质量同步下降,影响养殖业长远发展。此类疾病会蔓延于大规模养殖场,所有年龄段的鸡均为传染对象,又以成年鸡病症最明显,以病鸡携带病菌为传染源,上呼吸道传播为主要方式。打过疫苗的鸡若长期与病鸡处于同一空间,感染概率也极大。一旦病鸡有所感染,病鸡进食过的饲料或饮水就是最主要的传染媒介。

鸡传染性喉气管炎(ILT)的流行现状及饮水免疫方案

为研究鸡传染性喉气管炎的最佳免疫方法,对国内多个鸡场鸡传染性喉气管炎的流行现状和不同免疫方法进行了研究,通过实地调查,将点眼、涂肛和饮水等免疫方法进行对比,同时对饮水免疫方案进行了详细阐述。结果发现:2018年以来鸡传染性喉气管炎发病率较往年有所提高,且不同日龄和不同品种鸡均可感染;饮水免疫虽然离散度较大,但其攻毒保护率也可以达到100%,克服了传统免疫方法引发的副反应。结果表明,饮水免疫是目前规模化养殖场的最佳免疫途径,操作简单,省时省力,免疫和防控效果较好。

鸡传染性喉气管炎的发生与控制

鸡传染性喉气管炎是一种在养殖场中常发的病毒性传染病,本病可以导致鸡群出现咳嗽和气喘等呼吸道症状,不仅能引起鸡群的生长性能和生产性能下降,还会导致病鸡死亡,给养殖场造成严重的经济损失。为了有效地防控该疫病,需要在日常养殖过程中加强饲养管理,在35日龄和70日龄时接种鸡传染性喉气管炎疫苗,并注重环境消毒,减少或完全避免本病的发生,促进养鸡业的良好发展。

秋冬季鸡传染性喉气管炎防控要点

在我国北方因秋冬季气温波动频繁,昼夜温差较大,气候对养殖业的影响较大,容易导致动物的发病率增加。对于蛋肉鸡养殖而言,完善的饲养管理措施至关重要,特别是鸡舍内温度的控制和通风效果,一旦饲养管理不到位,将会导致鸡呼吸道疾病的发病率直线增长,其中鸡传染性喉气管炎在秋冬季更为多发。如何做好秋冬季鸡传染性喉气管炎的防制工作,将其对养殖业的不利影响降到最低成为养殖人员关注的重点问题之一。对于鸡传染性喉气管炎的防制首先要掌握该病原的特点及其流行病学,从而达到事半功倍的防控效果。

鸡传染性喉气管炎疫苗研究进展

鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis,ILT)是由喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus,ILTV)引起的鸡的一种病毒性呼吸道传染病。ILT是一种较为严重的禽病毒病;根据ILT的临床表现分为急性型和温和型,急性型发病率和死亡率均较高,温和型死亡率低但在养殖密集地区感染逐渐增多。ILT可引起家禽死亡和蛋鸡产蛋率下降,给养禽业带来严重的经济损失。目前,通过使用疫苗接种和生物安全相结合的综合防控措施,在集约化养禽地区ILT已得到较好的控制。该文对多个国家已商品化的ILT减毒活疫苗和重组病毒载体活疫苗,以及正在研发中的ILT重组病毒载体活疫苗、基因缺失活疫苗、病毒样颗粒疫苗等新型ILT疫苗进行综述,以期为更好地防控ILT提供理论参考。

一株鸡传染性喉气管炎病毒流行毒株的鉴定与致病性分析

为评价一株鸡传染性喉气管炎病毒流行毒株在疫苗效力评价中的应用表现,对制备的一株强毒株进行了系统鉴定,包括性状、纯净性、真空度、病毒含量、特异性等,尤其重点关注不同病毒含量对不同日龄鸡只的致病力情况。结果显示,本研究制备的鸡传染性喉气管炎病毒冻干物性状良好,无细菌、支原体和外源病毒污染,可被特异性血清完全中和,病毒含量稳定在105.1EID50/0.2mL。该毒株致病力表现稳定,100 EID50可使80%鸡只发病或死亡,可作为一株良好的检验用强毒,为后续疫苗评价奠定基础。

一例蛋鸡传染性喉气管炎病毒与大肠杆菌混合感染的诊断报告

鸡传染性喉气管炎(AILT)是当前养鸡场重点防范的主要呼吸道传染病之一^([1]),近年来在我国呈现出“老病新发”的流行趋势,临床中以“温和型”和“非典型”症状为主,增加了防控的难度,也给我国养禽业造成了巨大的经济损失。鸡大肠杆菌病是危害我国养鸡业的常见多发病,在潮湿、寒冷的冬、春季易发生,通风不良、营养不足、环境应激等不良因素易诱发^([2])。

鸡传染性支气管炎的中医治疗措施

鸡传染性支气管炎是由IBV病毒导致的高度传染性疾病,对鸡类饲养业造成严重经济冲击,随着疾病的快速扩散,对其早期诊断和治疗的需求逐渐增加。本文探讨了鸡传染性支气管炎的病理特性、临床病症和病理变化,并对其进行了细致的分类,深入探索了中医治疗方法在此疾病上的适用性和效果。通过对饲养管理和疫苗应用的研究,为该疾病的预防提供了有效策略。

鸡传染性喉气管炎病毒gG蛋白间接竞争ELISA方法的建立及初步应用

鸡传染性喉气管炎是由鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。为建立检测该病毒g G蛋白的间接竞争ELISA方法,本研究以原核系统表达ILTV g G蛋白,并采用切胶纯化该重组g G蛋白(rg G)后经western blot检测纯化的rg G (P-rg G)与本研究室制备的g G蛋白单克隆抗体(MAb) 3C8的反应原性。将MAb 3C8采用Protein G亲和层析柱纯化后与HRP偶联(HRP-3C8),利用间接ELISA法测定纯化HRP-3C8的效价。结果显示,P-rg G与MAb 3C8发生了特异性反应,在30 ku处出现特异性条带。纯化的HRP-3C8效价达1∶51 200。以P-rg G作为包被抗原,以纯化的HRP-3C8作为检测抗体,通过对各反应条件优化后初步建立了ILTV g G蛋白间接竞争ELISA (ic-ELISA)检测方法。条件优化结果显示,P-rg G包被量为12.5 ng/孔,HRP-3C8抗体稀释度为1∶10 000,将待检样品与HRP-3C8抗体在37℃孵育40 min后加入ELISA板再反应20 min,TMB底物反应10 min。将待检样品的抑制率(PI)≥31.08%判为阳性;采用该方法分别检测ILTV、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡痘病毒(FPV),通过计算PI,评估该方法的特异性;按照Reed-Muench法测定ILTV K317株的鸡胚半数感染量(EID_(50)),再将该病毒2倍倍比稀释(1∶10~1∶2 560)后,以该ic-ELISA方法检测,评估该方法的敏感性;利用同批次和不同批次P-rg G分别包被ELISA板,采用该ic-ELISA方法检测ILTV阳性及阴性样品,评估该方法的重复性。结果显示,该方法除了能检测ILTV外,其余相关病毒均为阴性结果;将ILTV稀释至1∶320时检测结果仍为阳性,相当于75 EID_(50)/0.1 m L;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%。利用该方法及荧光定量PCR (q PCR)分别检测50份临床ILTV、IBV和FPV感染鸡的口咽拭子和喉头组织、10份ILTV活疫苗,该方法检测结果显示,阳性检测率为73.3%(44/60),阴性率为26.7%(16/60)。q PCR的检测结果显示,阳性检测率为81.7%(49/60),阴性率为18.3%(11/60),二者的阴、阳性符合率分别为90.9%和87.8%,总符合率为88.3%。本研究建立的ILTV g G蛋白ic-ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以用于检测实验室和临床ILTV感染的不同样品,为ILTV及其疫苗的检测提供了新的技术手段。

鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗生产工艺的改进

在鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗生产中,通过改用尿囊腔接种种毒,减少鸡胚绒毛尿囊膜(CAM) 的含量,加入适量尿囊液,制备了鸡传染性喉气管炎混合型弱毒疫苗。这一改进简化了生产工艺,可使生产成本大幅度下降;用此法生产3 批共1350 万羽份疫苗,经在山东、河南、辽宁、黑龙江等省应用,其免疫效果与单纯性CAM 弱毒疫苗一样。