FISH联用激光捕获显微分离技术对混合斑进行分离检验

目的建立荧光原位杂交(FISH)联用激光捕获显微分离技术(LCM)精确分离男女混合斑中精子的检验方法。方法收集健康志愿者精子和女性阴道上皮细胞制备模拟混合斑,经过预处理后用Vysis CEPX SpectrumOrangeTMY SpectrumGreenTM试剂盒进行荧光原位杂交,并用PALM激光捕获显微分离系统分离男、女性细胞,使用Identifiler试剂盒结合低体积扩增技术分别对男女成分进行STR扩增。结果荧光原位杂交后,可清晰分辨混合斑中的男女细胞。捕获20个精子细胞可以得到完整的STR分型,检出率为80%。随着精子数目增多,检出率提高而等位基因丢失率降低。30个精子检出率最高,为95%。结论激光捕获显微分离联用FISH技术可用于混合斑中男女细胞DNA的分离检验。

一种基于全自动多重裂解滤膜法的研究应用

多重裂解滤膜法结合了差异裂解法及滤膜法的优点,经两次短时裂解后可快速去除女性成分细胞并将精子细胞截留在滤膜上,再经深度裂解即可将精子细胞DNA释放,裂解产物则使用磁珠法进行提取纯化。该方法在法医专用核酸提取工作站上实现了全自动化工艺,可在180min内完成24个混合斑样本的分离提纯。使用全自动多重裂解滤膜法对223例性侵案件样本进行了提取测试,统计98例PSA阳性样本中的83例得到有效的单一男性分型,检出率可达84.7%,优于传统差异裂解法。