发现先导化合物方法:混合物筛选

新农药创制最主要的研究内容是先导化合物的发现,为了快速地发现先导化合物,目前常用的方法是组合化学方法和高通量筛选.就我国目前的研究水平和条件而言,如下的方法--混合物筛选--较为适宜,值得重视,供参考.

兼性离子修饰亲水磁珠固定化谷胱甘肽-S-转硫酶P1及其表征

谷胱甘肽-S-转硫酶P1(Human glutathione-S-transferaseπ1,h GSTP1)为肿瘤耐药增敏药靶。为探索磁珠固定化h GSTP1的合适方案用于磁分离指数富集从混合物中筛选高亲和力配体,重组表达6×His-h GSTP1,分别用Ni^2+-NTA琼脂糖和GSH-Sepharose 4B层析柱纯化,采用亲水兼性离子修饰的羧基磁珠和Ni^2+-NTA磁珠固定化6×His-h GSTP1,表征其固定化容量、保留活性、稳定性以及对抑制剂响应性。羧基磁珠不能有效固定GSH-Sepharose 4B层析柱纯化h GSTP1,可有效固定Ni^2+-NTA层析柱纯化h GSTP1,但最大保留酶活仅约30%。Ni^2+-NTA磁珠可有效固定两种方法纯化蛋白,其饱和固载容量约为羧基磁珠的1.7倍且最大保留酶活均可达80%。Ni^2+-NTA磁珠固定化h GSTP1在pH 6.5 PBS中0℃振摇8 h活性未见明显改变,相同条件游离酶活性下降约20%;在筛选后甲醇80℃处理20 min不脱落。Ni^2+-NTA磁珠固定化h GSTP1和游离酶对抑制剂依他尼酸(Ethacrynic acid,EA)的IC50无显著性差异(P>0.05)。因此,Ni^2+-NTA磁珠固定化h GSTP1可适用于指数富集筛选混合物库中抑制剂。