特定氨基酸缺省底物对体外培养混合瘤胃微生物及其发酵的影响

【目的】研究特定氨基酸在人工瘤胃体外培养条件下如何影响瘤胃微生物群系特征及其发酵。【方法】研究中以3只瘘管山羊作为瘤胃液供体,采用底物去除技术,底物设计分别为:全量必需氨基酸组(TEAA),组氨酸、赖氨酸、蛋氨酸和支链氨基酸(BCAA)的缺省组。【结果】底物对培养液pH均值没有显著性影响,但各组pH值随时间的变化模式有所不同;培养液氨氮浓度较高,在10.99～30.51mg/100ml范围变动,各组氨氮浓度随时间的变化模式也有明显的不同;特定氨基酸缺省对微生物蛋白产量限制程度不同,以BCAA缺省对微生物蛋白产量的限制最大,相对于全量组混合微生物蛋白下降了44.52%。研究还发现底物对微生物区系也有一定的影响,原虫与细菌比值以赖氨酸缺省组最低(89.12%),BCAA缺省组最高(127.60%)(P<0.01)。另外,微生物的PCR-SSCP图谱显示微生物区系内的种属也因底物变化而发生了改变。【结论】底物氨基酸对瘤胃混合微生物群系及其发酵有一定的影响作用,支链氨基酸是瘤胃混合微生物生长所必需的氨基酸。

氨基酸对体外培养瘤胃微生物生长及发酵的影响

旨在研究体外培养条件下氨基酸对瘤胃微生物群系特征以及发酵的影响。以4头安装永久性瘤胃瘘管的徐淮山羊羯羊为瘤胃液供体,采用人工模拟山羊瘤胃发酵装置。通过特定氨基酸缺省底物的方法,设定5个处理组:全量氨基酸(AA)组(A组)、蛋氨酸缺省组(B组)、赖氨酸缺省组(C组)、支链氨基酸缺省组(D组)以及芳香族氨基酸缺省组(E组)。研究结果表明:培养液pH均在6.01～6.45之间变化,均值以C组(-Lys)最高为6.23;氨氮浓度变化范围为7.98～29.05mg·100mL-1,均值以A组(全量AA)最高为18.16mg·100mL-1;4组特定AA的缺省对瘤胃微生物(细菌和原虫)的限制性作用(相对于全量AA组)排序为(由大到小):支链氨基酸(BCAA)>芳香族AA(ARAA)>蛋氨酸>赖氨酸;P/B比值以B组最高为101.37%,D组最低为88.22%,微生物AA-N、细菌AA-N和原虫AA-N分别以E组、D组和E组最高,均以C组最低;微生物的遗传指纹图谱表明细菌和原虫内部菌群结构因特定AA缺省底物而发生了相应的变化。在体外培养条件下,氨基酸对瘤胃微生物群系的生长以及发酵具有一定的影响。

瘤胃混合微生物对稻糠、玉米麸、麦麸饲料中植酸磷降解特性的比较研究

采用短期人工瘤胃发酵技术,研究瘤胃混合微生物对糠麸类饲料中植酸磷的降解作用。试验采集3头健康泌乳期荷斯坦奶牛瘤胃液,以不同来源稻糠、玉米麸、麦麸饲料为底物,测定厌氧发酵3、12、24、48和72 h饲料植酸磷的消失率。结果表明:1)糠麸类饲料植酸磷消失率均随发酵时间的延长而增加,并且在发酵至24 h时,植酸磷消失率趋于90%以上。2)不同来源的同种糠麸类饲料间植酸磷的潜在降解率和降解速率明显不同。3)3种糠麸类饲料比较发现,麦麸饲料的植酸磷潜在降解率可达到100%(P<0.000 1),而玉米麸(95.58%)与稻糠(96.82%)饲料间差异不显著(P>0.05),植酸磷降解速率呈现为稻糠>玉米麸>麦麸(P<0.000 1)。由此可见,瘤胃混合微生物能很好地降解富含植酸磷的糠麸类饲料,且降解作用在不同饲料间存在一定的差异。

奶牛瘤胃胃液微生物总DNA的提取和纯化

本研究建立了从奶牛瘤胃液中提取混合微生物总DNA的方法,对现有的方法进行改进使其适合于瘤胃混合微生物总DNA的提取。粗提后的瘤胃DNA可以直接扩增出16SrDNA。提取效率为每毫升瘤胃液的DNA提取量为0.1～0.3μg。通过SiO2回收进行纯化,纯化回收率达到34%～50%;用cleanup试剂盒纯化,纯化率可达到85%以上。经过纯化后的DNA可进行其它的分子生物学操作。