混合系白血病基因重排的检测方法及其临床意义

为了研究混合系白血病(MLL)基因重排在急性白血病(AL)中的发生率、融合基因类型及其临床意义,用荧光原位杂交技术检测60例急性白血病(AL)患者MLL基因重排,对于MLL基因重排阳性的患者,用巢式RT-PCR方法检测MLL基因重排形成的6种常见融合基因类型。结果表明:7例AL患者有MLL基因重排,发生率为11.67%,其中2例为急性髓细胞白血病M5(AML-M5),融合基因均为MLL/AF9;另5例为B细胞系急性淋巴细胞白血病(B-ALL),其中2例融合基因为MLL/ENL,1例MLL/AF4,2例未扩增出融合基因产物。结论:荧光原位杂交技术是检测ALMLL基因易位重排的快速、特异、灵敏的方法,巢式RT-PCR是检测MLL基因重排产生的融合基因类型的简便可行的方法;MLL基因重排的检测对急性白血病预后判断和治疗方案的选择具有重要意义。

具有特征性免疫表型的KMT2A基因重排婴儿急性淋巴细胞白血病的临床研究

目的 探讨具有特征性免疫表型的赖氨酸甲基转移酶2A(KMT2A)基因重排婴儿急性淋巴细胞白血病的诊断、分子机制及潜在治疗策略。方法 分析1例KMT2A基因重排婴儿急性早B前体淋巴细胞白血病患儿的临床资料及细胞形态学、流式细胞学、细胞遗传学及分子生物学等检查结果。采用“MLL-Rearranged”“KMT2A-Rearranged”“acute lymphoblastic leukemia”“infant”为关键词,对PubMed数据库2020-2023年发表的文献进行文献检索。结果 共检索到文献145篇,最终保留文献27篇。结合病例分析和文献复习,该研究主要从KMT2A基因重排婴儿早B前体淋巴细胞白血病的临床表现、免疫表型、生物学特征角度出发,重点叙述KMT2A基因重排婴儿白血病的发病分子机制以及治疗等研究现状。结论 KMT2A基因重排婴儿白血病的治疗仍具有挑战性,需要不断深入了解潜在的生物学特征,并确定风险分层的预后因素以及更有效的治疗策略。分子靶向治疗和免疫治疗可能是改善结局和降低治疗相关病死率的关键。

MLL基因重排成人急性B淋巴细胞白血病和急性髓系白血病临床特征及预后危险因素分析

目的分析混合谱系白血病基因重排(MLL-r)成人急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)和急性髓系白血病(AML)的临床特征、治疗疗效及预后危险因素。方法选取2017年1月至2021年11月中国科学技术大学附属第一医院(安徽省立医院)血液内科收治的17例MLL-r B-ALL和25例MLL-r AML为研究对象,回顾性分析患者临床特征、治疗疗效及总体生存率,使用COX回归分析影响患者预后危险因素。结果MLL-r成人急性白血病诊断时常表现为外周血白细胞异常升高、贫血和血小板减少,诊断时中位白细胞计数为46.83(8.13,99.93)×109/L。MLL-r B-ALL最常见的重排为MLL-AF4重排;MLL-r AML最常见重排为MLL-AF9和MLLAF6重排。单纯化疗复发率高,异基因造血干细胞移植可以显著改善患者预后(P<0.05)。此外,多因素回归分析影响患者总生存期(OS)的因素,诊断时白细胞计数≥100×109/L(HR=8.030,95%CI:1.327~48.594,P=0.023)及异基因造血干细胞移植(HR=0.079,95%CI:0.015~0.423,P=0.003)为影响MLL-r AML患者OS的因素;异基因造血干细胞移植(HR=0.054,95%CI:0.006~0.481,P=0.009)为影响MLL-r B-ALL患者OS的因素。结论MLL-r急性白血病诊断时常表现为白细胞异常升高,单纯化疗复发率高,总体预后不佳,异基因造血干细胞移植可改善患者预后。

混合谱系白血病基因重排与急性白血病

涉及染色体11q23的异常是造血系统肿瘤的常见改变,该异常导致位于11q23处的混合谱系白血病(MLL)基因发生重排,与多种伙伴基因发生融合。MLL基因编码蛋白主要包括3个功能区域:转录抑制区、转录激活区和DNA结合区,它起着转录因子功能,在人体发育及细胞分化过程中,起着重要调控作用。MLL基因重排包括易位、部分串联重复、缺失、片段扩增等,MLL易位可产生许多不同类型的融合基因,最终诱导白血病发生。MLL重排的白血病有特异生物学特性,已成为白血病中的一个特殊亚型。

30例混合谱系白血病重排基因阳性儿童细胞遗传学分析

目的评价染色体核型分析在混合谱系白血病(mixed lineage leukemia,MLL)重排基因阳性儿童中的诊断价值。方法对30例经荧光原位杂交检测(FISH)提示MLL重排基因阳性儿童骨髓标本进一步行G显带核型分析。结果在30例MLL重排基因阳性儿童中,共检出染色体异常12例(40.00%),嵌合体多见,其中9例涉及11q23区域异常,包括易位、缺失、附加片段等,以易位居多,另有3例涉及其余染色体结构或数目异常。14例(46.67%)核型正常,其中2例为复诊儿童。4例(13.33%)标本因细胞生长不良,制片质量差,无法分析。另外,染色体核型分析对MLL基因阳性儿童11q23区域异常的检出率与FISH对MLL基因阳性儿童11q23基因异常检出率进行比较,差异有统计学意义(χ2=32.308,P<0.001)。结论染色体核型分析提示MLL重排基因阳性儿童相关染色体畸变的灵敏性远低于FISH,但能够明确染色体畸变性质及重排类型,对混合谱系白血病诊断、分型、预后及后续检测具有重要意义。

髓系白血病患者T细胞受体基因重排的检测及其意义

目的了解髓系白血病患者Ｔ细胞受体基因重排及临床意义。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）４１例和慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）８例患者Ｔ细胞受体γ链（ＴＣＲγ）基因重排。结果ＡＮＬＬ８例（１９．５％）和ＣＭＬ５例（６２．５％）患者存在ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ基因重排，ＣＭＬ病人ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ基因重排阳性率显著高于ＡＮＬＬ病人（Ｐ＜０．０２５）；ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ基因重排阳性ＡＮＬＬ病人治疗后完全缓解率低于基因重排阴性ＡＮＬＬ病人（Ｐ＜０．０１）；ＡＮＬＬ３例完全缓解期病人ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ基因重排持续检测阳性，均于缓解后６个月内出现临床复发。结论ＴＣＲ基因重排也可发生于部分髓系白血病病人，检测髓系白血病病人ＴＣＲ基因重排对预后判断和微小残留病检测具有一定意义。

混合系白血病全长基因在AML-M4/M5患者中的突变检测

急性髓系白血病(AML)-M4、M5常有11号染色体异常,定位于11q23的混合系白血病(MLL)基因异常所形成的MLL-PTD和MLL融合基因在该病的发病机理中具有重要作用。但在该类白血病绝大多数未能检测出染色体水平异常,是否存在MLL基因的其他突变?本研究对MLL全长基因的外显子进行了测序分析。选取25例初发核型正常的AML M4、M5患者(排除MLL融合基因和MLL-PTD及M4eo),进行了MLL全长基因的外显子PCR扩增直接测序分析,对发现的突变在基因组DNA水平进行验证。利用Mass Array方法在正常对照样本和AML扩大样本中对发现的点突变进行检测。结果发现,在MLL的RD、PHD、TAD和SET功能域中存在着高频的缺失、插入及多个点突变;同时对照研究正常样本,发现也存在上述的变异,且突变频率无统计学差别(P>0.05)。结论:检测到的MLL基因发生在mRNA水平的缺失、插入和多个点突变,分别是MLL在转录水平的选择性剪接和MLL的单核苷酸多态性,它们共同构成了MLL的遗传多态性;这些MLL基因遗传多态性可能与AML M4、M5的发病不直接相关,对于治疗、预后及其他生物学表型的意义还有待进一步探讨。

MLL基因重排阳性儿童急性髓系白血病患者的临床特征及预后分析

目的分析MLL基因重排阳性儿童AML患者的临床特征及预后情况。方法回顾性分析2016年1月—2020年4月华南地区9家医院初治的MLL基因重排阳性儿童AML(非M3型)患者临床、实验室资料、生存情况,并分析其预后及预后相关因素。结果523例儿童AML(非M3型)患者中检出75例(14.3%)MLL基因重排阳性患者。按FAB分型,49例属于M5型,MLL伙伴基因中MLL/AF 9发生率最高。70例患者可进行疗效分析,死亡15例,其中死于治疗相关并发症4例,死于复发11例,5年OS、EFS分别为71.2%、67.3%。单因素分析显示EVI1基因高表达、MLL/AF6、初治时白细胞≥50×10^(9)/L是影响OS的预后不良因素(P值分别为0.029、0.043和0.048),EVI1基因高表达、MLL/AF6是影响EFS的预后不良因素(P值分别为0.035和0.043),1个疗程获得CR是影响OS、EFS预后良好因素(P值分别为0.037和0.036)。多因素分析显示EVI1基因阳性是影响OS、EFS的独立预后不良因素,一个疗程获得CR是影响OS、EFS的独立预后良好因素。高危组中行造血干细胞移植患者5年OS、EFS均高于高危组未行移植患者(76.2%vs.38.1%,66.7%vs.28.6%),差异均有统计学意义(P值分别为0.045和0.039)。结论MLL基因重排阳性儿童AML患者与单核细胞系白血病密切相关,伴随伙伴基因中以MLL/AF9最常见。在MLL基因重排阳性儿童AML患者中,一个疗程后获得CR是影响OS、EFS的独立预后良好因素,而EVI1基因高表达是影响OS、EFS的独立预后不良因素。造血干细胞移植能提高高危组患者的OS和EFS。

伴NUP98基因重排的成人急性髓系白血病的临床特点及预后分析

目的:探讨伴NUP98基因重排的成人急性髓系白血病(AML)患者的临床特点、治疗效果及预后因素。方法:回顾性分析2015年1月至2019年12月解放军总医院第一医学中心血液科收治的伴有NUP98基因重排的成人AML患者的临床表现、实验室检查、遗传学异常、治疗方案及生存情况等临床资料。结果:410例成人AML患者中,共检测出15例伴有NUP98基因重排的患者,检出率为3.7%。15例患者的男女比例为1.1∶1,中位年龄43(17-76)岁,FAB分型主要为M2型和M4/M5型,遗传学预后分层11例为中危组,4例为高危组。NUP98基因重排类型主要为NUP98-HOXA9(13/15),10例患者行二代测序(NGS)检测,其中5例伴有多种表观遗传学基因突变,3例伴有FLT3-ITD或WT1突变,2例突变阴性;15例患者诱导治疗后13例获得完全缓解(CR),其中8例行标准诱导治疗后7例获得CR;7例老年或不能耐受标准化疗患者行DCAG方案诱导治疗全部获得CR。中位随访时间28个月,15例患者中位OS为31.5个月(95%CI 10.7%-52.2%),非异基因造血干细胞移植组(6例)中位OS为18.5个月(95%CI 17.8%-19.1%),异基因造血干细胞移植组(9例)中位OS未达到。结论:异基因造血干细胞移植可明显改善伴有NUP98重排AML患者的预后,NUP98基因重排可同时伴有多种表观遗传学基因突变,对于老年或不耐受标准诱导治疗的患者应用含去甲基化药物的治疗可获得较好疗效。

MLL基因重排在成人急性白血病中的检测和临床特征研究

混合系白血病(MLL)发生基因重排在成人急性白血病中相关研究较少。本研究通过3种技术组合检测MLL基因重排,探究其在成人急性白血病中的发生率、伙伴基因类型、伴MLL基因重排的急性白血病临床特征和预后并评估该组合检测的临床应用价值。对183例成人急性白血病患者采用常规细胞遗传学、分离信号FISH和多重巢式PCR 3种技术组合检测MLL基因重排。结果显示,成人急性白血病中MLL基因重排发生率低(8.2%);重排类型在急性淋巴细胞白血病(ALL)中MLL-AF4最常见,急性髓系白血病(AML)中MLL-AF6和MLL-AF9最常见;MLL基因重排患者髓外浸润占40%,诱导治疗30 d内完全缓解率33.3%,3个月复发率和6个月生存率各为50.0%和50.0%。结论:本研究中常规细胞遗传学技术对MLL基因重排的漏检率高达60%,因此常规细胞遗传学,分离信号FISH和多重巢式PCR结合检测MLL基因重排具有重要的预后意义和指导临床治疗价值。

MLL基因重排阳性的儿童急性淋巴细胞白血病的融合基因及免疫表型特点

为了探讨混合谱系白血病(mixed linage leukemia,MLL)基因重排阳性的儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)融合基因与免疫表型的特征,利用多重巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法检测601例ALL患儿中MLL基因重排的发生率,通过对PCR产物的测序,分析融合基因的亚型及特点;比较分析重排阳性的22例患儿与同期未检出任何融合基因的随机抽取的30例ALL患儿及43例pro-B-ALL患儿初诊时免疫表型特点。结果表明:MLL基因重排阳性的ALL患儿检出率为3.66%,占pro-B-ALL的29.9%。20例MLL基因重排阳性的B-ALL患者全部为CD10-,表达CD13、CD33和CD34的例数较pro-B-ALL对照组低,CD20、CD22、CD2、CD5、CD7的表达则无差异。共检出4种MLL基因的伙伴基因AF4、AF9、AF10和ENL。MLL基因融合位点主要位于第6、7、8外显子,同一患者可同时存在多种MLL基因融合位点;而其伙伴基因的融合位点相对单一。1例患儿MLL-AF10融合转录本存在随机插入序列。结论:MLL基因重排的发生率低,重排形式多样,阳性ALL患儿在免疫表型及融合转录本的表达方面具有独特的生物学特征。

混合系白血病基因相关白血病骨髓细胞形态学特征

目的观察混合系白血病(MLL)基因相关白血病患者的骨髓细胞形态学特征,来明确混合系白血病基因的重排特征和FAB形态学分型之间的关系。方法用多重巢式的RT-PCR方法对300例白血病以及淋巴瘤的白血病关联融合基因进行检查,从中选择出现MLL基因异常白血病患者的骨髓细胞涂片后进行形态学观察,并对不同的形态进行比较。结果 300例患者中14例MLL基因重排,其中有9例FABM5型MLL/AF6融合基因,跟典型原始单核细胞白血病存在较多相同特征:细胞体积很大,细胞核折叠且染色体很疏松,核仁清晰,胞质毛玻璃状嗜碱性。大部分细胞核的旁边有明显的淡染区,胞浆中有细长奥氏小体和纤细染色体。经非特异脂酶染色之后呈阳性,可以被氟化钠抑制。12例MLLPTD,其中包括3例M1型,5例M4型,2例M5型,2例幼淋细胞白血病MLLPTD阳性。结论 MLL基因异常主要在和单核细胞关联的白血病中,发生MLL/AF6重排是急性原始单核细胞型白血病一种独立亚型的重要标志,融合基因和单核细胞的分化关系密切。

成人KMT2A/MLLT6阳性急性髓系白血病1例报道并文献复习

特异性染色体重排是急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的特点,这种重排导致2个不相邻的基因被重新拼接到一起,形成的融合基因可能是原癌基因,可激活下游信号通路,导致细胞大量增殖,形成白血病细胞。随着分子生物学技术的进步,越来越多的与白血病分型、预后、化疗敏感性等相关的染色体易位和融合基因被发现。KMT2A基因编码的转录辅激活因子负责在早期发育和造血过程中调节基因表达。约有5%的成人AML病例会发生染色体位点11q23处的染色体易位,涉及组蛋白H3赖氨酸4甲基转移酶2A(histon H3 lysine methyl transferase 2A,KMT2A)基因,也被称为混合谱系白血病(mixed lineage leukemia,MLL)基因,是AML分型的依据。

青蒿酯联合阿糖胞苷±柔红霉素对MLL基因重排白血病细胞株MV4-11凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨青蒿酯(ARTS)联合柔红霉素(DNR)±阿糖胞苷(Ara-C)对MLL基因重排(MLL-r)急性髓系白血病(AML)细胞株MV4-11细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法:采用CCK-8法检测ARTS、DNR、Ara-C单药及联用对MV4-11细胞增殖率及计算单药的IC50;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况及凋亡受体DR4、DR5的表达;Western blot检测各组细胞中Caspase-3、Caspase-9的表达。结果:ARTS、Ara-C、DNR均呈浓度依赖性抑制MV4-1l细胞增殖(r=0.99,r=0.90,r=0.97),48 h的IC50分别为0.31μg/ml、1.43μmol/L、22.47 nmol/L。ARTS 0.3μg/ml、Ara-C 1.0μmol/L、DNR 15 nmol/L作用于MV4-11细胞48 h的增殖率比较:3药联合组<2药联合组<单药组(均P<0.05);2药联合组细胞增殖率比较:ARTS+Ara-C组<ARTS+DNR组<Ara-C+DNR组,3药及2药相互作用的协同指数(CI)均<l。2药及3药联合处理细胞后,ARTS+DNR+Ara-C组细胞凋亡率高于Ara-C+DNR组、ARTS+DNR组(P<0.05),ARTS+DNR+Ara-C组细胞凋亡率与ARTS+Ara-C组相当(P>0.05),各组细胞中DR4和DR5的表达无差异(P>0.05)。与DNR+Ara-C组相比,ARTS+DNR+Ara-C组、ARTS+Ara-C组24 h Caspase-3表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05),其中3药联合组细胞中Caspase-3表达下调最显著,但各组细胞中Caspase-9表达无明显改变。结论:体外研究显示ARTS+DNR+Ara-C、ARTS+Ara-C方案协同抑制MV4-11细胞增殖和诱导MV4-11细胞凋亡作用均强于传统方案Ara-C+DNR,其作用机制可能是通过下调Caspase-3表达发挥作用,对Caspase-9、DR4、DR5的表达无影响。

MLL-AF6融合基因阳性急性髓系白血病的临床特征及预后

目的:探讨MLL-AF6融合基因阳性的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者的临床特征和预后。方法:回顾分析11例初治MLL-AF6阳性AML患者的临床和实验室资料,复习文献,总结该类疾病的临床特征及预后。结果:11例患者中男6例,女5例,中位年龄36岁,急性白血病的分型诊断标准FAB分型(French-American-British classification systems)M56例,M45例。起病症状为牙龈肿痛6例,发热5例,初诊时中位白细胞计数55.5×10^(9)/L,免疫分型可见髓系细胞、单核细胞系统及干细胞系列抗原表达。MLL-AF6融合基因水平(实时定量PCR法)为14.2%~214.5%,6/11例(54.5%)合并EVI1基因高表达。4例患者二代测序检测出合并KRAS、TET2、ASXL1、TP53、DNMT3A及FLT3-ITD基因突变。染色体G显带检查,2例为t(6;11)(q27,q23)伴复杂核型异常,4/9例(44.4%)伴有+8异常,2例为正常核型。给予患者常规诱导化疗,达到完全缓解者8/11例(72.7%),3例患者原发耐药。8例完全缓解的患者中,2例达到微小残留病(minimal residual disease,MRD)阴性,中位完全缓解的持续时间为4.5个月。2例MRD阳性及3例难治复发患者接受了异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT),后均死于白血病进展。随访至2019年12月1日,2例存活,9例死亡,中位生存时间9个月。结论:MLL-AF6融合基因阳性AML多为年轻患者,FAB分型以M4、M5居多,常以发热起病,白细胞增高,可伴器官浸润,合并EVI1基因高表达多见。本病常规化疗的缓解率不低,但达到分子学缓解困难,极易出现早期复发,持续分子学阴性状态下尽早行allo-HSCT可能获得长期完全缓解。

多聚酶链反应检测白血病淋巴瘤TCRr基因重排的初探

现代医学分子生物学的发展证实,急性淋巴细胞白血病(ALL)和淋巴瘤等淋巴系恶性增殖性疾病,存在着特异的免疫球蛋白基因或T细胞抗原受体(TCR)基因的重排。用多聚酶链反应(PCR)将重排的基因片段放大100万倍,由此可检测出体内占细胞总数1/100000的恶性细胞。

15例急性混合细胞白血病的临床与实验研究

目的 :研究急性混合细胞白血病 (MAL)的临床特征、实验室指标、治疗及预后。方法 :对 15例MAL骨髓标本分别进行光镜细胞形态学及相关细胞化学染色观察 ,以确定其FAB类型 ,应用流式细胞仪做免疫分型检测一系列相关单抗 ,同时采用G显带技术进行核型分析 ;应用PCR基因扩增方法检测TCRδ/IgHCDRⅢ 2基因重排 ;运用急性粒细胞白血病 (AML)、急性淋巴细胞白血病 (ALL)或兼顾二者的治疗方案。结果 :MAL患者的临床表现与AML及ALL患者的差异无显著性意义 ,形态学上MAL表现为AML的多为M2a、M1、M4,表现为ALL的多为ALL L2 ;免疫分型显示MAL患者中以三系共表达者多见。另外 ,CD117、HLA DR在MAL中呈高表达。提示MAL的白血病细胞可能起源于早期造血细胞 ;核型分析可见异常染色体出现 ,但无特异性 ;基因重排显示部分患者TCRδ/IgHCDRⅢ 2为阳性 ;患者对治疗反应差 ,生存期相对较短。结论 :MAL具有独特的临床、实验室检查指标及预后。

急性髓系白血病M_(2b)型分子水平特征的鉴定

急性髓系白血病（AML）M2b是我所在50年代末根据形态学和临床特点提出的一个AML特殊亚型,该亚型已于1986年被正式纳入我国白血病分型方案。对于该亚型的临床表现、细胞化学染色、超微结构等已进行了较祥细的研究。初步的染色体核型分析表明AML-M2b常有t（8;21）染色体易位。国际上于70年代从染色体异常的特点提出t（8;21）白血病。