脑脊液细胞学呈混合细胞反应的临床意义

目的探讨脑脊液呈混合细胞反应对结核性脑膜炎的诊断价值及与其它疾病鉴别的临床意义。方法回顾548例不同疾病患者脑脊液细胞学检查结果;采用粟氏细胞分类计数法计数患者不同病程时间的脑脊液细胞,并对其中73例呈混合细胞反应的病例进行统计分析。结果 73例脑脊液呈混合细胞反应的病例中结核性脑膜炎55例,阳性率87.3%(55/63),病毒性脑膜炎7例,阳性率3.5%(7/202),隐球菌性脑膜炎3例,阳性率100.0%(3/3),化脓性脑膜炎2例,阳性率4.8%(2/42),脑膜癌2例,阳性率8.7%(2/23),免疫性炎症2例,阳性率2.7%(2/74),其他疾病2例,阳性1.5%(2/131)。病毒性脑膜炎呈混合细胞反应多在发病3 d以内,最长达7 d;隐球菌性脑膜炎呈混合细胞反应持续时间较长;化脓性脑膜炎在早期呈中性粒细胞反应,在短期治疗后才会出现混合细胞反应;非感染性疾病呈混合细胞反应时细胞数和中性粒细胞比例较少,脑膜癌还可找到恶性细胞。结论脑脊液细胞学呈混合细胞反应多见于结核性脑膜炎,但仍需结合病史、病程作出判断,且脑脊液细胞学动态观察的鉴别意义较大。

脑脊液细胞学呈混合细胞反应对结核性脑膜炎的临床价值

目的探讨脑脊液细胞学呈混合细胞反应对结核性脑膜炎的诊断、治疗及预后判断的临床价值。方法收集2009年2月至2012年3月新疆维吾尔自治区人民医院收治的脑脊液细胞学检查呈混合细胞反应的患者121例,常规腰椎穿刺,采用细胞玻片自然沉淀法制片,行瑞氏-姬姆萨染色,光学显微镜下观察细胞种类并进行分析。结果病毒性脑膜炎淋巴细胞数增多,而化脓性脑膜炎白细胞总数及中性粒细胞比例在各类疾病中均最高。结论混合细胞反应主要见于结核性脑膜炎,但仍需结合病史及其他检查作出诊断,且脑脊液细胞学动态观察对治疗、预后及鉴别诊断意义较大。

脑脊液细胞学呈混合细胞反应的临床意义研究

目的分析脑脊液呈混合细胞反应的患者资料,进一步探讨其临床意义。方法选择承德市中心医院收治的443例脑脊液细胞检验的患者资料,采取统计以及分类的方法,对呈混合细胞反应的患者资料进行分析。结果在443例患者中,病毒性脑膜炎患者50例呈混合细胞阳性反应者7例,占14.0%;结核性脑膜炎呈混合细胞反应者60例,阳性反应者为51例,占85.0%;隐球菌性脑膜炎有3例,均呈混合细胞反应,阳性率100%;其余几种疾病混合细胞反应者数均较小,阳性率较低。结论混合细胞反应中出现最频繁的疾病分别是结核性脑膜炎以及隐球菌性脑膜炎,患者脑脊液细胞学呈混合细胞反应能够对多种脑部疾病具有明显的诊断价值,在诊断过程中应该联合其它不同形式的辅助检查手段更能为临床疾病确诊提供有利的诊断依据。

联合应用活体染料CFDA-SE和SNARF-1检测混合淋巴细胞反应

目的建立一种能够对单向混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度进行更全面评价的增殖检测方法。方法BALB/cJ小鼠淋巴结细胞经CFDA-SE标记后作为应答细胞,BALB/cJ或C57BL/6小鼠脾细胞经丝裂霉素C处理后再用SNARF-1标记,作为刺激细胞,进行混合培养。混合培养96h后收获细胞,用流式细胞术进行检测,分析SNARF-1-CFSE+应答细胞的增殖情况,并用ModFitTM软件拟和以获得更多增殖相关指数。结果随着应答细胞分裂代数的增加,CFSE荧光强度逐渐减弱直至与刺激细胞无法分开,通过划除SNARF-1阳性细胞以确定应答细胞,解决了这一问题。应用ModFitTM软件,获得应答细胞的前体频率和增殖指数等多项重要的增殖相关指标。结论联合应用CFSE和SNARF-1染色,结合流式细胞术,可作为评价混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度的有力工具。

滑膜间充质干细胞分离培养、免疫表型鉴定及在混合淋巴反应体系中的抑制效应

背景:滑膜组织中可分离出具有多向分化潜能干细胞特性的细胞。目的:探索滑膜间充质干细胞体外分离、培养的可行性、免疫表型的鉴定及对混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞增殖的影响,评价其免疫学特性。方法:关节镜下获取10例半月板损伤患者的膝关节滑膜组织,胶原酶消化获得有核细胞。挑选单细胞克隆,筛选获得滑膜间充质干细胞。检测其增殖能力、细胞活力,流式检测其细胞免疫表型,采用人双向混合淋巴细胞反应体系及植物血凝素刺激的淋巴细胞增殖反应体系,根据滑膜间充质干细胞与外周血单个核细胞的不同比例加入丝裂霉素处理滑膜间充质干细胞。MTT法检测并计算其抑制率。结果与结论:10组滑膜间充质干细胞系增殖能力和细胞活力差异无显著性意义(P>0.05)。10组细胞系免疫表型:CD44、CD90、CD105呈阳性,CD14、CD34、CD45和HLA-DR呈阴性。滑膜间充质干细胞抑制混合淋巴细胞反应体系中及植物血凝素刺激的淋巴细胞增殖反应体系中淋巴细胞的增殖、抑制率与加入的滑膜间充质干细胞数量成正比。提示关节滑膜组织可以分离、培养获得滑膜间充质干细胞,其具有间充质干细胞特异性表型,且滑膜间充质干细胞具有免疫调节作用。

同种和异种混合淋巴细胞反应及分类混合淋巴细胞反应的比较

目的:对比体外人外周血淋巴细胞对于异种小鼠细胞和同种异体细胞混合淋巴细胞反应. 方法:建立异种-同种混合淋巴细胞反应模型,进行分类细胞反应试验. 结果:人外周血淋巴细胞对于异种小鼠细胞的反应明显低于对于同种异体细胞的反应(P<0.05).细胞分类研究显示:在异种混合淋巴细胞反应中,主要是CD4+T细胞通过间接途径受小鼠抗原刺激而增生;在同种混合淋巴细胞反应中,主要是CD4+T细胞通过直接途径受同种异体抗原刺激而增生.在两种混合淋巴细胞反应中,CD8+T细胞也参与. 结论:异种混合淋巴细胞反应弱于同种混合淋巴细胞反应, 异种细胞只通过间接途径刺激T细胞.同种和异种混合淋巴细胞反应均需要抗原提呈细胞参与,CD4+T淋巴细胞是反应的主要细胞.

HCV C-Fc基因转染的小鼠树突状细胞促进混合淋巴细胞反应的作用

目的 :观察HCVC Fc基因电穿孔法转染的小鼠树突状细胞(DC)功能的改变。方法 :分离小鼠骨髓单个核细胞与rmGM CSF和rmIL 4培养 1wk,对培养的细胞进行形态学观察 ,并用FACS检测细胞表面DEC2 0 5的表达。以通过质粒pcD NA3HCVC Fc电穿孔法转染培养的DC ,用间接免疫荧光染色测定转染细胞中HCVC Fc的水平 ;用混合淋巴细胞反应检测电穿孔法转染细胞的功能。结果 :培养 1wk后 ,得到具有典型DC形态的细胞 ,以质粒pcDNA3HCVC Fc为载体电穿孔法转染DC后 ,转染细胞中可检测到较高水平的HCVC Fc。与对照组相比较以电穿孔法转染的细胞能明显刺激混合淋巴细胞反应。结论 :小鼠骨髓单个核细胞加GM CSF和IL 4培养 1wk ,可生成大量的DC。质粒pcDNA3HCVC Fc转染培养的DC对T细胞刺激作用显著增强。

混合淋巴细胞反应体系中胎盘间充质干细胞的免疫抑制效应

背景:胎盘由滋养细胞及大量起源于胚外中胚层的间充质和血管共同组成,提示胎盘中存在间充质干细胞成分。目的:探索胎盘间充质干细胞对混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞增殖和细胞因子分泌的影响,评价其免疫学特性。方法:分离培养胎盘间充质干细胞,采用人以及兔双向混合淋巴细胞反应体系,根据胎盘间充质干细胞:外周血单个核细胞的不同比例(1:5,1:10,1:20,1:50,1:100,1:500)加入丝裂霉素处理胎盘间充质干细胞。3H掺入法测定淋巴细胞增殖率并用ELISA法测定混合培养上清液中白细胞介素2和γ-干扰素的含量。结果与结论:胎盘间充质干细胞抑制人或兔混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞的增殖,抑制率与加入的胎盘间充质干细胞数量成正比,同时胎盘间充质干细胞减少混合淋巴细胞反应中细胞因子白细胞介素2、γ-干扰素的分泌。提示胎盘间充质干细胞具有免疫调节作用,可以抑制同种异体或异种混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞的增殖。

室内常见气传真菌代谢提取物对异型小鼠混合淋巴细胞反应的影响

目的 探讨室内常见气传真菌代谢提取物的免疫抑制作用。方法 监测室内环境中的气传真菌 ,在此基础上 ,以改良的混合淋巴细胞反应实验研究其代谢产物的免疫抑制作用。结果 室内主要气传真菌属中的青霉属、曲霉属在无明显的细胞毒性浓度下 ,可抑制异型小鼠淋巴细胞混合刺激而产生的增生。

PDL_1Ig基因修饰的恒河猴肝细胞在混合淋巴细胞反应中的效应研究

目的探讨恒河猴来源的PDL1Ig在体外混合淋巴细胞反应中的作用。方法在Gen Bank中检索到恒河猴目的基因PDL1和Ig G1Fc的序列,采用重叠延伸PCR法合成该目的基因,与p GEM-T连接转化感受态E.coli TOP10,经鉴定得到PDL1Ig基因,p Shuttle-CMV线性化后连接目的基因转化感受态E.coli TOP10,克隆p Shuttle-CMV/PDL1Ig重组穿梭质粒。将p Ad Easy-1和线性p Shuttle-CMV/PDL1Ig共电转至BJ5183细胞中同源重组,构建重组腺病毒载体p Ad Easy-1/PDL1Ig骨架,以脂质体2000将p Ad Easy-1/PDL1Ig转染至293细胞中包装成有活性的重组腺病毒。感染恒河猴肝细胞,RT-PCR和Western blotting检测目的基因的表达。混合淋巴细胞反应(MLR)测定其生物学活性。结果成功构建了PDL1Ig重组腺病毒载体,能感染恒河猴肝细胞,RT-PCR和Western blotting检测有目的基因表达,在混合淋巴细胞反应中其能抑制T细胞增殖。结论成功构建了p Ad Easy-1/PDL1Ig重组腺病毒载体,其可在恒河猴肝细胞中高效表达,该重组蛋白可在体外通过PD-1/PDL1通路抑制T淋巴细胞增殖。

胎盘间充质干细胞与免疫抑制药物体外联合应用对单向淋巴细胞混合反应的作用

目的提取并鉴定胎盘间充质干细胞,检测胎盘间充质干细胞对单向淋巴细胞混合反应的免疫调节作用,并将胎盘间充质干细胞与免疫抑制药物(环孢素A或霉酚酸)联合应用,检测二者联合后对单向淋巴细胞混合反应的作用。方法组织块培养法提取胎盘间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞表面标志,II型胶原免疫组化染色及甲苯氨蓝染色检测胎盘间充质干细胞向软骨细胞分化的能力。MTT检测单独应用胎盘间充质干细胞或与环孢素A或霉酚酸联合应用后,单向淋巴细胞反应中T细胞的增殖情况。结果成功提取胎盘间充质干细胞,其表面阳性表达CD29和CD44。II型胶原及甲苯氨蓝染色均呈阳性。单独应用胎盘间充质干细胞可抑制单向淋巴细胞混合反应中T细胞的增殖。与环孢素A联合后该作用减弱,与霉酚酸联合后该作用增强。结论组织块培养法可成功提取胎盘间充质干细胞。该细胞对单向淋巴细胞混合反应有负向免疫调节作用。胎盘间充质干细胞与不同的免疫抑制药物联合对单向淋巴细胞混合反应产生的作用是有差异的。

人-鼠间同种和异种混合淋巴细胞反应的对比

目的 :对比体外人外周血淋巴细胞对于小鼠细胞和同种异体细胞混合淋巴细胞反应 .方法 :建立异种—同种混合淋巴细胞反应模型 ,进行分类细胞反应试验 .结果 :人T淋巴细胞对于小鼠细胞的反应明显低于对于同种异体细胞的反应 .细胞分类研究显示 :在异种混合淋巴细胞反应中 ,主要是CD4 + T细胞通过间接途径受小鼠抗原刺激而增殖 ;在同种异体细胞混合淋巴细胞反应中 ,主要是CD4 + 细胞通过直接途径受同种异体细胞抗原刺激而增殖 .在两种混合淋巴细胞反应中 ,CD8+ T细胞也增殖 .结论 :异种混合淋巴细胞反应弱于同种混合淋巴细胞反应 .同种和异种混合淋巴细胞反应均需要抗原提呈细胞参与 .同种混合淋巴细胞反应中存在直接和间接两种途径 ;

去牛血清清蛋白化对复方壳多糖组织工程皮肤单向混合淋巴细胞反应的影响

目的探索复方壳多糖组织工程皮肤去牛血清清蛋白化的洗涤方法及对其单向混合淋巴细胞反应的影响。方法从头制备复方壳多糖组织工程皮肤,ELISA法检测不同洗涤条件下外渗液中牛血清清蛋白的浓度,然后检测在最优洗涤条件下组织工程皮肤单向混合淋巴细胞反应的强度。结果当洗涤间隔时间为3h,洗涤次数为2次时能使外渗液中牛血清清蛋白的浓度降到50ng/mL以下;按该方法洗涤后,组织工程皮肤的单向混合淋巴细胞反应强度显著降低。结论复方壳多糖组织工程皮肤以3h×2次洗涤,能够显著降低其外渗液中牛血清清蛋白的浓度及其单向混合淋巴细胞反应的强度。

乙型慢性活动性肝炎患者自身T_A-T混合反应及其对自身B细胞功能调理的研究

对10例乙型慢性活动型肝炎患者(CAH)进行自身T_A-T淋巴细胞混合反应(T_A-TAMLR)及其对自身B细胞功能调理的空斑形成细胞(PFC)的研究结果表明,CAH的PFC抑制率明显低下,此现象与TA-TAMLR低下密切相关。加入外源性白细胞介素-2(IL-2)后,两者反应均有所增强,但仍明显低于10例正常对照组。

全血保存前去白细胞的血小板保存7天,质量符合要求无混合淋巴细胞反应

背景全血制备的血小板(WBD-PCs)汇集，在保存前作去白细胞处理，这种方式有利于输血机构按血制品制备的时间顺序发放，减少未被输注血液所致的浪费，简化细菌筛查方面，WBD-PCs优于单一供者浓缩血小板(PC)。研究设计及方法无菌连接将4～6单位去白细胞PC汇集到-1．5LCLX-HP血小板保存袋中。质控是保存前去白细胞PC，单份保存第5和7天取样检测血小板的质量；凝集性、

离体CD4^+CD25^+调节性T细胞的扩增和混合淋巴细胞反应研究

为研究健康人外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatory T cells,CD4+CD25+Tregs)在协同刺激信号作用下的扩增反应及与CD4+CD25-T细胞混合淋巴细胞反应,采用免疫磁珠法分离CD4+CD25+Tregs和CD4+CD25-T细胞,在抗CD3-mAbs和抗CD28-mAbs的刺激下行CD4+CD25+Tregs培养和CD4+CD25+Tregs+CD4+CD25-T细胞混合淋巴细胞培养72 h。然后加入CCK-8溶液孵育1 h,用酶标仪检测OD450值。结果为:CD4+CD25+Tregs组OD450值极显著性地低于CD4+CD25-T细胞组(P<0.01)。CD4+CD25+Tregs与CD4+CD25-T细胞混合组OD450值也极显著性地低于CD4+CD25-T细胞组(P<0.01)。CD4+CD25+Tregs表现出无反应性特征,还可抑制CD4+CD25-T细胞扩增,因此,CD4+CD25+Tregs不只是很惰性的免疫细胞,而是对保持免疫耐受发挥了积极的调节作用。

Lewis大鼠骨髓来源成熟和未成熟树突状细胞的提取与鉴别

背景:树突状细胞在未成熟阶段表现出极强的抗原吞噬功能,它可以在免疫耐受、癌症的免疫治疗等方面都表现出极大的优越性。但由于未成熟树突状细胞在生物体内含量极微,这就严重限制了它在临床、科研方面的应用。目的:提取鉴别Lewis大鼠骨髓来源成熟和未成熟树突状细胞。方法:从Lewis大鼠骨髓中分离骨髓前体细胞,应用20 ng/mL粒细胞集落刺激因子、10 ng/mL白细胞介素4培养7 d诱导为未成熟树突状细胞,然后在未成熟树突状细胞中加入1μg/mL脂多糖继续培养2 d诱导为成熟树突状细胞。采用荧光倒置显微镜观察树突状细胞形态,流式细胞仪鉴定成熟和未成熟树突状细胞表面特异性分子,ELISA检测成熟和未成熟树突状细胞培养上清白细胞介素10、白细胞介素12和白细胞介素17A因子的分泌水平,混合淋巴细胞反应检测成熟和未成熟树突状细胞对T淋巴细胞的刺激反应。结果与结论:①普通荧光倒置显微镜下观察树突状细胞具有明显的突起结构;②流式细胞仪可见未成熟树突状细胞低表达CD40、CD86等共刺激分子;相反,成熟树突状细胞高表达上述共刺激分子;③未成熟树突状细胞的白细胞介素10、白细胞介素17A分泌水平要远高于成熟树突状细胞(P<0.01);未成熟树突状细胞的白细胞介素12分泌水平低于成熟树突状细胞(P<0.05);④成熟树突状细胞对T细胞的刺激明显比成熟树突状细胞强,当成熟树突状细胞与T淋巴细胞比例达到1∶10时刺激能力更强;⑤结果表明:Lewis大鼠骨髓前体细胞可以分化为树突状细胞,通过流式细胞鉴定、相关因子检测、混合淋巴细胞反应能够鉴别树突状细胞的成熟和未成熟状态。

自体树突状细胞疫苗诱导胃癌患者术后肿瘤特异性免疫反应的作用

目的探讨胃癌术后患者应用树突状细胞(dendriticcells,DCs)疫苗治疗后机体肿瘤特异性免疫反应的变化。方法采用外周血单个核细胞及自体肿瘤抗原在体外制备DCs疫苗,皮下注射胃癌术后患者,每周1次,共治疗4次。在治疗前后相应各时相点检测针对自体肿瘤抗原的迟发性超敏反应(delayedtypehypersensitivity,DTH),外周血单个核细胞混合淋巴细胞反应(mixedlymphocytereacion,MLR)及细胞上清IFNγ及IL4的水平。结果疫苗治疗后可以明提高外周血单个核细胞混合淋巴细胞反应的强度。治疗前及治疗后第2、4、8周患者外周血单核细胞(peripheralbloodmonocytecell,PBMC)分泌IFNγ的水平分别为(184±20)、(467±55)、(700±88)、(257±38)pg/ml,各组差异显著;而分泌IL4的水平分别为(66±8)、(69±9)、(66±7)、(61±7)pg/ml。各组之间无明显变化。有16例疫苗注射后患者DTH反应呈阳性。结论树突状细胞疫苗可改善胃癌术后患者免疫功能状态,并诱导出了肿瘤特异性的免疫反应。

Foxp3基因转染小鼠CD4^+ CD25^- T细胞对同种T细胞增殖反应的影响

目的观察Foxp3基因转染的小鼠CD4+CD25-T细胞对同种T细胞增殖反应的影响。方法以免疫磁珠法分离小鼠脾细胞中的CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞,用流式细胞术检测细胞纯度,以电穿孔法将质粒PMFOXP3-IRES2-EGFP转染小鼠CD4+CD25-T细胞,用荧光显微镜观察转染细胞中Foxp3的表达,转染细胞和CD4+CD25+T细胞与同种T细胞做混合淋巴细胞培养,以3H-TdR掺入测定CPM值。结果在质粒PMFOXP3-IRES2-EGFP转染CD4+CD25-T细胞24h后,转染细胞中可检测到高水平的Foxp3;转染细胞和CD4+CD25+T细胞CPM值分别为3 927.0±674.7和3 895.3±504.6(P>0.05)。结论以质粒PMFOXP3-IRES2-EGFP转染的CD4+CD25-T细胞对同种T细胞增殖反应具有显著抑制作用,与CD4+CD25+T细胞的抑制作用等同。