甲3型、乙型流感病毒在MHL混合细胞中增殖的研究

〔目的〕建立MHL混合细胞瓶分离培养流感病毒的方法 ,为进行流感监测及临床快速诊断打下基础。〔方法〕采用MDCK、HEP -2、LLC混合细胞培养瓶和MDCK单一细胞培养瓶 ,同时分别接种甲 3型和乙型流感病毒标准毒株 ,并设立阴性细胞对照组 ,观察甲 3型和乙型流感病毒毒株在混合细胞瓶和MDCCK细胞瓶中的细胞病变效应 (CPE)、血凝滴度和单克隆抗体荧光染色情况。〔结果〕病毒血凝滴度分别均为 1:160 ,经 1:5稀释的甲 3型和乙型流感病毒接种MHL混合细胞瓶和MDCK细胞瓶经 3 7℃、48h培养后 ,感染甲 3型病毒细胞出现细胞拉网、团聚病变现象 ,感染乙型流感病毒细胞则出现明显细胞固缩、脱落现象 ,MDCK单一细胞培养瓶CPE强于混合细胞培养瓶 :3 7℃、72h培养后 ,检测血凝滴度 ,感染甲 3型流感病毒的MDCK细胞和混合细胞均为l:40。感染乙型流感病毒的MDCK细胞为 1:12 0 ,MHL混合细胞为 1:2 0 ;单克隆荧光抗体检测 ,感染甲 3型和乙型流感病毒的MDCK细胞和混合细胞均呈阳性。〔结论〕应用MDCK、HEP-2 ,LLC混合细胞瓶分离、培养 ,不仅可对甲型流感爆发进行流行病学监测 ,同时还可分离鉴定其它呼吸道病毒 ,利于临床诊断、治疗和预防。

硬头鳟巨噬细胞的体外长期培养(简报)

鱼类的巨噬细胞和高等脊椎动物的一样,在吞灭入侵的病原体方面起着极其重要的作用。探索在体外长期培养巨噬细胞的方法,有助于研究巨噬细胞的机能。Braun-Nesje等虽已从硬头鳟(Salmo gairdneri)等鲑科鱼类的头肾中分离出大量的巨噬细胞,并在体外培养了3个月之久,但因细胞不分裂,无法传代。本研究改用组织块培养法和饲养层技术探索长期培养巨噬细胞的方法,并获得成功。迄今巨噬细胞已在体外培养22个月,传代48次。细胞的原代培养分为三组。前两组是单独的脾或头肾的组织培养;第三组是脾与头肾的混合组织培养。培养液是Leibovitz’s L-15,外加20%胎牛血清,100 IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素。

小鼠神经干细胞免疫原性的研究

目的:探讨小鼠神经干细胞(NSCs)免疫原性,以利于解决神经干细胞移植中的免疫排斥问题。方法:(1)首先将30只C57BL/6近交系小鼠随机分成两组,以BALB/c近交系小鼠的NSCs及肝细胞(作为体细胞对照组)分别进行腹腔主动免疫,然后将NSCs及肝细胞分别与各自免疫后小鼠的T淋巴细胞进行单向混合淋巴细胞培养,通过液闪计数仪检测各自T淋巴细胞增殖程度,从而比较两者免疫原性的强弱。(2)利用异硫氰酸荧光素标记抗体(FITC)及Phycoery-thrin(PE)抗体分别标记BALB/c小鼠NSCs主要组织相容性抗原复合物Ⅰ、Ⅱ(MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ),然后通过流式细胞术(FCM)分别检测BALB/c小鼠NSCs及其肝细胞的MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ阳性细胞比例,从而推断小鼠NSCs的免疫原性。结果:(1)NSC组液闪计数仪检测所得cpm值为16592.8±2865.3,肝细胞组为27815.0±2416.3,NSC组明显低于肝细胞组,差别有统计学意义(P<0.01)。(2)小鼠NSCs实验组中,约(87.55±3.65)%的增殖期神经干细胞没有检测到MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ分子表达;而作为对照组的小鼠肝细胞组中,仅有约(27.45±1.86)%的肝细胞未表达MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ分子。且NSC组MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ阴性细胞比例明显高于肝细胞组,差别有统计学意义(P<0.01)。结论:小鼠神经干细胞具有较弱的免疫原性,且其免疫原性明显低于同一个体的肝细胞。

受者外周血淋巴细胞黏附分子基因表达对肾移植急性排斥反应的预测作用

目的探讨肾移植受者外周血淋巴细胞LFA-1、ICAM-1基因表达水平对术后急性排斥反应的预测作用。方法(1)在取肾同时取供体脾脏,并制成脾细胞悬液。在术前及术后第4天分别抽取受者外周静脉血,并分离出淋巴细胞。同时跟踪调查受者术后1个月内急性排斥反应的发生情况。(2)以供者及无关者脾细胞为刺激细胞,受者淋巴细胞为反应细胞,做混合淋巴细胞培养。采用MTT法测定供者及无关者脾细胞刺激受者淋巴细胞增殖的刺激指数。采用半定量RT-PCR方法测定在供体脾细胞、无关者脾细胞刺激及未刺激时,受者淋巴细胞LFA-1I、CAM-1基因表达水平。结果(1)本组研究了35例能够获取外周血淋巴细胞及供体脾细胞的患者,术后1个月内发生过急性排斥反应10例,未发生急性排斥反应25例,急性排斥反应发生率28.6%。(2)术前及术后第4天时,供体及无关者脾细胞刺激受者淋巴细胞增殖的刺激指数在发生急性排斥反应与未发生急性排斥反应受者之间差异无统计学意义(P>0.05)。术后第4天,正常组淋巴细胞对供体脾细胞反应的刺激指数术后较术前的下降值明显高于排斥组,二者之间差异有统计学意义(P<0.05);而正常组和排斥组淋巴细胞对无关者脾细胞反应的刺激指数术后较术前的下降值差异无统计学意义(P>0.05)。(3)术前及术后4d,未刺激时,受者淋巴细胞LFA-1I、CAM-1基因表达水平在发生急性排斥反应与未发生急性排斥反应受者之间差异无统计学意义(P>0.05);术前及术后4d,无关者脾细胞对受者淋巴细胞刺激时,受者淋巴细胞LFA-1I、CAM-1基因表达水平在发生急性排斥反应与未发生急性排斥反应受者之间差异无统计学意义(P>0.05);术前及术后4d,供者脾细胞对受者淋巴细胞刺激时,受者淋巴细胞LFA-1I、CAM-1基因表达水平在发生急性排斥反应与未发生急性排斥反应的受者之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论(1)术前、术后受者淋巴细胞对供体特异抗原及无关者抗原反应的刺激指数,对术后急性排斥反应发生无预测作用;而术后,受者淋巴细胞对供体抗原反应的刺激指数较术前的下降值可能有一定的预测作用。(2)术前、术后在无关者抗原刺激及无抗原刺激时,肾移植受者外周血淋巴细胞LFA-1I、CAM-1基因表达水平对术后急性排斥反应发生无预测作用。(3)术前、术后在供体特异抗原刺激时,肾移植受者外周血淋巴细胞LFA-1I、CAM-1基因表达水平对术后急性排斥反应发生有明显预测作用。

CML相关抗原诱导正常T细胞增殖的TCR Vα基因选用和克隆性研究

目的:了解慢性粒细胞白血病(CML)相关抗原体外诱导T细胞的TCR Vα亚家族限制性表达和克隆性增殖情况。方法:采用混合淋巴细胞和肿瘤细胞培养(MLTC)方法,利用CML细胞、K562细胞和bcr3-abl2多肽体外诱导脐血或正常人的T细胞增殖,用RT-PCR和基因扫描分析MLTC后T细胞的29个TCR Vα亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解各Vα亚家族的限制性表达情况和T细胞克隆性增殖特点。结果:经CML抗原刺激后增殖的T细胞仅表达部分Vα谱系基因(1-14个亚家族),两例脐血均出现有Vα3亚家族T细胞克隆性增殖趋势;正常人外周血出现寡克隆增殖的Vα5、Vα14亚家族T细胞。结论:CML相关抗原体外诱导脐血和正常人T细胞出现抗原相关的TCR Vα优势利用和克隆性增殖。