混合脐血移植的实验研究

为探讨混合脐血移植重建免疫造血系统的可行性 ,扩大脐血移植 (CBT)的应用范围 ,将孕 2 0日的C5 7BL / 6 (H- 2 b)小鼠和 6 15 (H - 2 k)小鼠经剖腹产取出胎盘和胎鼠 ,剪碎后分离出脐血单个核细胞 (MNC) ,将二者各 1× 10 6个 MNC混匀后经尾静脉注入 X线直线加速器致死量照射的 BAL B/ c(H- 2 d)小鼠。1个月后 ,用抗小鼠 H- 2 Db和 H- 2 Kk单克隆本检测受鼠中嵌合体的存在 ;用混合淋巴细胞培养检测特异性的免疫耐受。结果未行MNC移植的对照组小鼠 3周内全部死亡 ;移植组 70 %存活 ,且体内形成稳定的混合嵌合体。体外混合淋巴细胞培养发现 ,受鼠对两个供者均产生了特异的免疫耐受。证明 2份小鼠脐血可在同一个受鼠体内产生混合嵌合体 ,能重建同种异基因小鼠的免疫造血系统而不引起明显的移植物抗宿主反应 (GVHD) ,这一模型可用于研究临床混合脐血移植中遇到的许多问题。

混合脐血成人移植定量监测植入状态的实验研究

为了定量监测和研究双份异基因脐血用于成人白血病患者移植后两份脐血的植入状态、嵌合体类型、供者细胞相对数量的动态变化及演变规律 ,采用荧光标记复合扩增短串联重复 (STR)位点嵌合体定量检测技术 ,对 1例急性髓细胞白血病成人患者移植两份 (脐血 1有核细胞数为 2 .5× 10 7/kg ,脐血 2有核细胞数为 1.5 3× 10 7/kg)HLA各 1个位点不相合的异基因脐血前后的序列血样进行 9个STR位点的检测 ;利用供、受者之间的差异位点定性判断脐血是否植入以及嵌合体类型 ;而后根据 377XLDNA测序仪上荧光扫描后两供者差异基因检出峰的峰面积计算脐血植入后患者体内两份脐血的细胞相对数量 ,定量分析供体细胞植入程度及演变规律 ;并与采用HLA差异基因对植入状态的分析结果进行对比。结果表明 :移植后 15天两份脐血同时植入 ,植入状态为完全双份供者嵌合体 ,患者体内脐血 1的相对细胞数量占 5 1.3% ,脐血 2占 4 8.7% ;30天时脐血 1嵌合体细胞上升为 70 .0 % ,脐血2嵌合体细胞下降为 30 .0 %。 5 2天时只检测到脐血 1的基因 ,植入状态转为完全单份供者嵌合体 ,有核细胞数少的一份脐血被排斥 ,有核细胞数多的一份长期植入。结论 :荧光标记复合扩增STR嵌合体定量检测可精确地描述两份脐血的植入程度及变化过程 。

混合脐血移植后造血及免疫重建特性的研究

目的 探讨混合脐血移植重建造血和免疫功能的特点及规律。方法 分别将两份人HLA半相合、不相合混合脐血或单份脐血输入经亚致死量照射后的严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠。观察三组脐血在SCID小鼠体内植入状况及造血和免疫功能重建特性。结果 单份和混合脐血均可在受鼠体内植入 ,形成供 受混合嵌合体 ,植入率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,并能重建人类多系造血 ,且易于向NK和B淋巴细胞方向分化。用多聚酶链反应 序列特异性寡核苷酸 (PCR SSO)探针检测人HLA DQB1基因发现 ,混合脐血移植可有 1份或 2份脐血植入 ,其中造血祖细胞含量和体外集落形成能力高者 ,更易于植入 ,且供者间HLA差异小者 ,趋向两份脐血同时植入。结论 混合脐血移植可重建SCID小鼠造血和免疫功能 ,但造血细胞各谱系分化不均衡。