微柱高效液相色谱-质谱/质谱快速鉴定混合蛋白质新方法

发展了一种混合蛋白质快速鉴定的新方法 .将几种蛋白质的混合物于热变性后直接在溶液中酶解 ,利用微柱高效液相色谱 -离子阱串级质谱进行肽谱 /氨基酸序列分析 ,并结合 Mascot数据库搜索处理功能 。

混合蛋白酶水解虾壳蛋白的研究

本文报导了混合酶水解虾壳蛋白的最佳水解条件。虾壳经“高短法”处理后，加入混合蛋白酶进行水解反应，虾壳水解产率可达２２．０％，虾壳蛋白的消化率为６６．９％，水解液具有浓厚的鲜虾风味，可制作调味品。

AS1.398和2709混合蛋白酶脱毛对猪皮蛋白的水解

制革中猪皮有温有浴酶脱毛工艺大多是采用单一酶 :AS1.3 98或 2 70 9进行脱毛 ,在酶脱毛过程中同时使用两种酶的则很少 ,本文将AS1.3 98与 2 70 9按不同的比例定量 (5 0 0酶活单位 / g皮 )混合 ,在相同的温度、不同的 pH值、不同时间下进行脱毛 ,从而得出了最佳的脱毛条件 ,在该条件下 ,脱毛废液中总蛋白含量稍高 ,而胶原蛋白损失仅为单一酶的 1/ 4到 1/ 3 ,从而为克服有温有浴猪皮酶脱毛易产生松面和在我国牛皮和羊皮有温有浴酶脱毛并没有真正推向工业化生产等不足 。

混合蛋白质体系中魟鱼和海兔肝铁蛋白释放铁的动力学研究

分别制备含有魟鱼肝铁蛋白(liver ferritin of Dasyatisakajei, DALF)和海兔肝铁蛋白(Liver ferritin of Aplysia, ALF)的混合蛋白质体系。选用电子光谱技术和不同电子供体,研究在混合蛋白质体系中,DALF和ALF释放铁的动力学过程和规律。实验结果表明,采用Na2S2O4作为还原剂时,DALF以两相行为进行释放铁的反应;而选用抗坏血酸作为还原剂时,DALF却以一级反应动力学方式进行释放铁的反应,简化释放铁的过程。在混合蛋白质体系中且以抗坏血酸和Na2S2O4为电子供体时,ALF均以一级反应动力学过程进行释放铁的反应,认为某些蛋白质参与协助ALF释放铁反应,从而简化释放铁的过程。

大豆11S球蛋白酶解产物及对肌原纤维混合蛋白特性的影响

将大豆11S球蛋白用碱性蛋白酶酶解得到不同水解度的酶解产物,对酶解产物溶解度和微观结构进行分析,并将猪肉肌原纤维蛋白(MPI)与酶解产物按一定比例制备肌原纤维混合蛋白凝胶,研究混合蛋白的浊度、溶解度和疏水性。结果表明:酶解产物溶解度随水解度增大而递增,同时结构发生变化,不同水解度产物与肌原纤维混合蛋白的性质亦有一定的递变趋势。

混合蛋白饮品中复配稳定剂的应用分析

当前市场上各种混合蛋白饮品种类繁多,其中蕴含混合蛋白体系,为了有效提高混合蛋白体系的稳定性,需要合理选择稳定剂,单纯使用一种稳定剂往往难以达到理想效果,为了分析复配稳定剂在混合蛋白饮品中的应用,本文以大豆分离蛋白和浓缩乳蛋白为主要原料,综合分析卡拉胶、黄原胶、PGA3种稳定剂及其复配混合物对混合蛋白体系稳定性的影响,进一步综合分析混合蛋白饮品中复配稳定剂因素间的交互作用。最终得出结果为多种稳定剂合用,常用复配稳定剂包括卡拉胶、黄原胶、果胶、PGA、CMC以及海藻酸等,在此条件下制得的混合蛋白饮品稳定性良好,具有广泛的实际应用价值。

混合蛋白酶水解酪朊酸钠工艺的研究

以酪软酸钠为原料,采用混合蛋白酶水解,本文对酶水解工艺参数,小分子肽得率变化进行了系统的研究。本文得出结论:碱性蛋白酶和中性蛋白酶混合使用酶解酪朊酸钠的最适宜条件为:温度为45 ,pH为6.5,酶解时间为24小时,底物浓度为10%,酶用量为1.55?04u/g.

小麦-混合蛋白日粮添加赖氨酸对猪早期增重的影响

在小麦 混合蛋白日粮中分别添加 0 .15 %、0 .10 %、0 .0 5 %的赖氨酸饲喂仔猪达 45天 ,结果添加 0 .15 %和0 .10 %赖氨酸后仔猪平均日增重和料重比比对照组极显著提高 (P <0 .0 1) ,其中以添加 0 .15 %的赖氨酸的效果最好。其日增重达 418± 5 1.44克 ,比对照组高出 2 6.2 8% ,料重比 3 .3 6± 0 .62比对照低 2 0 .3 8% 。

混合蛋白酶制备麦麸多肽酶解工艺的研究

采用碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)、中性蛋白酶(Protex 7L)和木瓜蛋白酶(Papain)复配成混合蛋白酶,应用于麦麸多肽的制备。在单因素试验基础上,利用混料设计法对混合蛋白酶制备麦麸多肽的酶解工艺进行优化,确定最优酶解工艺为:混合蛋白酶添加量为3%,Alcalase2.4L﹕Protex 7L﹕Papain为1.77﹕1﹕2.23,酶解温度60℃,酶解时间1.5h,酶解pH 8。在最优酶解工艺条件下,水解度为28.24%,多肽得率为33.07%。

外周血受体相互作用蛋白激酶3、混合系列蛋白激酶样结构域水平与新生儿坏死性小肠结肠炎病情严重程度的关系

目的分析新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)患儿外周血受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)、混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)的表达情况及其与病情严重程度的关系。方法选取92例NEC患儿纳入NEC组,并根据病情严重程度进一步分为轻度NEC组(Ⅰ级)60例和重度NEC组(Ⅱ~Ⅲ级)32例,另选取同期诊治的60例腹股沟斜疝患儿纳入对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测外周血RIPK3 mRNA、MLKL mRNA表达;采用Pearson相关分析法明确NEC组外周血RIPK3 mRNA与MLKL mRNA表达的相关性;采用免疫印迹法检测NEC回肠组织和正常回肠组织中RIPK3、MLKL蛋白表达;采用多因素Logistic回归分析明确重度NEC发生的独立危险因素。绘制受试者工作特征曲线,分析外周血RIPK3 mRNA、MLKL mRNA单独及联合预测重度NEC的价值。结果NEC组外周血RIPK3 mRNA、MLKL mRNA相对表达量分别为(2.41±0.52)、(3.03±0.64),高于对照组的(1.02±0.21)、(0.93±0.20),差异有统计学意义(P<0.001)。NEC回肠组织中RIPK3、MLKL蛋白相对灰度值分别为(1.20±0.21)、(1.13±0.24),高于正常回肠组织的(0.34±0.12)、(0.32±0.11),差异有统计学意义(P<0.05)。NEC组患儿外周血RIPK3 mRNA与MLKL mRNA相对表达量呈正相关(r=0.623,P<0.001)。重度NEC组合并气腹征、多器官功能障碍综合征、败血症者占比和RIPK3 mRNA、MLKL mRNA相对表达量均高于轻度NEC组,差异有统计学意义(P<0.05);RIPK3 mRNA、MLKL mRNA相对表达量升高是重度NEC发生的独立危险因素(P<0.05)。外周血RIPK3 mRNA、MLKL mRNA联合预测重度NEC的曲线下面积大于RIPK3 mRNA、MLKL mRNA单独预测(Z=4.127、4.261,P<0.05)。结论RIPK3 mRNA、MLKL mRNA在NEC患儿外周血中表达升高,两者均与NEC病情严重程度有关,且两者联合检测对重度NEC具有较高的预测价值。

大豆分离蛋白、豌豆分离蛋白和小麦面筋蛋白相互作用对高水分植物蛋白肉品质特性的影响

混合多种蛋白原料以创造具有所有原料特征的人造肉产品已经在食品领域得到研究。然而,在高水分植物蛋白肉生产领域暂未得到研究,目前也没有对使用大豆分离蛋白(SPI)、豌豆分离蛋白(PPI)和小麦面筋蛋白(WGP)的混合原料开发植物蛋白肉的研究。该研究的目的是减少植物蛋白肉生产的经济成本,考察由SPI、PPI和WGP共混制备的植物蛋白肉是否比仅用SPI和PPI、SPI和WGP制备的植物蛋白肉具有更好的品质特性以及考察SPI、PPI和WGP以不同比例混合时蛋白之间的相互作用对高水分植物蛋白肉品质特性的影响。研究结果表明,WGP占比的增加增大了产品的硬度和咀嚼性,所有的混合原料基样品均呈现很好的组织化结构,当样品配比为P20W30时达到了最高的组织化度(2.14±0.07),混合蛋白原料也使产品的持水率增加,表观观察和SEM也显示3种混合蛋白原料产品有着更好的拉丝效果和纤维化结构,此外,傅里叶变换红外光谱表明混合蛋白原料产品主要以稳定的β结构存在,WGP占比的增加降低了产品的流变性能。总的来说,该研究表明混合3种蛋白制备的植物蛋白肉有着更好的品质特性。

蝇蛆蛋白混合物对美洲鳗鲡非特异性免疫功能的影响

蝇蛆既是优质饲料蛋白质又是新型免疫增强剂。为探明蝇蛆蛋白混合物对美洲鳗鲡非特异性免疫功能的影响,水温为25~28℃时,将750尾初始体质量(95.0±5.0)g的美洲鳗鲡随机分为5组,每组3个平行,每个平行50尾鱼,分别投喂在基础饲料中添加质量分数为0%(对照组)、5%、10%、15%和20%蝇蛆蛋白(由蝇蛆蛋白混合物折算而来)的饲料,投喂养殖60 d后,测定美洲鳗鲡血清中溶菌酶、补体3、补体4、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶、谷丙转氨酶和谷草转氨酶等免疫指标的变动情况及嗜水气单胞菌攻毒后美洲鳗鲡的死亡率。试验结果显示:美洲鳗鲡血清中补体3、补体4含量随蝇蛆蛋白混合物添加比例增加而显著提高(P<0.05),其中补体3以15%添加组含量最高,补体4以20%添加组含量最高;血清中溶菌酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性均随蝇蛆蛋白混合物添加量的增加先升后降,除5%添加组碱性磷酸酶活性与对照组差异不显著外,其余均显著高于对照组(P<0.05),其中溶菌酶、酸性磷酸酶和超氧化物歧化酶均以15%添加组活性最高,碱性磷酸酶以10%添加组最高;谷丙转氨酶活性也随蝇蛆蛋白混合物添加量的增加先升后降,但蝇蛆蛋白添加量低于20%的处理组与对照组差异不显著(P>0.05);谷草转氨酶活性则随蝇蛆蛋白混合物添加量的增加逐渐下降,但只有蝇蛆蛋白添加水平超过15%后才显著低于对照组(P<0.05)。攻毒试验结果表明,15%添加组的美洲鳗鲡累积死亡率最低,与对照组差异显著,相对免疫保护率最高。综上所述,在饲料中添加蝇蛆蛋白混合物能显著提高美洲鳗鲡非特异性免疫功能和抗病力,最佳添加量为15%蝇蛆蛋白。

二甲双胍与精蛋白锌重组人胰岛素混合注射液治疗2型糖尿病临床观察

目的探析在2型糖尿病患者临床治疗中应用精蛋白锌重组人胰岛素混合注射液与二甲双胍的效果。方法选取2019年5月至2022年2月我院接治的100例2型糖尿病患者进行探析,采用随机数字表法进行分组处理,对照组50例采用精蛋白锌重组人胰岛素混合注射液治疗方法,研究组50例实施精蛋白锌重组人胰岛素混合注射液与二甲双胍联合治疗方法。比较2组治疗前后血糖指标变化、胰岛β细胞功能、生活质量评分指标、不良反应发生情况以及临床治疗效果。结果治疗前,研究组患者血糖指标、胰岛β细胞功能及生活质量水平与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。经不同方式治疗后,研究组血清糖化血红蛋白、空腹血糖以及餐后2 h血糖指标均低于对照组(P<0.05);研究组空腹胰岛素及胰岛β细胞功能指数低于对照组,胰岛素抵抗指数高于对照组(P<0.05);研究组生活质量和临床治疗效果高于对照组,不良反应总发生率低于对照组。结论在2型糖尿病患者中联合运用精蛋白锌重组人胰岛素混合注射液与二甲双胍治疗方法,可以有效降低患者血糖指标以及不良反应发生概率,改善患者胰岛β细胞功能,促使患者生活质量和临床治疗效果显著提升,值得临床运用推广。

异步发酵对混合植物蛋白品质的影响

以豆粕、菜粕和豌豆为混合原料,通过异步发酵工艺改善其蛋白品质。考察不同发酵菌株、原料配比、发酵和酶解条件等单因素条件,并结合响应面试验和正交试验确定最佳的异步发酵工艺,以粗蛋白、酸溶蛋白、蛋白溶解度和蛋白酶活力等指标评价混合蛋白品质。结果表明,单因素实验中米曲霉为最佳的发酵菌株,其分泌的中性蛋白酶活达到676.56 U/g,固态发酵时间为49 h,发酵温度29.9℃,初始发酵水分39.7%。在此工艺下,混合植物原料中的粗蛋白、酸溶蛋白和蛋白溶解度分别提高了15.5%、344%和132%;液态酶解最佳条件为:料水比1:4(m/m),酶解时间18 h,酶解温度50℃,酶解后混合植物蛋白的粗蛋白、酸溶蛋白和蛋白溶解度分别提高了2%、101%、244%。综上,优化先固态发酵,后利用发酵产的蛋白酶液态酶解的异步工艺后混合蛋白原料中的粗蛋白、酸溶蛋白和蛋白溶解度明显提高,蛋白质品显著改善,为蛋白的开发利用提供了基础。

铜绿假单胞菌混合蛋白疫苗制备研究

为了制备免疫力高、不良反应少的铜绿假单胞菌混合蛋白疫苗,试验采用间接ELISA方法测定内毒素蛋白、类毒素和外膜蛋白免疫后小鼠的血清抗体效价,鲎试剂凝胶半定量方法测定上述3种蛋白的内毒素含量,采用'高免疫力+低内毒素'作为配伍指标制备5组混合蛋白疫苗,分别编为1~5号,间接ELISA法测定混合蛋白疫苗的免疫力水平,鲎试剂凝胶半定量方法测定混合蛋白疫苗的内毒素含量,小鼠腹腔注射法测定混合蛋白疫苗的异常毒性。结果表明:三种蛋白免疫后,小鼠血清抗体效价均随免疫进程持续升高,内毒素蛋白抗体效价最高,达到1∶12 500;内毒素蛋白中内毒素含量(E内)为8.00 EU/mL,类毒素中内毒素含量(E类)为1.73 EU/mL,外膜蛋白中内毒素含量(E外)为2.24 EU/mL;3号混合蛋白疫苗(内毒素蛋白∶类毒素∶外膜蛋白=60∶20∶20)血清抗体效价达到了1∶12 800,其内毒素含量(E3)为5.66 EU/mL;3号混合蛋白疫苗异常毒性试验合格。说明3号混合蛋白疫苗免疫效果好,与内毒素蛋白持平,且内毒素含量低于内毒素蛋白。

恙虫病东方体混合重组抗原应用于胶体金免疫层析试纸条的制备及效价检测

胶体金免疫层析试纸条具有携带方便、操作简单且敏感性、特异性高等特点,近年来开始广泛应用于疾病的诊断。为了实现对恙虫病的快速检测,笔者利用双抗原夹心法,以胶体金标记恙虫病东方体56 kDa混合重组蛋白,56 kDa混合重组蛋白和兔抗恙虫病东方体多克隆抗体分别喷在检测线及质控线上,制备了用于检测恙虫病东方体抗体的胶体金免疫层析试纸条。本研究制备的胶体金试纸条检测限为61 ng/mL,和疟疾、伤寒、血吸虫、出血热以及斑点热等阳性血清无交叉反应,特异性达90%(54/60),检测的敏感性为91.96%(103/112),在4℃下可稳定保存6个月。本试纸条能够应用于人体血清中恙虫病东方体总抗体的检测。

混合谱系激酶结构域样蛋白、caspase-8及受体相互作用蛋白激酶3 mRNA在不同阶段乙型肝炎病毒感染患者中的表达及诊断价值

目的探讨混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)、caspase-8及受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)mRNA在不同阶段乙型肝炎病毒(HBV)感染患者中的表达水平及诊断价值。方法选择2016年11月至2019年11月新乡市传染病医院收治的175例HBV感染患者为研究对象,根据病情程度将患者分为慢性乙型肝炎(CHB)组(n=67)、肝硬化(LC)组(n=61)和肝细胞肝癌(HCC)组(n=47);另选择同期于本院体检的80例体检健康者为对照组。采集各组受试者外周静脉血,应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞(PBMC)中MLKL、caspase-8及RIPK3 mRNA表达水平;采用Pearson相关检验分析HBV感染不同阶段患者PBMC中MLKL、caspase-8及RIPK3 mRNA表达水平的相关性,受试者操作特征曲线下面积(AUC)评估MLKL、caspase-8及RIPK3 mRNA表达水平对不同阶段HBV感染患者的鉴别诊断价值。结果4组受试者PBMC中MLKL、RIPK3、caspase-8 mRNA表达水平比较差异有统计学意义(F=1019.364、1009.381、159.407,P<0.05)。CHB组、LC组、HCC组患者PBMC中MLKL、RIPK3 mRNA表达水平显著高于对照组,caspase-8 mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05)。LC组、HCC组患者PBMC中MLKL、RIPK3 mRNA表达水平显著高于CHB组,caspase-8 mRNA表达水平显著低于CHB组(P<0.05)。HCC组患者PBMC中MLKL、RIPK3 mRNA表达水平显著高于LC组,caspase-8 mRNA表达水平显著低于LC组(P<0.05)。Pearson相关检验结果显示,不同阶段HBV感染组患者PBMC中MLKL mRNA表达与RIPK3 mRNA表达呈正相关(r=0.414、0.432、0.449,P<0.01),MLKL mRNA表达与caspase-8 mRNA表达呈负相关(r=-0.556、-0.378、-0.721,P<0.01),RIPK3 mRNA表达与caspase-8 mRNA表达呈负相关(r=-0.415、-0.400、-0.416,P<0.01)。PBMC中MLKL、caspase-8及RIPK3 mRNA表达水平鉴别CHB和HCC的AUC分别为0.918、0.859和0.912,三者联合鉴别CHB和HCC的AUC为0.945。PBMC中MLKL、caspase-8及RIPK3 mRNA表达水平鉴别LC和HCC的AUC分别为0.768、0.834和0.839,三者联合鉴别LC和HCC的AUC为0.895。结论HBV感染不同阶段患者PBMC中MLKL、caspase-8及RIPK3 mRNA表达水平显著上升,且三者之间存在显著相关性,MLKL、caspase-8及RIPK3 mRNA表达水平可作为鉴别诊断不同阶段HBV感染患者的生物学标志物。

混合谱系激酶结构域样蛋白非坏死性凋亡功能的研究进展

坏死性凋亡(necroptosis)是Degterev等[1]于2005年命名的一种细胞程序性死亡形式。细胞凋亡受阻时,坏死性凋亡作为一种备用途径确保细胞死亡的进展[2]。不同于凋亡对胱天蛋白酶(caspase)活性的依赖,坏死性凋亡的发生依赖于混合谱系激酶结构域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)的磷酸化。MLKL属于蛋白激酶超家族,是一种不具有激酶功能的假激酶,作为终末专属效应蛋白在坏死过程中发挥作用[3-4]。

RIP1、MLKL蛋白在未分化甲状腺癌中的表达及临床意义

目的探讨受体相互作用蛋白激酶1(RIP1)、混合系激酶区域样蛋白(MLKL)在未分化甲状腺癌(ATC)中的表达及其临床意义。方法选取48例ATC患者为研究对象,检测手术标本组织中RIP1、MLKL的表达,收集患者临床病理参数并随访,统计分析RIP1、MLKL在ATC组织标本中的表达模式及对患者预后的影响。培养人未分化型甲状腺癌THJ-11T、THJ-16T、THJ-21T、ASH-3、BHT101细胞系、分化型甲状腺癌细胞系CAL-62、PDTC-1、正常人甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1、HTORI-3,利用Western blot法及RT-PCR检测细胞系中RIP1、MLKL的蛋白mRNA的表达水平。结果(1)RT-PCR及Western blot检测显示,与正常人甲状腺细胞系及分化型甲状腺癌细胞系相比,未分化甲状腺癌细胞系中RIP1、MLKL蛋白和mRNA相对表达水平明显更高。(2)48例ATC患者中,14例起源于乳头状甲状腺癌(PTC),34例起源于滤泡状甲状腺癌(FTC)。肿瘤细胞表现出明显的多形性。形态学特征包括梭形细胞为主的肉瘤样及鳞状细胞样。(3)免疫组化染色显示,RIP1表达主要定位于ATC细胞膜。48例ATCs中有24例(50.0%)RIP1染色阳性。组织中含有混合岛状或低分化癌成分。MLKL阳性细胞核表达清晰,48例ATC患者中有29例(60.4%)患者MLKL染色阳性。(4)Kaplan-Meier生存分析显示,RIP1和MLKL过度表达会缩短ATC患者的无病生存期(DFS)(P<0.05),但对患者的总体生存率(OS)无明显影响(P>0.05)。Cox多因素分析显示,RIP1高表达、MLKL高表达、N分期、M分期均是影响ATC患者DFS的独立性危险因素(P<0.05)。结论RIP1、MLKL高表达与ATC的发生及DFS密切相关,或可作为ATC潜在的治疗靶点及预后预测的生物学标记物。