混合谱系白血病基因在恶性血液病中的研究进展

混合谱系白血病(MLL)基因是果蝇组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶2(KMT2)基因的哺乳动物同源物,编码一种特异性针对组蛋白H3第4位赖氨酸(H3K4)的甲基转移酶。MLL蛋白家族共有6个成员(MLL1、MLL2、MLL3、MLL4、SETD1A和SETD1B),是哺乳动物发育过程中重要的表观遗传调控因子,在造血系统中对造血干细胞的增殖和分化发挥重要作用。MLL家族基因突变与恶性血液病的发生密切相关,且常提示预后不良。深入了解MLL的异常改变及其作用机制有助于相关肿瘤的诊断、靶向药物的研发和预后的判断,现将MLL基因在恶性血液病中的研究进展综述如下。

混合谱系白血病蛋白与多发性内分泌癌蛋白相互作用的研究

为研究混合谱系白血病(MLL)蛋白和多发性内分泌癌蛋白(Menin)的亚细胞定位情况,探究两者之间的相互关系是否存在,分别构建了pcDNA3.1-myc-MLL和pCMV-flag-Menin重组真核表达载体。在HEK293T细胞中,分别或者同时表达Menin和MLL蛋白,通过细胞免疫荧光方法检测两种蛋白在细胞内的分布与共存关系;利用通过免疫共沉淀(Co-IP)并结合Western blot方法检测两种蛋白间的相互作用。结果表明:MLL蛋白与Menin蛋白主要在细胞核中表达,共聚焦显微镜观察显示两蛋白部分共存;Co-IP与Western blot结果显示,MLL蛋白可以在FLAG抗体的免疫沉淀物中检测出来,MYC抗体的免疫沉淀物中也能检测到蛋白Menin。结论:Menin与MLL2种蛋白在细胞中主要分布于胞核内,具有相同定位,并且存在相互作用关系。

锅柄式PCR及其在混合谱系白血病基因断裂区中的应用

染色体11q23的混合谱系白血病(MLL)基因的断裂点簇集群区(BCR)的转位,可引起婴儿急性白血病及与DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂的生化治疗法相关的白血病。由于MLL基因包括大约30个不同的转位伴侣基因,几个断裂点所在的伴侣基因的序列还不清楚,因而对MLL基因断裂点的PCR克隆是很困难的。锅柄式PCR,即用已知5'端序列和未知的3'端伴侣基因序列以形似一个锅和一个柄的模板扩增断裂点基因DNA,是一种克隆MLL基因断裂区的新方法,可以扩增未知3'端序列的断裂点簇集群区。

30例混合谱系白血病重排基因阳性儿童细胞遗传学分析

目的评价染色体核型分析在混合谱系白血病(mixed lineage leukemia,MLL)重排基因阳性儿童中的诊断价值。方法对30例经荧光原位杂交检测(FISH)提示MLL重排基因阳性儿童骨髓标本进一步行G显带核型分析。结果在30例MLL重排基因阳性儿童中,共检出染色体异常12例(40.00%),嵌合体多见,其中9例涉及11q23区域异常,包括易位、缺失、附加片段等,以易位居多,另有3例涉及其余染色体结构或数目异常。14例(46.67%)核型正常,其中2例为复诊儿童。4例(13.33%)标本因细胞生长不良,制片质量差,无法分析。另外,染色体核型分析对MLL基因阳性儿童11q23区域异常的检出率与FISH对MLL基因阳性儿童11q23基因异常检出率进行比较,差异有统计学意义(χ2=32.308,P<0.001)。结论染色体核型分析提示MLL重排基因阳性儿童相关染色体畸变的灵敏性远低于FISH,但能够明确染色体畸变性质及重排类型,对混合谱系白血病诊断、分型、预后及后续检测具有重要意义。

婴儿急性白血病34例临床分析

分析34例婴儿急性白血病的临床特征、分子遗传学特点,总结其治疗反应以及临床预后。方法 回顾性分析总结我中心自2016年1月至2023年10月收治的34例婴儿急性白血病临床资料、细胞遗传学、分子生物学特点及治疗效果。结果 急性淋巴细胞白血病18例,急性髓细胞白血病16例,17例存在MLL基因重排,近80%为高危组。19例接受治疗,2例于治疗早期死亡,7例完成全部联合化疗,6例在联合化疗部分疗程后接受造血干细胞移植,4例获得成功,单纯化疗以及化疗联合造血干细胞移植治疗使患者3年总体生存率达到57.9%。结论 婴儿急性白血病较为罕见,采用单纯化疗以及化疗联合造血干细胞移植治疗使患者总体生存率达到57.9%,需进一步开发新的治疗方法。

西达本胺联合(+)-JQ-1通过破坏DNA损伤反应途径杀伤MLL重排急性髓系白血病细胞

目的:探讨西达本胺与BRD4抑制剂(+)-JQ-1联合对混合谱系白血病基因重排急性髓系白血病(MLL-r AML)细胞的DNA损伤及修复机制的影响。方法:分别将MLL-r AML细胞系Molm-13、MV4-11细胞和非MLL-r AML细胞系Kasumi细胞分成对照组(contr)、西达本胺组(chida)、(+)-JQ-1组、联合组(combi) 4组。采用CCK-8检测Molm-13细胞活力,以确定西达本胺和(+)-JQ-1的给药浓度。采用流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax、caspase-3的表达。利用免疫荧光检测DNA损伤标志物γH2AX;Western blot检测DNA损伤因子γH2AX,DNA损伤检查点激酶p-ATR、p-CHK1、p-ATM、p-CHK2和DNA损伤修复因子Rad51、53BP1蛋白的表达情况;qRT-PCR检测DNA损伤修复因子Rad51、53BP1 mRNA的表达情况。结果:在药物西达本胺(300 nmol/L)和(+)-JQ-1(400 nmol/L)的联合作用下,MLL-r AML细胞系Molm-13、MV4-11中,与contr组相比,combi组G1期细胞比例升高;非MLL-r AML细胞系Kasumi中,与contr组相比,combi组G1期细胞比例升高(P <0.05)。在Molm-13、MV4-11细胞系中,与contr组相比,combi组DNA损伤标志物γH2AX表达水平升高(P <0.05),DNA损伤检查点和损伤修复因子p-ATR、p-CHK1、p-ATM、p-CHK2、Rad51、53BP1表达水平降低(P <0.05);而在Kasumi细胞系中,与contr组相比,combi组上述因子部分表达无明显变化(P>0.05),部分因子的表达趋势与MLL-r AML细胞系相反。在MLL-r AML细胞系Molm-13、MV4-11中,与contr组相比,combi组Bax和caspase-3蛋白表达水平升高,而Bcl-2蛋白表达水平下降(P <0.05);非MLL-r AML细胞系Kasumi细胞中,与contr组相比,combi组凋亡因子的表达无明显变化(P>0.05)。结论:西达本胺联合(+)-JQ-1可抑制MLL-r AML细胞的增殖,并通过抑制DNA损伤反应途径抑制此类白血病细胞保护性自我修复的启动,最终增加细胞的凋亡,而非MLL-r AML细胞却无类似的结果。

急性白血病患儿混合谱系白血病基因重排阳性的生物学和临床特征

目的探讨儿童AL中混合谱系白血病（mixed lineage leukemia，MLL）基因重排的发生率、融合基因的常见类型及临床特征。方法利用巢式反转录聚合酶链反应检测MLL融合基因，对87例阳性患儿的骨髓细胞形态学、免疫学、分子生物学、染色体特征以及临床表现进行回顾性分析。结果儿童AL1209例中87例有MLL基因重排，其中ALL发生率为6．41％，AML发生率为9．36％。58例ALL均为B—ALL，28例AML中M517例，M45例，M24例，M3、M6各1例，混合性白血病1例，为髓系伴T淋巴系表达。76例进行染色体核型分析，45例（59．21％）可检出克隆性染色体异常，其中28例累计11q23（36．84％）。检测到7种融合基因亚型：MLL—AF9及dupMLL各25例，MLL—AF417例，MLL—AF109例，MLL—ENL8例，MLL—AF1q2例．MLL—AF61例。MLL-AF4、MLL—AF9、MLL—AF10、MLL—ENL及dupMLL在白血病类型、年龄及WBC计数比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论儿童MLL基因重排白血病ALL中以B．ALL多见，AML以M5、M4多见；最常见的融合基因亚型为MLL—AF9、MLL—AF4和dupMLL。MLL融合基因类型不同，可能表现为不同的临床特征，其中MLL—AF4、MLL—ENL可能多见于ALL，初诊WBC较高，发病年龄较小。

治疗混合谱系白血病的小分子抑制剂研究进展

急性白血病(acute leukemia,AL)是一类造血干细胞恶性克隆性疾病。在约5%~10%的AL患者体内都能观察到混合谱系白血病(mixed-lineage leukemia,MLL)基因易位重排现象。患有MLL易位重排(MLL-rearranged,MLL-r)的白血病患者目前缺乏治疗手段,且预后差。大量研究表明,许多表观遗传调节因子直接或间接参与了MLL的发生发展过程,这为采用干预表观遗传的策略以治疗MLL提供了理论依据。本文从MLL的表观遗传学相关调控机制出发,选择代表性的药物靶点,分析各靶点与MLL的联系,并综述相关抑制剂的研发进展,希望为后续研发用于治疗MLL的药物提供参考。

由骨髓增生异常综合征转化伴稀有融合基因混合谱系白血病-AFX急性髓系白血病的研究

目的对1例由骨髓增生异常综合征（MDS）转化伴稀有融合基因混合谱系白血病（MLL）-AFX的急性髓系白血病（AML）患者进行确诊。方法骨髓涂片及多重反转录聚合酶链反应（RT-PCR），检测患者骨髓原始细胞比例及融合基因的表达。结果患者骨髓单个核细胞中检测到稀有融合基因MLL—AFX的表达。结论该例患者为MDS转化伴稀有融合基因MLL-AFX的AML，患者预后差。

具有特征性免疫表型的KMT2A基因重排婴儿急性淋巴细胞白血病的临床研究

目的 探讨具有特征性免疫表型的赖氨酸甲基转移酶2A(KMT2A)基因重排婴儿急性淋巴细胞白血病的诊断、分子机制及潜在治疗策略。方法 分析1例KMT2A基因重排婴儿急性早B前体淋巴细胞白血病患儿的临床资料及细胞形态学、流式细胞学、细胞遗传学及分子生物学等检查结果。采用“MLL-Rearranged”“KMT2A-Rearranged”“acute lymphoblastic leukemia”“infant”为关键词,对PubMed数据库2020-2023年发表的文献进行文献检索。结果 共检索到文献145篇,最终保留文献27篇。结合病例分析和文献复习,该研究主要从KMT2A基因重排婴儿早B前体淋巴细胞白血病的临床表现、免疫表型、生物学特征角度出发,重点叙述KMT2A基因重排婴儿白血病的发病分子机制以及治疗等研究现状。结论 KMT2A基因重排婴儿白血病的治疗仍具有挑战性,需要不断深入了解潜在的生物学特征,并确定风险分层的预后因素以及更有效的治疗策略。分子靶向治疗和免疫治疗可能是改善结局和降低治疗相关病死率的关键。

混合谱系白血病基因部分串联重复在急性髓细胞白血病中的研究进展

混合谱系白血病（MLL）基因位于第11号染色体长臂2区3带（11q23）,其编码产物为具有3 969个氨基酸残基的核蛋白.MLL蛋白最具特征性的功能为通过调节Hox基因表达水平决定细胞存活.急性白血病可发生MLL基因重排,其中MLL基因部分串联重复（MLL-PTD）为MLL基因重排中最为常见的形式之一,主要存在于核型正常及具有第11号染色体三体的急性髓细胞白血病（AML）中.作者拟就MLL基因结构、功能、MLL-PTD在AML发生、发展中的作用机制,及其可作为AML潜在治疗靶点等方面进行综述.

混合谱系白血病基因重排急性髓系白血病伴多发脓肿一例

患者,女,52岁,因“反复腰背部、下腹部疼痛1月余”于2017年3月10日就诊。患者1个多月前无明显诱因开始出现腰背部、下腹部疼痛,无双下肢放射痛,无腹泻,无发热畏寒,于当地医院就诊,查血常规示:WBC计数13.67×109/L,PLT计数49×109/L,Hb 97 g/L;腰椎及腹部MRI检查示:1.腰4/5椎间盘右后突出,腰1/2~腰4/5椎间盘变性;2.腰椎体边缘骨质增生,生理弯曲度变直;3.右侧盆腔区、腰大肌形态及信号改变,考虑感染并局部脓肿形成。骨髓细胞形态学检查示:急性髓系白血病(M4型)(AML-M4)骨髓象。予抗感染、止痛等对症支持治疗(具体不详),疼痛症状稍好转。后患者为进一步治疗就诊于广州中医药大学第一附属医院,门诊以“急性髓系白血病”收入院。患者既往无糖尿病、高血压、冠心病等慢性病病史,1个月前发现血糖升高。

MLL基因重排成人急性B淋巴细胞白血病和急性髓系白血病临床特征及预后危险因素分析

目的分析混合谱系白血病基因重排(MLL-r)成人急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)和急性髓系白血病(AML)的临床特征、治疗疗效及预后危险因素。方法选取2017年1月至2021年11月中国科学技术大学附属第一医院(安徽省立医院)血液内科收治的17例MLL-r B-ALL和25例MLL-r AML为研究对象,回顾性分析患者临床特征、治疗疗效及总体生存率,使用COX回归分析影响患者预后危险因素。结果MLL-r成人急性白血病诊断时常表现为外周血白细胞异常升高、贫血和血小板减少,诊断时中位白细胞计数为46.83(8.13,99.93)×109/L。MLL-r B-ALL最常见的重排为MLL-AF4重排;MLL-r AML最常见重排为MLL-AF9和MLLAF6重排。单纯化疗复发率高,异基因造血干细胞移植可以显著改善患者预后(P<0.05)。此外,多因素回归分析影响患者总生存期(OS)的因素,诊断时白细胞计数≥100×109/L(HR=8.030,95%CI:1.327~48.594,P=0.023)及异基因造血干细胞移植(HR=0.079,95%CI:0.015~0.423,P=0.003)为影响MLL-r AML患者OS的因素;异基因造血干细胞移植(HR=0.054,95%CI:0.006~0.481,P=0.009)为影响MLL-r B-ALL患者OS的因素。结论MLL-r急性白血病诊断时常表现为白细胞异常升高,单纯化疗复发率高,总体预后不佳,异基因造血干细胞移植可改善患者预后。

MLL基因重排阳性的儿童急性淋巴细胞白血病的融合基因及免疫表型特点

为了探讨混合谱系白血病(mixed linage leukemia,MLL)基因重排阳性的儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)融合基因与免疫表型的特征,利用多重巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法检测601例ALL患儿中MLL基因重排的发生率,通过对PCR产物的测序,分析融合基因的亚型及特点;比较分析重排阳性的22例患儿与同期未检出任何融合基因的随机抽取的30例ALL患儿及43例pro-B-ALL患儿初诊时免疫表型特点。结果表明:MLL基因重排阳性的ALL患儿检出率为3.66%,占pro-B-ALL的29.9%。20例MLL基因重排阳性的B-ALL患者全部为CD10-,表达CD13、CD33和CD34的例数较pro-B-ALL对照组低,CD20、CD22、CD2、CD5、CD7的表达则无差异。共检出4种MLL基因的伙伴基因AF4、AF9、AF10和ENL。MLL基因融合位点主要位于第6、7、8外显子,同一患者可同时存在多种MLL基因融合位点;而其伙伴基因的融合位点相对单一。1例患儿MLL-AF10融合转录本存在随机插入序列。结论:MLL基因重排的发生率低,重排形式多样,阳性ALL患儿在免疫表型及融合转录本的表达方面具有独特的生物学特征。

MLL基因重排阳性的儿童急性白血病患者的临床特点及预后分析

目的·分析混合谱系白血病(mixed linage leukemia,MLL)基因重排(MLL rearrangement,MLL-r)阳性的儿童急性白血病(acute leukemia,AL)患者的临床特点及预后情况。方法·回顾性分析2009年1月1日至2019年12月31日上海交通大学附属儿童医院收治的MLL-r AL患儿45例。采用荧光原位杂交和/或实时荧光定量PCR检测MLL-r。Kaplan-Meier法评估患儿生存情况,Log-rank检验比较各组生存率。对性别、年龄、白细胞数等影响生存的指标进行单因素和多因素分析。结果·AL患儿MLL-r的检出率为7.1%;在急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)和急性髓细胞性白血病(acute myeloid leukemia,AML)中MLL-r的检出率分别为5.4%和13.3%,二者差异有统计学意义(P=0.002);2组患儿的年龄(>1岁和≤1岁)和初发时白细胞数(≥50×10^(9)/L和<50×10^(9)/L)比较,差异均有统计学意义(P=0.032和P=0.021)。MLL-r ALL患儿的免疫分型以早期前体B-ALL为主,占79.2%;MLL-r AML患儿以M5为主,占77.8%。MLL伙伴基因分析,ALL患儿MLL/AF4占59.2%(16/27),其中小于1岁的患儿占68.7%(11/16),与非MLL/AF4组小于1岁的患儿数相比差异有统计学意义(P=0.034);AML患儿以MLL/AF9为主,占33.3%。42例患儿可进行疗效分析,完全缓解率为97.6%(41/42),中位随访时间26个月(2~138个月),中位无事件生存(event-free survival,EFS)和总生存(overall survival,OS)时间分别为21个月和24.5个月,3年EFS和OS率分别为(41.8±9.4)%和(60.9±9.3)%。MLL-r ALL患儿中位EFS和OS时间分别为21.5个月和28个月,3年EFS和OS率分别为(44.3±11.7)%和(58.2±12.1)%。MLL-r AML患儿中位EFS和OS时间分别为16个月和23个月,2年EFS和OS率分别为(36.5±15.8)%和(64.7±14.5)%。ALL患儿复发8例,中位复发时间20个月(2~36个月);AML患儿复发7例,中位复发时间16个月(5~38个月);二者累积复发率分别为48.4%和63.9%,差异无统计学意义(P=0.398)。单因素分析显示,MLL-r ALL患儿年龄>1岁与≤1岁组、白细胞数≥50×10^(9)/L与<50×10^(9)/L组、血小板数>30×10^(9)/L与≤30×10^(9)/L组EFS率比较差异均有统计学意义,P值分别为0.028、0.024和0.027。多因素分析显示发病时的白细胞数为影响MLL-r ALL患儿EFS的独立预后因素(RR=6.113,95%CI 0.017~1.050,P=0.013)结论·AML患儿MLL-r的发生率比ALL患儿高。MLL-r ALL患儿免疫分型以早期前体B-ALL为主,MLL-r AML患儿多见于M5型。MLL-r阳性儿童白血病患者化学治疗的缓解率尚可,但复发率高。发病时的白细胞数≥50×10^(9)/L是MLL-r ALL患儿的不良预后因素。

58例MLL基因重排阳性儿童急性淋巴细胞性白血病临床分析

目的对58例混合谱系白血病(MLL)融合基因阳性的儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)的治疗结果进行分析,探讨影响无事件生存率(EFS)的因素。方法以58例MLL融合基因阳性的ALL患儿为研究对象,对其治疗及预后进行回顾性分析,采用卡方检验对比治疗组及放弃组的临床特征,Kaplan-Meier方法进行生存分析,lon-rank方法进行组间比较,COX比例风险模型分析独立因素的影响。结果 58例患儿放弃治疗20例,依从治疗38例,总完全缓解(CR)率76%(29/38),其中MLL-AF4组CR率11%(1/9),非MLL-AF4组CR率97%(28/29),两组差异有显著性;总体3年EFS为(60.4±8.4)%,5年EFS为(45.7±9.8)%,MLL-AF4、MLL-AF9、dupMLL三组5年EFS分别为(11.1±10.5)%、(66.7±9.5)%、(75.0±15.8)%,差异有显著性。结论 MLL融合基因阳性ALL的预后与MLL融合基因类型有关,MLL-AF4阳性患儿较其它类型CR率低,预后差。

携带11q23/MLL融合基因的急性髓系白血病20例临床分析

目的分析11q23/MLL融合基因阳性的急性髓系白血病患者的临床特点,探讨其治疗措施及其预后相关因素。方法对20例11q23/MLL融合基因阳性急性髓系白血病患者的骨髓形态学、免疫学、分子生物学、染色体特征以及治疗转归情况进行总结分析。结果 20例患者中急性单核细胞白血病8例,有CD4、CD7和CD9淋系抗原表达6例;15例接受化疗,12例获得完全缓解(1疗程达完全缓解9例)。4例6个月内复发,复发率为33.33%,4例行异基因造血干细胞移植治疗,均存活(其中2例复发者)。共死亡10例。结论 11q23/MLL融合基因阳性的急性髓系白血病对常规化疗不敏感,预后不良;对初治急性白血病患者应常规进行11q23/MLL融合基因检查。异基因造血干细胞移植可明显提高11q23/MLL融合基因阳性急性髓系白血病患者的生存期。

细胞遗传学检测方法对MLL基因异常儿童急性白血病的诊断意义

目的探讨常规细胞遗传学(CC)方法和荧光原位杂交(FISH)技术诊断混合谱系白血病(MLL)基因异常、染色体11q23异常儿童急性白血病(AL)的价值。方法选取2016年6月—2021年6月上海市儿童医院收治的初发AL患儿404例,分别采用CC法和FISH技术进行细胞遗传学分析,比较2种方法MLL基因异常检出率差异。结果404例患儿中,采用FISH技术检测出57例(14.1%)MLL基因异常,包括急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿40例,其中MLL基因探针信号数目异常23例、MLL基因重排17例;急性髓系白血病(AML)患儿17例,其中MLL基因探针信号数目异常2例,MLL基因重排15例。CC法检出MLL基因异常27例(6.7%),包括ALL患儿15例,其中明确MLL基因重排伙伴基因13例;AML患儿12例,其中明确MLL基因重排伙伴基因11例。2种方法MLL基因异常检出率差异有统计学意义(P<0.001)。结论FISH技术MLL基因异常检出率高于CC法,CC法染色体核型分析可直观呈现MLL基因重排异常类型并明确其伙伴基因;2种方法可优势互补,对MLL基因异常AL的诊断均有较大意义。