改良型混合酶消化法培养小鼠乳腺上皮细胞

背景:目前采用的A型胶原酶和胰蛋白酶混合酶分离乳腺细胞团的方法操作复杂,实验条件要求高。目的:观察改良型混合酶消化法能否成功进行乳腺上皮细胞的体外培养。方法:采用Ⅰ型、Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶(1:1:1)混合消化直接用眼科剪剪碎的小鼠乳腺组织,37℃振荡消化获取乳腺细胞团,并采用差速贴壁法去除成纤维细胞,将细胞团接种于细胞培养瓶进行培养。结果与结论:倒置显微镜下观察显示,改良型混合酶消化法能获得较多的细胞团,且培养12h后细胞团绝大多数贴在细胞瓶壁,培养72h后细胞团完全铺开融合成片,细胞呈典型的铺路石样。免疫荧光细胞化学染色结果显示,培养细胞角蛋白18呈阳性反应。说明应用改良型混合酶消化法能在短时间内获得大量较纯的乳腺上皮细胞。

混合酶用于激光打印废纸脱墨的研究

将生物脱墨技术应用于惠普激光打印废纸脱墨工艺中,在尽量减少碱的用量或完全不用碱的情况下,达到了脱墨的效果和环保的目的。比较了纤维素酶、淀粉酶和脂肪酶以及它们的混合酶对脱墨的影响。分别研究了酶种类和混合酶的配比、温度、pH值对脱墨效果的影响。实验结果表明:纤维素酶和淀粉酶的混合使用有较好的脱墨效果,能使脱墨浆白度达到76.93%(ISO),接近白纸的白度80.48%(ISO)。其最佳工艺条件为:反应温度40℃、pH=9—10、纤维素酶与淀粉酶质量比=1∶1.5。为脱墨工艺的研究提供了理论依据。

混合酶酶解法对天龙粉水提液抗肿瘤作用影响的研究

目的:比较天龙粉水提液经混合酶酶解前后对喉癌hep2细胞株的抑制作用。方法:使用MTT法,以细胞抑制率为指标,研究天龙粉水提液经胰蛋白酶和弹性蛋白酶作用前后对喉癌hep2细胞株的抑制作用。结果:在所选药物浓度范围内,天龙粉水提液对喉癌hep2细胞株无抑制作用,一定浓度的天龙粉酶解液对喉癌hep2细胞株有抑制作用。结论:天龙粉水提液经胰蛋白酶和弹性蛋白酶酶解后在一定药物浓度下产生抑制喉癌hep2细胞株生长的作用。

天龙混合酶最佳酶解工艺研究

研究天龙混合酶的最佳酶解工艺,使这一动物类中药得到更好的发展利用。选择"酶解温度、酶解时间、pH值、加酶量"四个因素,设计L_(16)(4)~4正交表进行正交试验,以蛋白质水解度为指标,确定天龙混合酶的酶解最佳条件。正交试验得A_4B_4C_4D_4的蛋白质水解度最高,由正交试验得到45℃下、pH值=8.5、培养时间5 h、加酶量2500U为最佳工艺,并确定影响程度大小:酶解温度>酶解pH值>酶解时间>加酶量。

新型混合酶分离海萝原生质体的研究

本文报道使用新型混合酶，首次成功分离海萝原生质体的实验结果与培养结果。海萝（Ｇｌｏｉｌｐｅｌｔｉｓｆｕｒｃａｔａ）酶解２．５～３ｈ，获得大量成活原生质体。并观察到原生质体的自融。原生质体产率为３×１０￣６／克鲜藻；成活率为６５％。原生质浓厚的细胞经培养，可形成多细胞团或愈伤组织状细胞团，这与小石花菜细胞的培养结果，基本类同。新型混合酶价格低廉、制作简便；在使用上，还有促进细胞分裂、细胞团较长时间存活的优点。新型混合酶的研制和应用，对促进海藻生物工程的研究和海藻资源的开发，对推进２１世纪海藻高新技术及其产业的发展，将有重大的现实意义和战略性意义。

混合酶对混合办公废纸的脱墨效果的研究

将脂肪酶、木聚糖酶和纤维素酶三种酶其中的任意两种酶混合,对混合办公废纸进行脱墨试验,研究了几种酶的混合比例及脱墨效果,研究结果表明几种酶的最佳配比:纤维素酶∶木聚糖酶为1∶1,脂肪酶∶木聚糖酶为3∶1,脂肪酶∶纤维素酶为2∶3。脱墨浆的白度、强度比使用单一酶有较大提高,且比单种酶的用量省。

混合酶消化法大鼠颅盖骨细胞的原代培养和鉴定

目的通过不断的摸索,寻找一种获得细胞数量较多且纯的原代成骨细胞的体外培养方法,为下一步实验研究奠定基础。方法取出生24 h内的SD大鼠脱臼处死,取出颅盖骨,剪成1 mm×1 mm×1 mm大小的组织片;采用胰酶和Ⅰ型胶原酶混合酶消化法分离获得原代成骨细胞;采用"差速贴壁法"进行纯化。通过对细胞形态学的镜下观察,碱性磷酸酶染色及Ⅰ型胶原免疫组化法等对细胞进行鉴定。结果镜下观察所获得的细胞具有成骨细胞的典型特征,细胞多为单核,呈三角形、多边形、长梭形等形态,并伸有粗大伪足;碱性磷酸酶染色及Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性。结论采用混合酶消化法可获得数量较多且活性较好的细胞,再采用"差速贴壁法"可以去除成纤维细胞等杂质细胞,获得纯度较高的成骨细胞。

组织块贴壁法和混合酶消化法分离原代血管平滑肌细胞的表型特征比较

目的:探究组织块贴壁法、混合酶消化法分离培养的原代大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)在形态、生长、表型特征蛋白表达方面的不同,为合理使用VSMCs提供参考。方法:分别使用组织块贴壁法和混合酶消化法分离获得原代VSMCs,进行体外传代培养,观察细胞形态及细胞表型特征蛋白免疫荧光亮度。结果:混合酶消化法获得的原代VSMCs特征蛋白SMα-actin表达明显,表明在收缩表型特征方面优于组织块贴壁法,随着传代次数的增加,混合酶消化法在第7代仍部分保留收缩表型特性,而组织块贴壁法在第7代已丧失收缩表型特性,转变为合成型。结论:混合酶消化法在获得较稳定的收缩表型VSMCs方面比组织块贴壁法更具有优势,各实验室应根据自身的实验条件和实验设计准确选择。

南瓜汁混合酶解工艺研究

研究了南瓜汁混合酶解的最佳生产工艺。在单因素试验的基础上应用响应曲面法得出南瓜汁混合酶解最佳工艺条件:果胶-纤维素酶0.05%,α-淀粉酶0.65%,糖化酶0.81%,酶解温度50℃,酶解时间2 h。此工艺条件下,南瓜汁可溶性固形物含量为5.46%。

混合酶或单一酶是否可用于非淀粉碳水化合物

今年早些时候,在WorldPoultry.net的一篇博文中,作者讨论了当涉及非淀粉碳水化合物（木聚糖、β-葡聚糖和木糖葡聚糖）时选择适宜的酶制剂的话题。这引发了博客读者之间一场激烈的讨论,各自支持两个不同学派中的一个。

不同稀释液对混合酶标抗体稳定性的影响

目的 探讨不同稀释液对混合酶标抗体稳定性的影响,筛选出一种适用于混合酶标抗体的稀释液,可同时保护辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)偶联二抗和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)偶联二抗鸡尾酒混合物的稳定性。方法 以Tris-HCl缓冲盐溶液为基础溶液,设置4种不同的稀释液配方(A、B、C、D),每种配方包含不同类型的稳定剂,如蛋白、金属离子、表面活性剂、抑菌剂等,采用不同的稀释液配置混合酶标抗体,在冷藏(2~8℃)和37℃条件下存储,通过ELISA、酶活测定及免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色法检测其稳定性。结果 D液配方[Tris(50 mmol/L)+牛血清白蛋白(1.5%,g/100mL)+Tween-20(0.3%)+Proclin-950(0.1%,g/100 mL)+氯化钠(150 mmol/L)+L-Ascorbic Acid(1 mmol/L)+L-methionine(5 mmol/L)+L-histidine(5 mmol/L)+酪蛋白酸钠(1%,g/100 mL)+氯化锌(0.1 mmol/L)+海藻糖(8%,g/100 mL)]保存试剂的稳定性最好,在37℃条件下保存10周,HRP偶联二抗和AP偶联二抗的工作液效价最高,HRP和AP的活性剩余比率分别为93.46%和96.07%,IHC结果 无明显差异。结论 该配方稀释液可用于混合酶标抗体工作液的配置。

脂肪酶和纤维素酶/木聚糖酶混合用于ONP脱墨

将脂肪酶和纤维素酶/木聚糖酶以不同比例混合用于旧报纸(ONP)的脱墨实验。结果表明,当脂肪酶与纤维素酶/木聚糖酶混合酶(50/50)以40/60的比例混合时,能获得较佳的脱墨效果,浆料的裂断长、耐破指数和撕裂指数分别比纤维素酶/木聚糖酶(C/X)脱墨浆提高3.2%、7.4%、和7.1%,得率高于纤维素酶、木聚糖酶及二者的混合酶脱墨浆,滤水性能也得到了改善。混合酶中脂肪酶、纤维素酶和木聚糖酶用量分别比单一酶脱墨节省了60%、70%和70%。

酪蛋白双酶复合酶解与混合酶解作用研究

目的:研究木瓜蛋白酶与菠萝蛋白酶复合酶解、混合酶解酪蛋白的作用,比较不同水解方式的作用效果。方法:分别进行两种蛋白酶单因素水解试验,寻找各种酶的最适水解条件;在此基础上进行复合酶解与混合酶解试验,测定水解度。结果:复合酶解水解度与加酶顺序有关,也与加新酶前是否灭活旧酶有关,对于相同组合,灭活酶的水解度比不灭活酶的低。混合酶解的水解度与水解时间有关,最适水解时间与单酶最适水解时间最长的相当;混合酶解水解度高于复合酶解。结论:本试验条件下,不灭活酶组合水解度比灭活酶的高,混合酶解水解度比复合酶解的高。

双酶混合水解玉米皮渣制备阿魏酰低聚糖研究

以玉米皮渣为原料,采用酶解方法制备阿魏酰低聚糖(Feruloyl oligosaccharides,FOs),通过比较不同酶解条件下阿魏酰低聚糖产量的差异及不同酶解方式下玉米皮渣细胞壁结构的变化,确定酶解阿魏酰低聚糖生成的方法,并优化获得玉米皮渣中阿魏酰低聚糖的最佳酶解条件。结果表明:纤维素酶和木聚糖酶混合酶解可使玉米皮渣细胞壁出现溶洞,可有效提高阿魏酰低聚糖产量;经单因素和响应面实验确定双酶混合酶解的最佳条件为混合酶的添加量为15.7 g/L,混合酶中纤维素酶添加比例为70%,酶解1 h,玉米皮渣底物添加量为100 g/L,在此条件下FOs产量最高,为1008.43μmol/L。本研究为双酶混合酶解制备玉米皮渣FOs提供理论依据。

混合非淀粉多糖水解酶酶活测定方法的改进

用分光光度法分别准确测定了混合非淀粉多糖水解酶预混洋中木聚糖酶、果胶酶、β-葡聚糖酶和纤维素酶的酶活。将酶以0.1%的比例添加到饲料中后,除木聚糖酶外,其余三种酶的酶活无法准确测定出来,于是对酶活测定方法进行了改进,利用凝胶过滤色谱法对酶液进行预处理,排除了体系中还原糖等小分子量杂质的干扰;采用琼脂放射扩散法测定纤维素酶或β-葡聚糖酶酶活,提高了测定的特异性和灵敏度;利用专一性的酸性醋酸铜法测定果胶酶酶活,提高了特异性;采用硫酸铵沉淀法处理木聚糖酶,可排除别的酶对木聚糖酶酶活测定的干扰。

混合酶强化剩余污泥微生物燃料电池性能

为了提高剩余污泥为燃料的微生物燃料电池(SMFC)产电性能以及污泥减量化效果,在不同的温度(40、45和50℃)研究单室无膜微生物燃料电池中酶对SMFC产电特性的强化效果。加入单一酶(蛋白酶或α-淀粉酶)的结果表明,随着温度的上升,SMFC功率密度均上升,但40℃时强化效果最明显,与加入失活酶的对照组相比分别增加198%和130%。在40℃下,混合酶比(蛋白酶浓度:淀粉酶浓度)为2∶3时,SMFC最大功率密度为776 mW/m2。随着混合酶中淀粉酶的比例提高,SMFC库伦效率逐渐增加,当混合酶比为4∶1时,CE(库伦效率)可达18.3%,同时TCOD、TSS和VSS去除率分别为70.3%、66.7%和80.4%。因此,温度相对较低时,外加酶强化效果更明显;与单种酶相比,混合酶对SMFC产电性能和污泥减量化的强化效果更显著。

葡萄籽仁蛋白质混合酶提取工艺的优化

以酿酒葡萄籽为原料,将籽仁分离后,用干燥籽仁,在料液比1∶30条件下,对菠萝蛋白酶与木瓜蛋白酶等量混用量、酶解温度、时间、pH值4个因素,采用正交试验法对籽仁中蛋白质提取最佳工艺参数进行探讨。结果表明:各因素对蛋白质提取率的影响次序为酶量>温度>pH值>时间;最佳工艺参数:混合酶量为0.24 g/mL,提取温度为55℃,pH值为7.5,提取时间为50 min。在最佳工艺下酿酒葡萄籽仁蛋白提取率达92.7%。

混合酶处理对阔叶木浆打浆及留着性能的影响

研究混合酶制剂对阔叶木浆的作用效果。首先探讨不同打浆转数下纸浆的打浆度、强度和白度的变化情况,然后用不同的酶对浆料进行处理,研究强度及助留助滤性能。结果显示,在PFI打浆转数为30000r时打浆度可达41°SR,各项强度指标良好。经过酶处理后,纸浆强度均有不同程度的提高,其中以酶51064的作用效果最为突出,纸浆的滤水、留着性能改善效果显著,另外酶UL可以提高CaCO3留着率到50%左右,滤水性和滤液透光率也有所改善。

正交试验优化混合酶法提取蓝靛果色素的研究

采用混合酶法提取蓝靛果色素,考察了混合酶用量、pH值、酶解时间及酶解温度单因素的试验,利用正交试验优化了混合酶法提取蓝靛果色素的条件,确定最佳提取条件为:pH值4.0、酶解时间50min、酶解温度40℃、混合酶用量7mg/g,色素提取量为63.24mg/g。

复合酶对混合办公废纸的脱墨效果研究

分别用内切纤维素酶(EGI)和木聚糖酶(Xyn)复配得到的混合酶和由二者通过基因融合得到的融合酶,对混合办公废纸(MOW)进行脱墨。研究发现混合酶最佳处理条件为木聚糖酶与纤维素酶复配比例为2∶3(体积比)、p H7.0、酶处理时间60 min、脱墨温度55℃,融合酶最佳处理条件为酶用量0.6 IU/g、p H7.0、酶处理时间60 min、脱墨温度55℃。比较两种复合酶的脱墨效果发现,融合酶脱墨效果明显好于混合酶,融合酶脱墨纸页的白度明显高于混合酶,可以达到94.14%ISO,残余油墨量也较低,可以降为160 058(个/m2)。