清开灵口服制剂“成分-靶标-功效”网络分析及实验验证研究

探索清开灵口服制剂清热解毒、镇静安神作用的“成分-靶标-功效”网络调控机制。通过选取清开灵口服制剂中23个主要成分为研究对象,利用TCMSP数据库和SwissTargetPrediction数据库预测化合物潜在作用靶点,运用UniProt数据库校准靶点基因,借助OmicsBean分析系统与STRING 10数据库对靶点进行基因本体(Gene Ontology,GO)功能富集分析和KEGG信号通路分析,利用Cytoscape 3.8.2软件进行可视化处理,构建“成分-靶标-通路-药理作用-功效”网络。对23个主要成分和15个关键靶点进行分子对接,验证其结合能力。最后采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症模型,验证清开灵口服制剂中6个单体成分的抗炎作用。结果发现23个目标化合物可作用于236个相关靶点,干预33条关键信号通路,主要有花生四烯酸代谢、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)信号通路、TRP通道的炎性介质调节、cAMP信号通路、cGMP-PKG信号通路、Th17细胞分化、白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)信号通路、神经组织的配体-受体相互作用、钙信号通路、γ氨基丁酸能突触等,涉及抗炎及免疫调节、解热、抗惊厥等药理作用,构建了清开灵口服制剂“成分-靶点-通路-药理作用-功效”网络,分子对接结果表明活性成分与关键靶点的对接构象合理。体外细胞实验表明,清开灵口服制剂中6个单体成分(猪去氧胆酸、黄芩苷、绿原酸、异绿原酸C、表告依春、栀子苷)均能显著降低LPS诱导的RAW264.7炎性细胞上清中一氧化氮(nitric oxide,NO)、TNF-α和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的表达(P<0.05),推测以上6个成分可能为清开灵口服制剂的关键药效物质。结果表明,清开灵口服制剂中主要化学成分猪去氧胆酸、黄芩苷、绿原酸、异绿原酸C、表告依春、栀子苷、胆酸、异绿原酸A、γ-氨基丁酸等可能通过作用于IL-6、TNF、前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)、花生四烯酸5-脂氧合酶(arachidonate 5-lipoxygenase,ALOX5)、血管细胞黏附蛋白1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM1)、一氧化氮合酶2(nitric oxide synthase 2,NOS2)、前列腺素E2受体EP2亚型(prostaglandin E2 receptor EP2 subtype,PTGER2)、γ-氨基丁酸受体α亚基(gamma-aminobutyric acid receptor subunit alpha,GABRA)、γ-氨基丁酸B型受体亚基1(gamma-aminobutyric acid type B receptor subunit 1,GABBR1)、4-氨基丁酸转氨酶(4-aminobutyrate aminotransferase,ABAT)等关键蛋白靶点,干预了多个与炎症、免疫调节、发热、惊厥等相关的生物过程,初步揭示了清开灵口服制剂的药效物质及作用机制。