清热活血解毒复方对体外培养HaCaT细胞增殖和凋亡的影响

目的观察中药清热活血解毒复方对人永生化角质形成细胞株(HaCaT)增殖、凋亡和细胞周期的影响,探讨其治疗银屑病可能的作用机制。方法将不同浓度的清热活血解毒复方水提物分别作用于体外培养的HaCaT细胞,采用CCK-8法检测药物对细胞增殖的抑制作用及药物的有效浓度;采用倒置显微镜观察药物处理前后细胞的形态学改变;流式细胞术检测细胞周期的变化及凋亡率。结果清热活血解毒复方以时间和浓度依赖性方式抑制HaCaT细胞增殖,作用24、48 h其半抑制浓度(IC50)分别为23.40、20.24 mg/m L。细胞形态学和流式细胞仪检测发现药物以浓度依赖性方式干扰细胞周期,诱导细胞凋亡,细胞分裂周期阻滞于G0/G1期。结论清热活血解毒复方可能通过抑制HaCaT细胞增殖、诱导凋亡、影响细胞周期而发挥治疗银屑病的作用。

清热活血解毒复方(QHJD)对TNF-α诱导的HaCat细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究中药清热活血解毒复方(QHJD)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人永生化角质形成细胞株(Ha Cat)增殖和凋亡的影响,为治疗银屑病的可能作用机制提供依据。方法:体外培养Ha Cat细胞,将高、中、低(30,25,20 g·L^(-1))质量浓度的QHJD水提物分别作用于TNF-α诱导的Ha Cat细胞24 h,采用倒置显微镜观察QHJD水提物处理后的Ha Cat细胞形态学改变;采用CCK-8技术检测QHJD对TNF-α诱导的Ha Cat细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测QHJD对TNF-α诱导的Ha Cat细胞凋亡的影响;采用Western blot技术检测QHJD对TNF-α诱导的Ha Cat细胞B细胞淋巴瘤/白血病-xl(Bclxl),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达的影响;采用Real-Time PCR技术检测清热活血解毒复方对TNF-α诱导的Ha Cat细胞Bcl-xl,Bax mRNA表达的影响。结果:与空白组比较,QHJD各组细胞镜下单位面积的细胞均呈现数量减少,细胞体积缩小,细胞间连接变少或是消失,细胞间隙变大;QHJD各组均可抑制Ha Cat细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.05),其中QHJD中、高剂量组极显著(P<0.01);QHJD中、高剂量组可以促进Ha Cat细胞的凋亡,差异有统计学意义(P<0.05),其中高剂量组促进Ha Cat细胞凋亡更明显(P<0.01);QHJD各组Bax蛋白表达均有上升,差异有统计学意义(P<0.05);QHJD各组Bax mRNA表达均有上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:QHJD可能通过上调Bax蛋白和mRNA的表达,来诱导角质形成细胞的凋亡,进而抑制TNF-α诱导的Ha Cat细胞的增殖,以发挥治疗银屑病的作用。