清热润燥口服液止咳、平喘作用及急性毒性实验研究

目的评价清热润燥口服液的止咳、平喘作用及安全性.方法采用小鼠"浓氨水法"及豚鼠"喷雾法"观察清热润燥口服液在止咳、平喘方面的作用;以小鼠最大给药量、最大体积的药量一日1次或2～3次进行灌胃给药,给药后立刻观察动物反应,并连续观察14 d,测小鼠的最大耐受量(MTD).结果清热润燥口服液能延长小鼠咳嗽的潜伏期,减少咳嗽次数(P<0.05);明显能延长豚鼠哮喘的发作潜伏期(P<0.05).急性毒性实验连续观察14 d后,未发生动物死亡,体重均有所增长,观察未见异常反应,小鼠口服给药的最大耐受量是生药量为117.6 g原生药/(kg.d),相当于临床人用量的187倍.结论清热润燥口服液具有止咳和平喘作用.拟用日剂量在临床应用上是安全的.

清热润燥口服液对BALB/c小鼠免疫功能的影响

目的研究清热润燥口服液对BALB/c小鼠免疫功能的影响.方法经不同剂量的清热润燥口服液干预后,测定各组试验小鼠血清中的碳颗粒消除的速度来评价网状内皮系统的吞噬能力,小鼠网状内皮质系统吞噬功能作用;通过血清对异源绵羊红细胞的破坏作用(半数溶血,HC_(50))来检测药物对小鼠体液免疫功能的影响;应用ANAE染色法计数各组小鼠的T淋巴细胞比率,观察药物对小鼠细胞免疫功能的影响.结果清热润燥口服液3.90,9.75和19.50 mL/kg 3个剂量组均能明显增强试验小鼠的网状内皮系统的吞噬功能,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);9.75和19.50 mL/kg的清热润肺口服液能明显升高HC_(50),与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);9.75和19.50 mL/kg的清热润肺口服液组能明显增加试验小鼠的T淋巴细胞的比率,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论清热润燥口服液对正常小鼠的体液免疫、细胞免疫和网状内皮系统的吞噬功能均有明显增强作用.

HPLC法测定清热润燥口服液中苦杏仁苷的含量

目的采用HPLC法测定清热润燥口服液中苦杏仁苷含量。方法色谱柱Di Kma C18-EP（4.6mm×250mm,5μm）;流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液（7：93）;检测波长207nm,流速1.0m L/min,柱温25℃。结果苦杏仁苷进样量在0.215-4.300μg范围内有良好的线性关系,r=0.9999。回收率为98.91%,RSD=1.73%（n=9）。结论此法重现性好,准确,简便,适用于清热润燥口服液含量测定及质量控制。

清热润燥口服液抗炎、祛痰作用的实验研究

目的研究清热润燥口服液的抗炎、祛痰作用。方法通过小鼠背部琼脂肉芽肿实验及小鼠气管段酚红实验,观察清热润燥口服液在抗炎、祛痰方面的作用。结果清热润燥口服液能明显抑制肉芽肿的形成(P<0.05);能增加气管对酚红的排泌量(P<0.05)。结论清热润燥口服液具有抗炎作用、高剂量具有祛痰作用。

清热润燥口服液澄清制备工艺研究

目的:优选清热润燥口服液的澄清制备工艺。方法:选用ZTC1+1型天然澄清剂,以澄清剂的加入量、加入顺序、反应温度、静置时间为考察因素,设计L934正交实验。结果:最佳澄清工艺为加入量A%-B%为2%-4%、先加B组分再加A组分、在80℃条件下反应后静置2 h。结论:该工艺简单可行,生产成本较低,适用于清热润燥口服液的澄清制备。

HPLC法测定清热润燥口服液中橙皮苷的含量

目的采用HPLC法测定清热润燥口服液中橙皮苷含量。方法色谱柱Di Kma C18-EP（4.6×250 mm,5μm）;流动相为甲醇-6.1%冰醋酸（35：65）;检测波长283 nm,流速1.0 m L/min,柱温35℃。结果橙皮苷进样量在1.317~26.340μg范围内有良好的线性关系,r=0.9999。回收率为98.76%,RSD=1.30%（n=9）。结论此法重现性好,准确,简便,适用于清热润燥口服液含量测定及质量控制。

清热润燥口服液的定性鉴别研究

目的:建立清热润燥口服液的定性鉴别方法。方法:采用薄层色谱法对处方桑叶、陈皮、浙贝母、麦冬、茯苓进行定性鉴别。结果:薄层鉴别色谱斑点清晰、专属性强,阴性对照无干扰。结论:该方法专属性强、稳定性好、操作简便,可用于清热润燥口服液的定性鉴别。

紫外分光光度法测定清热润燥口服液中总多糖的含量

目的建立紫外分光光度法测定清热润燥口服液中总多糖含量的方法。方法采用苯酚-硫酸比色法,以D-无水葡萄糖为对照品,在波长490 nm处测定总多糖含量。结果 D-无水葡萄糖回归方程为A=0.0726x+0.1531,R=0.9998,线性范围0.260 mg^0.910 mg,平均回收率为100.37%,RSD为1.32%(n=6)。结论本方法稳定、快捷,可用于清热润燥口服液中总多糖的含量测定。

清热润燥口服液对哮喘小鼠气道炎症及气道黏液高分泌的影响

目的 探讨清热润燥口服液对哮喘小鼠气道黏液高分泌、肺泡灌洗液(BALF)中Treg/Th17相关细胞因子及趋化因子的影响。方法 将40只清洁级BALB/c雌性小鼠分为正常组、模型组、地塞米松(阳性药)组及清热润燥口服液低、高剂量组,每组8只,采用OVA复制哮喘小鼠模型。检测血清中IgE、OVA-IgE水平,取BALF进行白细胞总数计数和各类炎症细胞计数,取右肺中叶固定并进行PAS染色,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测BALF中气道黏液高分泌相关因子IL-13、IL-9、MUC5AC分泌,Treg/Th17相关因子IL-17A、IL-10水平,以及趋化因子IL-8、MCP-1水平。结果 清热润燥口服液高、低剂量组可延长哮喘小鼠引喘潜伏期,减少白细胞总数,降低哮喘小鼠气道黏液的分泌水平,改善BALF中IL-13、IL-9、MUC5AC、IL-17A、IL-10、IL-8、MCP-1水平和血清中IgE、OVA-IgE水平。结论 清热润燥口服液可能通过降低MUC5AC的分泌、调节Treg/Th17细胞失衡及趋化因子的水平来改善哮喘症状。

清热润燥口服液对哮喘小鼠ILC2s上下游细胞因子的影响

目的通过清热润燥口服液干预卵清蛋白(OVA)致敏的哮喘小鼠,观察其对哮喘小鼠Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2s)数量及其上下游细胞因子的影响。方法将BALB/c小鼠(雌性)分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组(地塞米松组,1 mg/(kg·d))、清热润燥口服液低、高(4.32、8.64 g/(kg·d))剂量组,共40只。使用OVA为致敏剂诱导哮喘小鼠模型,HE染色观察小鼠肺组织的病理改变;酶联免疫吸附(ELISA)测定检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中ILC2s上下游细胞因子Eotaxin、IL-25、IL-33、TSLP、IL-4、IL-5及IL-6含量;免疫组化法检测肺组织ILC2s上下游细胞因子IL-33和IL-5的表达;流式细胞术和免疫双荧光染色检测肺组织中ILC2s的数量及生成。结果与空白对照组比较,模型对照组小鼠出现肺组织炎性细胞浸润和支气管壁增厚的病理变化,BALF中ILC2s上下游细胞因子Eotaxin、IL-25、IL-33、TSLP、IL-4、IL-5及IL-6的含量升高(P<0.01),肺组织中ILC2s上下游细胞因子IL-33及IL-5的表达升高(P<0.01)、ILC2s的数量及生成增多(P<0.01)。与模型对照组比较,清热润燥口服液低高剂量明显改善哮喘小鼠肺组织病理损伤,降低BALF中ILC2s上下游细胞因子表达(P<0.01)、下调肺组织中ILC2s上下游细胞因子IL-33及IL-5的表达(P<0.05,P<0.01)和减少ILC2s的数量及生成(P<0.01)。结论清热润燥口服液可以降低OVA诱导的哮喘小鼠ILC2s的数量及其上下游细胞因子和下调肺组织中IL-33及IL-5的表达,进而起到防治哮喘的作用。

清热润燥方对哮喘小鼠气道反应及炎性反应影响的实验研究

目的:观察清热润燥口服液对哮喘小鼠模型的气道反应、肺组织病理学、气道炎症中IL-13诱导表达的黏蛋白5AC(MUC5AC)和水液代谢的水通道蛋白(AQP5)等因子的影响,探讨“润养与通利”辨治哮喘的理论。方法:采用卵蛋白制造小鼠哮喘模型。将72只小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药物对照组,清热润燥口服液高、中、低剂量组,各组药物作用后观察相关指标。结果:与模型组比较,清热润燥低剂量组吸气峰流速减少,气道炎症稍好转,BALF中IL-13、MUC5AC均减少;清热润燥中、高剂量组及阳性药物组吸气峰流速增加、气道炎症好转,IL-13、MUC5AC均减少,AQP5增加。结论:清热润燥方在改善哮喘小鼠气道炎性反应、减少MUC5AC及增加AQP5的表达方面具有积极作用。